牛磺酸对大鼠心肌缺血再灌注后肝损伤的保护作用

嵇月娥施文艳杨 俭

（1 江苏建康职业学院实验中心，江苏 南京 211800；2 南京医科大学药学院，江苏 南京 211800）

牛磺酸对大鼠心肌缺血再灌注后肝损伤的保护作用

嵇月娥1施文艳1杨 俭2

（1 江苏建康职业学院实验中心，江苏 南京 211800；2 南京医科大学药学院，江苏 南京 211800）

目的 观察牛磺酸对大鼠心肌缺血再灌注肝损伤时超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）含量和磷脂酶A2（PLA2）的影响。方法 大鼠随机分4组（n=10），对照组、牛磺酸低、中、高剂量组，采用大鼠冠状动脉结扎再通的方法，观察牛磺酸对大鼠心肌缺血再灌注后血清和肝组织匀浆SOD、NO和PLA2的影响。结果 牛磺酸各剂量组与对照组相比，血清和肝组织匀浆SOD含量明显提高，NO含量和血清PLA2浓度明显降低。结论 牛磺酸能够通过清除自由基，降低NO及自由基损伤，降低PLA2而减轻炎症反应和急性损伤，对心肌缺血再灌注肝损伤有一定的保护作用。

缺血再灌注；肝损伤；牛磺酸

心脏缺血/再灌注（I/R）在临床较多见，不仅引起心肌损伤、坏死，还可引起全身炎症反应，导致肺、肝、肾等器官的继发性损伤，其中肝损伤是非常重要的脏器损伤。牛磺酸是体内含量最丰富的氨基酸，已有实验[1-3]表明：牛磺酸具有清除氧自由基、抗脂质过氧化，调节细胞内钙稳态和稳定细胞膜等作用，是机体内源性细胞保护和抗损伤物质。本实验是观察牛磺酸对大鼠心肌缺血再灌注肝损伤时超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）含量和磷脂酶A2（PLA2）的影响，进一步探讨牛磺酸对大鼠心肌缺血再灌注肝损伤保护的机制。

1 材料与方法

1.1 材料

SD大鼠由南京医科大学实验动物中心提供；SOD、NO含量测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所；ELISA检测试剂盒购买于上海西唐生物科技有限公司。

1.2 方法

大鼠40只，雌雄不限，体质量180～250g，随机分4组（n=10），对照组、牛磺酸低、中、高剂量组，分别腹腔注射生理盐水、牛磺酸100、200、400mg/kg，5mL，30min后腹腔注射20%乌拉坦5mL/kg麻醉，采用大鼠冠状动脉结扎再通的方法，冠状动脉结扎30min后剪开结扎线再灌注2h，取颈动脉血，分离血清，迅速摘取肝脏，生理盐水冲洗，剪碎后进行组织匀浆，配成10%匀浆液，4000r/min离心20min，取上清液检测。

1.3 SOD、NO和PLA2测定

SOD测定：按试剂盒说明书操作步骤，制备空白管、测定管，550nm波长处蒸馏水调零进行比色，计算SOD含量。NO测定：按试剂盒说明书步骤操作，制备标准管、测定管和空白管，540nm波长处空白管调零进行比色，计算NO含量。PLA2测定：按试剂盒说明书，稀释标准品，设空白孔、标准孔、待测样品孔。450nm波长处空白孔调零测各孔的吸光度（OD值），计算样品浓度（μg·L）。

1.4 统计学分析

2 结 果

2.1 牛磺酸对大鼠心肌缺血再灌注后血清SOD、NO和PLA2的影响：与对照组相比，牛磺酸各剂量组SOD含量明显升高（P＜0.01），NO含量明显降低（P＜0.05，P＜0.01），PLA2浓度有明显降低（P＜0.01），见表1。

表1 各组大鼠血清SOD、NO和PLA2含量

2.2 牛磺酸对大鼠心肌缺血再灌注后肝组织匀浆SOD、NO和PLA2的影响：与对照组相比，牛磺酸各剂量组SOD含量明显升高（P＜0.01），NO含量在牛磺酸中、高剂量组明显降低（P＜0.01），PLA2浓度较对照组有明显降低（P＜0.01），见表2。

表2 各组大鼠肝组织匀浆SOD、NO和PLA2含量

3 讨 论

心肌缺血再灌注可引起肺、肾、肝、脑等多组织器官的继发性损伤，研究认为在其发生机制中起重要作用的包括氧自由基的生成、钙超载、白细胞和细胞因子等[2-4]。组织在缺血再灌注时释放大量氧自由基，引起脂质过氧化反应，以及细胞钙超载和细胞因子大量释放入血至各组织器官，引起白细胞浸润，炎症介质释放等，引起各组织器官细胞膜、线粒体、溶酶体等生物膜通透性增加，最终造成组织损伤。超氧化物歧化酶（SOD）是体内重要的抗氧化酶，当体内自由基生成增多时，它与超氧阴离子反应生成过氧化氢，再由过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化酶转变成为水， 清除自由基，可对抗因氧自由基对细胞造成的损伤，它是体内清除自由基的首要物质。本实验中牛磺酸各剂量组均可明显提高大鼠心肌缺血再灌注后血清和肝组织中SOD活性，减少过量NO的产生，从而减轻缺血再灌注引发的自由基对肝组织的损伤。

磷脂酶A2（PLA2）是一种水解酶，亦是花生四烯酸、前列腺素及血小板活化因子等生物活性物质生成的限速酶，所产生的脂质介质在炎症和组织损伤时起关键性作用，参与炎症及急性损伤的致病过程。PLA2在缺血再灌注的肝损伤过程中发挥了重要的作用[4-5]。本实验中牛磺酸可以降低大鼠心肌缺血再灌注血清和肝组织中PLA2浓度，减轻肝损伤。

本实验发现牛磺酸在心肌缺血再灌注损伤中的运用，可以提高血清和肝组织SOD含量，降低NO含量和PLA2浓度，提示牛磺酸可以减轻大鼠心肌缺血再灌注对肝组织的损伤。其作用机制可能是通过清除自由基、防止脂质过氧化、提高机体抗氧化能力、改善细胞内钙超载、抑制过量NO生成、抑制PLA2相关的炎症反应，减少组织的急性损伤，从而对大鼠心肌缺血再灌注肝损伤起到保护作用。

[1] 王银环,董淑云,张娜,等.牛磺酸对大鼠肢体缺血再灌注后肝脏损伤的保护效应[J].第四军医大学学报,2006,27(22):2047-2050.

[2] 门秀丽,张连元,孙树勋,等.牛磺酸对大鼠肢体缺血/再灌注后肺组织损伤的保护作用[J].中国应用生理学杂志,2004,20(3):229-231.

[3] 鞠浩爽,尚跃丰,罗鹏,等.牛磺酸增强渐增再灌注心肌保护作用的实验研究[J].中国药理学通报,2012,28(6):810-814.

[4] 张金池,郑国富,吴明祥,等.异甘草酸镁对大鼠肢体缺血再灌注肝损伤时磷脂酶A2的影响[J].中华肝脏病杂志,2012,20(7):537-541.

[5] 徐勇,涂植光.两类磷脂酶A2抑制剂对大鼠内毒素性肝损伤的保护作用[J].国际检验医学杂志,2007,28(10):907-909.

R542.2+2

B

1671-8194（2013）34-0069-02