脉络舒通颗粒对创伤性下肢骨折大鼠炎性介质的影响

吕鹏飞，刘宁青，梁玉龙，梁枫林，武治红，姚景春

(1河北医科大学第三医院，石家庄050051;2石家庄市井陉县中医院;3山东新时代药业动物中心)

下肢深静脉血栓形成(DVT)是创伤性下肢骨折患者最常见并发症，骨折后血栓形成可延误最佳治疗时机，且一旦栓子脱落形成肺栓塞易致生命危险。研究证实，创伤后 DVT与炎性介质关系密切［1］。因此，骨折后预防DVT是临床研究的热点。脉络舒通颗粒为中药制剂，药理研究证实其有较好的抗炎、抗凝作用［2］。为探讨脉络舒通颗粒对创伤性下肢骨折大鼠炎性介质的影响，2011～2012年，我们进行了相关研究。现报告如下。

1 材料与方法

1．1 材料 Wistar大鼠90只，体质量250～300 g，购自山东新时代药业动物中心。脉络舒通颗粒为山东新时代药业公司产品，低分子肝素由天津红日药业公司生产。IL-1β、IL-6、CRP试剂盒由解放军总医院科技开发中心提供，TNF-α试剂盒由湖南永和阳光科技公司提供。

1．2 方法

1．2．1 动物造模方法 90只大鼠饲养2周后制作动物模型。造模方法［3］:腹腔内注射1%戊巴比妥钠1 mL/kg，麻醉生效后，用自制打击装置打击其双侧大腿近端外侧，瞬间打击能量为4．2 J，经X线拍片证实骨折后，行髋人字石膏固定。然后将大鼠随机分为3组，均予颗粒饲料饲养。实验组30只服用脉络舒通颗粒20 g，3次/d;对照组30只皮下注射低分子肝素200 IU/kg，1次/d;空白对照组30只给予纯化水。

1．2．2 检测方法 3组在造模与相应治疗2 h及第3、7、10 天，各取10 只大鼠的眼眶血 2 mL，3 000 r/min离心后，取血清置于－80℃冰箱保存备用。采用 ELISA 法检测血清 IL-1β、IL-6、CRP、TNF-α，严格按试剂盒说明书操作。

1．2．3 统计学方法 采用SPSS12．0统计软件，计量资料用¯±s表示，组间比较用t检验。P≤0．05为差异有统计学意义。

2 结果

3组各时间点各检测指标结果见表1。表1显示，实验组、对照组各时间点的血清IL-1β、IL-6、CRP、TNF-α水平均低于空白对照组(P＜0．05或＜0．01)。

3 讨论

创伤性下肢骨折常伴有软组织损伤及骨质结构破坏，可引起体内炎症因子增高，这些炎症介质作用于创伤后的机体产生一系列反应，最终表现为肢体肿胀［4］。IL-6是炎症反应急性期的重要介质，又称前炎症因子，其能加剧创伤后其他炎症介质产生［5］，可能是血栓形成的启动因子之一，其作用贯穿于血栓形成的整个过程。CRP为急性期反应蛋白，其血浆水平与炎症发生及严重程度有显著相关性［6］。TNF-α是炎症反应的主要介质之一，它能通过激活细胞因子网络系统而诱发全身炎症反应，导致细胞坏死、血栓形成［7］。IL-1β 能诱导与 TNF-α相似的生理和代谢变化，并与TNF-α产生协同作用，在全身炎症反应中起核心作用［8］。

表1 3 组不同时间血清 IL-1β、IL-6、CRP、TNF-α水平比较(pg/mL±s)

表1 3 组不同时间血清 IL-1β、IL-6、CRP、TNF-α水平比较(pg/mL±s)

注:与空白对照组同期比较，*P ＜0．05，#P ＜0．01;与对照组同期比较，★P ＜0．05

组别 n治疗后2 h 3 d 7 d 10 d实验组30 IL-1β 64．45±15．95＊★ 22．52± 8．57＊★ 18．68± 8．49＊★ 18．14± 8．52＊★IL-6 21．23± 8．98＊★ 38．23± 6．01＊★ 30．75± 8．47＊★ 21．01± 4．01＊★CRP 0．31 ± 0．08* 0．30 ± 0．08* 0．33 ± 0．99* 0．31 ± 0．05*TNF-α 9．02 ± 2．45 9．02 ± 3．45 8．82 ± 2．52 8．45 ± 3．43对照组 30 IL-1β 26．74 ±11．65# 35．12 ±17．11# 38．78 ± 7．01# 30．71 ±10．79#IL-6 57．12 ±14．87# 141．26 ±25．51# 96．44 ±18．43# 81．51 ±15．98#CRP 0．39 ± 0．06# 1．18 ± 0．31# 0．96 ± 0．25# 0．87 ± 0．21#TNF-α 9．56 ± 3．54# 11．98 ± 4．41# 11．41 ± 3．34# 11．02 ± 4．48#空白对照组 30 IL-1β 28．14 ±12．01 49．57 ±18．51 41．23 ±20．14 35．42 ± 8．01 IL-6 65．45 ±15．95 196．45 ±30．95 157．44 ±27．71 135．56 ±28．25 CRP 0．38 ± 0．06 1．38 ± 0．37 1．42 ± 0．27 1．21 ± 0．24 TNF-α 10．52 ± 2．54 13．52 ± 5．54 12．42 ± 8．43 11．14 ± 3．41

创伤后骨折属于中医“气虚血瘀”范畴，按照“损者益之”的原则，治以益气活血化瘀。现代药理研究发现，脉络舒通颗粒有益气利湿、活血化瘀功效，具有很好的抗凝作用［1］。刘建龙等［9］报道，DVT多发生在下肢严重创伤后3 h～5 d、平均2．6 d。Jezovnik等［10］研究发现，DVT 血清CRP、IL-6 等炎性因子和血管内皮功能标志物vwF、P-选择素均明显高于正常。Fox等［11］分析了下肢DVT与炎症的关系，认为CRP可引起人体血管内皮细胞合成炎症介质及凝血因子，促进血栓形成。本研究发现，实验组创伤后2 h各炎性因子开始升高，3 d时达高峰，1周后逐渐下降。各炎性因子升高的时间与创伤后DVT发生时间大致一致，在一定程度上说明炎性因子水平升高是DVT的危险因素，二者关系密切。本研究还发现，动物造模后IL-6、CRP上升较快，3 d时为2 h的3～4倍，然后开始下降。IL-6作为肝细胞刺激因子，其水平升高能刺激肝细胞合成和分泌多种蛋白质(包括CRP)，故创伤后IL-6升高常伴随CRP升高。本研究中的IL-6、CRP水平为实验组＜对照组＜空白对照组，表明脉络舒通颗粒能降低创伤后的IL-6、CRP水平。另外，本研究显示实验组TNF-α、IL-1β在创伤3 d达到高峰后迅速下降，且下降幅度大于CRP、IL-6，说明其在体内的半衰期较短，且TNF-α变化趋势与IL-1β基本一致。本研究中的TNF-α、IL-1β水平为实验组＜对照组＜空白对照组，表明脉络舒通颗粒能明显降低创伤后的TNF-α、IL-1β 水平。

综上所述，本研究显示大鼠创伤后早期应用脉络舒通颗粒可减轻炎性介质释放，对创伤后DVT有积极的预防作用。

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