聚苯乙烯—二乙烯苯对肝衰竭患者血浆胆红素及肿瘤坏死因子吸附作用的观察

姜达琳，陆 伟

(1天津医科大学研究生院，天津市第二人民医院，天津300192;2天津市第二人民医院)

人工肝支持治疗是治疗肝衰竭的重要手段［1］。血浆灌流是目前人工肝支持系统的主要治疗方法。胆红素是诊断肝衰竭和评价病情程度的重要指标，对判断血浆灌流效果有重要意义。目前血浆灌流治疗肝性高胆红素血症已取得一定成效［2，3］，该技术的核心是吸附树脂，良好的吸附树脂应具备吸附能力强、吸附范围广，对白蛋白(ALB)、K+、Na+、Cl-等影响小的特点。本研究选用新型树脂聚苯乙烯—二乙烯苯(PS-DVB)进行静态吸附试验，并与目前临床常用的BR350树脂型吸附柱和HA330Ⅱ型树脂作为对照，评价其疗效与安全性。

1 材料与方法

1．1 材料

1．1．1 吸附树脂 采用悬浮聚合法制备PS-DVB微球。称取St、DVB、BPO，搅拌混合均匀后得到油相;在4倍油相体积的纯水中溶解一定量的明胶、PVA、氯化钠、亚甲基蓝后得到水相。将二乙烯基苯(交联剂)、1%过氧化二苯甲酰(引发剂)的苯乙烯作为油相，与含10%氯化钠和1%明胶的水相于50℃混合分散(油相与水相的体积比为1∶4)。调节搅拌速度，待液滴大小合适、粒度均匀后，以5℃/10 min的速度升温至75℃反应2 h，再以相同速度升温至90℃反应2 h，升温至95℃反应4 h，得到PS微球，经丙酮抽提2 h后减压干燥备用。

1．1．2 血浆 选择2009年1～12月天津市第二人民医院收治的12例慢性肝衰竭患者，男8例、女4例，年龄22～65(42．09 ±11．08)岁。参照 2006年制定的《肝衰竭诊疗指南》［4］确诊。患者均为乙型肝炎病毒感染，其中合并戊型肝炎病毒感染2例，合并丙型肝炎病毒感染1例，合并酒精性肝损害2例。每例患者取血浆置换所换出的血浆400 mL，分别标记为1～12号。

1．1．3 仪器 25型摆动式振荡水浴箱(上海科涌实验仪器有限公司)，检测仪(东芝 TBA-120FR型全自动生化分析仪)

1．2 吸附方法 将BR350树脂型吸附柱(Asahi，日本)、HA330Ⅱ型树脂(广东珠海丽珠医用生物材料有限公司)、PS-DVB按常规方法用稀酸处理24 h，再用稀碱处理12 h，最后用蒸馏水洗涤至中性。对1～12号血浆分别进行吸附试验，将处理好的3种吸附剂1 mL分别置于15 mL试管中，加入采样血浆3 mL，水浴箱37℃恒温振荡1、2 h，静置2 min后提取吸附后血浆。采用东芝TBA-120FR型全自动生化分析仪检测吸附前后血浆中总胆红素(TBIL，钒酸氧化法)、ALB(溴甲酚绿法)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α，ELISA 法)及 K+、Na+、Cl-(干化学法)的浓度。

1．3 统计学方法 采用SPSS13．0统计软件，计量资料的比较采用方差分析。P≤0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 三种吸附树脂对TBIL的吸附作用 见表1。

表1 三种吸附树脂对TBIL的吸附作用

2．2 三种吸附树脂对TNF-α的吸附作用 见表2。

表2 三种吸附树脂对TNF-α的吸附作用(pg/mL，¯x±s)

表 3 三种吸附树脂对 ALB、K+、Na+、Cl－的影响(±s)

表 3 三种吸附树脂对 ALB、K+、Na+、Cl－的影响(±s)

注:与本组吸附前比较，*P＜0．05;

吸附树脂 n ALB(g/L)吸附前 吸附1 h 吸附2 h K+(mmol/L)吸附前 吸附1 h 吸附2 h Na+(mmol/L)吸附前 吸附1 h 吸附2 h Cl-(mmol/L)吸附前 吸附1 h 吸附2 h PS-DVB 12 31．1±5．3 30．0±4．6 30．1±4．5 4．9 ±1．3 4．9±1．2 4．6±1．4 127．3 ±9．2 130．1± 6．5 134．5±13．2 95．9±8．6 97．9 ±7．3 97．2 ±6．1 BR350 12 33．1±5．3 29．5±5．2 27．9±4．6* 4．9 ±1．3 4．8±1．2 4．1±1．0 127．3 ±9．2 131．5±11．2 135．5± 8．7 95．9±8．6 100．1 ±6．6 96．8 ±6．3 HA330 12 33．1±5．3 30．1±2．5 27．6±1．7* 4．9 ±1．3 4．3±1．3 4．5±1．6 127．3 ±9．2 131．7±10．2 126．2 ± 6．1 95．9 ±8．6 96．5 ±10．2 97．0 ±7．1

2．3 三种吸附树脂对ALB、K+、Na+、Cl-的影响见表3。

3 讨论

肝衰竭是由多种因素引起肝细胞严重损害，导致其合成、解毒和生物转化等功能发生严重障碍。肝衰竭导致严重的代谢紊乱和大量代谢毒素在体内蓄积，引起各种严重并发症。其中高浓度胆红素可产生细胞毒性，导致肝功能进一步恶化，多器官功能衰竭;TNF-α作为重要的促炎因子发挥重要作用，可导致多脏器功能不全，且与病情程度相关［5］。肝衰竭采用单纯内科综合治疗难以取得满意疗效，病死率很高，文献报道为60% ～80%［6］。人工肝支持治疗是治疗肝衰竭的重要手段。人工肝支持系统分为非生物型、生物型和混合型三种。非生物型人工肝支持治疗是临床广泛使用并证明确实有效的方法，包括血浆置换、血浆灌流、连续性血液透析滤过等。血浆置换治疗可清除致病因子，延缓病情进展，但因应用异体血浆，可造成过敏反应、输血反应发生，且有感染各种新的病毒性疾病的可能。血浆灌流作为非生物性人工肝的重要治疗方法，可部分代替血浆置换治疗，克服了血浆用量限制、血浆过敏、输血感染风险等不良反应，是目前国外治疗急慢性肝衰竭的主要方式［7，8］。目前血浆灌流治疗的主要问题是胆红素的清除效果还有待提高。国外虽然有特异性吸附胆红素的吸附剂［9，10］上市，并应用于临床，但价格昂贵，在我国难以广泛应用。国产吸附剂虽然也有相应的产品出现，但其安全性和有效性均有待进一步提高。近年来主要的树脂吸附材料有HA系列、HB-H-6 树脂及HB-H-7 树脂［11］、壳聚糖系列、聚丙烯酸酯系列、B-环糊精系列、亲和膜等系列，国外的吸附剂主要是日本Asahi公司生产的BR350树脂型吸附柱，是目前市售同类产品中对血浆胆红素具有较好的选择吸附性能的产品，但成本较高［12］。

PS-DVB属中性大孔树脂，其吸附作用主要是通过物理作用，其特点是吸附容量大、吸附速度快、机械强度高，对肝衰竭患者血液中的细胞因子、胆红素、芳香族氨基酸等均可有效吸附。本研究显示，PS-DVB、BR350树脂及HA330Ⅱ型树脂均可有效吸附肝衰竭患者血浆中的 TBIL和TNF-α，其中 PSDVB的吸附效果最佳，随时间延长，树脂趋于饱和，三种树脂的吸附能力均下降。对于TNF-α，PS-DVB的吸附能力下降较少，表明PS-DVB对TNF-α具有更大的吸附量，并且在观察时间内对TNF-α的吸附量随时间增加而增加。而对TBIL，PS-DVB表现出吸附速度较快的特性，在临床应用时有利于短时间内完成对TBIL的吸附，减少治疗时间，降低因长时间血浆灌流出现不良反应的发生率。这可能与TBIL分子量较小及其含有4个吡咯环，其分子中的2个丙酸基侧基可以作为吸附树脂上功能基作用的位点，通过相互间的氢键和静电等作用达到吸附目的有关。

本研究显示，PS-DVB、BR350树脂和HA330Ⅱ型树脂对ALB均有不同程度的吸附，PS-DVB对ALB影响小，随时间延长，三种树脂对白蛋白的吸附量均有增加，但组间比较无统计学差异。提示PS-DVB对患者血浆ALB影响较小，有利于临床应用;同时其对蛋白结合的毒素还有一定的吸附作用。随时间延长，ALB下降不明显，但TBIL、TNF-α仍下降，一方面与吸附剂对TBIL、TNF-α吸附有关，另一方面可能存在部分TBIL、TNF-α与蛋白分离，未携带TBIL、TNF-α的蛋白可发挥应有的作用。

PS-DVB、BR350树脂和HA330Ⅱ型树脂对K+、Na+、Cl-的吸附作用均表现为迅速饱和状态，组间比较无统计学差异。随时间延长，三者对K+、Na+、Cl-的吸附无明显变化，对电解质的吸附作用与时间不呈线性关系。因此，在临床进行血液灌流治疗前，为使树脂颗粒充分膨胀，提高治疗效率，防止灌流器凝血堵塞，减少全身化肝素用量，可在使用前应用肝素生理盐水充分浸泡树脂进行预冲洗，从而可以减少吸附过程中对K+、Na+、Cl-的影响。

综上所述，PS-DVB可吸附肝衰竭患者血浆中的多种物质，其制备过程较为简便、经济，通过进一步优化和开发，有望在人工肝支持系统中得以应用，具有良好的应用前景。

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