冰冻解冻红细胞的制备、保存及临床应用

郝晶茹

（吉林市红十字中心血站，吉林 吉林 132000）

冰冻解冻红细胞的制备、保存及临床应用

郝晶茹

（吉林市红十字中心血站，吉林 吉林 132000）

目的 通过探讨10份-65℃以下保存冰冻红细胞制备解冻红细胞的方法，并对其影响质量的相关因素进行分析。方法 使用ACP215血液处理机制备冰冻解冻红细胞。结果 应用该方法制备的解冻红细胞经检测，红细胞回收率、残留白细胞、残留血小板、残留甘油含量、上清游离血红蛋白量及体外溶血试验等质量因素差异均无显著性且均达到了国家标准。结论 该方法适用于临床上稀有血型患者的输血需求。操作简便，高效，冰冻红细胞保存时间长，质量稳定，有效提高了临床用血的安全性。

冰冻红细胞；解冻红细胞；制备；安全

人类Rh（D）血型系统是红细胞血型中仅次于ABO血型的重要血型系统，Rh（D）阴性者约占总人群数的3‰～5‰，而血液常规保存期为21～35d，为避免Rh（D）阴性血液常因临床无需要而造成浪费，满足Rh（D）阴性患者的临床用血需要，避免延误临床急症抢救时间，我站开展了Rh（D）阴性红细胞冷冻保存项目。该方法使长期保存红细胞的一种理想方法，降低或完全停止了红细胞代谢活动，使保存期长达10年，为稀有血型患者提供了临床急救血液保障，也填补了吉林地区供血的空白，血站的实力也上了一个新台阶[1-6]。

过去，Rh（D）阴性血液临床预约时，招募、体检、采血、检验耗时长。现在，遇有临床Rh（D）阴性抢救用血，2h可将解冻的Rh（D）阴性解冻红细胞供给临床，为抢救患者争取了宝贵时间。目前我站已经建立了Rh（D）阴性冰冻红细胞储备库，不仅保证了临床抢救用血需要，而且使血站的供血实力更上了一个新台阶。

1 冰冻、解冻红细胞的制备方法

1.1 材料与方法

1.1.1 试剂、耗材及主要设备

①试剂及耗材：红细胞悬液或全血1袋、 复方甘油溶液（北京博德桑特输采血器材科技开发中心）、9%氯化钠溶液（四川南格尔生物医学公司）、800毫升转移袋（四川南格尔生物医学公司）、加甘油管路（美国血液技术公司）、去甘油管路（美国血液技术公司）、0.9%生理盐水（山东威高集团）。②主要设备：ACP215全自动血液处理机（美国血液技术公司）、超低温冰箱（-65℃以下，日本三洋公司生产）、CR-7大容量低温离心机（日立公司）、血液解冻机（长沙仪器仪表有限公司）、全自动无菌接管机（德国费森尤斯公司）、库尔特血细胞计数仪。

1.2 制备方法

1.2.1 甘油化方法：将红细胞悬液或全血离心去上清，将浓缩少白细胞红细胞移至800mL转移袋中，使用ACP215血液处理机，设定甘油化程序，使滴速先慢后快，加入复方甘油溶液，边加边振荡，1单位红细胞加甘油160mL（2单位红细胞加甘油320mL）。在室温静止30min，使甘油充分与红细胞混合，轻离心去除多余的甘油溶液，排气并摇匀。将甘油化的红细胞装盒，使袋体保持平整，打印冰冻红细胞标签粘贴在袋体上做好标识，送-65℃以下低温冰箱速冻保存。

1.2.2 去甘油：将冰冻红细胞用血液解冻机在37℃水浴中解冻冰冻红细胞，不断摇动使血袋与水充分接触，加速其融化，完全融化至无冰晶。但不能用力，以避免红细胞受到机械性损伤，融化后置室温静置10min，使用ACP215血液处理机，加入9%NaCl溶液洗涤，平衡再用0.9%NaCl溶液反复洗涤。成品为解冻悬浮红细胞供临床应用。

1.3 流程图

（CPDA-1）全血或红细胞悬液→离心移出血浆及上清液→浓缩少白细胞红细胞→加甘油（室温静止平衡半小时，离心去除多余甘油保存）→甘油化红细胞→置-65℃以下冰箱保存→冰冻红细胞→37℃水浴解冻→加9%NaCl溶液→0.9%NaCl反复洗涤→去甘油化红细胞→加0.9%NaCl溶液240mL制备成 解冻红细胞。

1.4 使用ACP215血液处理机制备的去甘油红细胞检测结果，见表1。

表1 使用ACP215血液处理机制备的去甘油红细胞检测结果()

表1 使用ACP215血液处理机制备的去甘油红细胞检测结果()

观察指标(n=10)解冻悬浮红细胞质量标准红细胞回收率86.34±3.54红细胞回收率≥80%残留血小板0.79±0.23残留血小板≤1%残留白细胞0.73±0.16残留白细胞≤1%上清血红蛋白0.94±0.15上清血红蛋白≤1g/L残余甘油含量4.36±0.57残余甘油含量≤10g/L体外溶血实验6.49±0.38体外溶血实验≤50%细菌培养阴性阴性

2 制备冰冻、解冻红细胞的注意事项

2.1 保养液为CPDA-1的血液制剂在6d内制备冰冻，这是保持冰冻红细胞活性的基础。在加入甘油时一定要使血液制剂的血袋始终保持震荡状态，让甘油缓慢均匀的和红细胞混合。甘油加完毕后一定要静止30min。另外，加甘油前和加完甘油都要排尽血袋内空气，如果血袋内气泡太多形成大的气泡的过程中，小气泡不断破裂，这样对红细胞是一个损害。血袋内有空气，在冰冻的过程中也易损坏血袋。甘油化是细胞外环境有低渗到高渗的过程，若加入甘油速度过快，可造成红细胞内外渗透压来不及转换，造成红细胞内渗透压骤降而水肿，最终导致溶血。

2.2 将冰冻的红细胞制备成解冻甘油红细胞关键的第一步是在-65℃以下冰箱取出红细胞后要迅速浸入37～40℃水浴中，水浴箱的水一定要浸没血袋，要不断摇动，使血袋与水充分接触，加速其融化，但不能用力去挤压血袋。减少红细胞在溶化过程中的机械损伤，溶化好的血袋要在室温静止10min，让红细胞得到充分休息，增强红细胞的抗破坏能力。解冻红细胞经复温、洗涤后应在24h尽快输注。

3 适应证

解冻红细胞主要应用于突发事件下的血液供应、肿瘤放化疗，患者自体血的回输，稀有血型患者、从事辐射工作人员、战备贮存等。

4 讨 论

经过解冻洗涤的红细胞由于去除了绝大部分白细胞、血小板和血浆蛋白，减少了输血反应（发热反应、HLA同种免疫反应等）。对于血液病、阵发性睡眠性血红蛋白尿、肾功能异常以及心功能不全的患者输用很有益处。输入人体后氧的释放能力比常规方法保存的血液要好。另外，解冻红细胞由于去除了细胞代谢产物，抗凝剂，即使大量输注也可避免以及减少肝炎等传染病的传播。解冻红细胞质量稳定，但制备方法简便高效，在临床应用中意义重大。

[1] 杨冬燕,段恒英,王娟娟,等.全自动细胞处理系统制备冰冻红细胞的关键控制点及效果评价[J].重庆医学,2009,38(9):1078-1079.

[2] 马庆,陆瑶,徐雪瑾,等.红细胞深低温长期保存效果的探讨[J].中国输血杂志,2007,20(1):45-47.

[3] 王惟.冰冻红细胞的特点和制备、保存及临床应用[J].中外医疗,2012,31(23):37.

[4] 孙迪,杨建,吴晓黎,等.红细胞在-65℃保存过程中代谢及体外功能变化的探讨[J].检验医学与临床,2011,8(3):312-314.

[5] 中华人民共和国国家标准《全血与成分血质量标准》[S].GB 18469-2001.

[6] 沈莉,李建民,梁晓虎,等.过滤后血液制备冰冻红细胞的质量探讨[J].河北医药,2008,30(12):2001-2002.

R331.1+41

B

1671-8194（2013）28-0057-02