Auto Vue Innova全自动血型仪在ABO及Rh(D)血型鉴定中的应用价值

莫 筠，陈俭荣，谭洪扬，黄碧红，李新亮

(台山市人民医院，广东台山529200)

ABO及Rh(D)血型鉴定是临床常规检测项目之一，正确的血型鉴定是临床输血安全的前提和基础。目前，血型检测的方法有多种，如玻片法、试管法、微柱凝胶法，其中微柱凝胶法因其灵敏度高［1，2］在各级医院应用广泛。2012年5～8月，我院采用Auto Vue Innova全自动血型分析仪、微柱凝胶法对4 655份血标本进行ABO正反定型及Rh(D)血型鉴定，同时与手工试管法进行对照。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 同期我院住院部送检血型的EDTA-K2抗凝血标本4 655份，受检者年龄1 d～103岁。单克隆抗A、抗B血清，上海血液生物医药有限责任公司;单克隆抗D(IgM+IgG)血清，Millipore(UK)Ltd;Coombs试剂，上海血液生物医药有限责任公司。Auto Vue Innova全自动血型分析仪及其配套试剂卡，美国强生公司。

1.2 方法

1.2.1 自配A、B、O 型红细胞 取 A、B、O 型 EDTA-K2抗凝血标本各3～5份。要求:供者年龄15～50岁，血常规结果:白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、红细胞比积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)均在正常范围内，且标本无黄疸、溶血、脂浊。将同血型标本混合，用无菌生理盐水洗涤3次，每次弃上清液时，将上层灰白色的WBC、血小板层弃去;最后在20 mL生理盐水中加入1 mL浓缩RBC，配制成4%的RBC悬液，置于4～8℃冰箱中保存。使用前轻轻颠倒混匀，取4 mL放入仪器专用试瓶及试剂盘中。

1.2.2 检测方法 ①手工试管法:按《全国临床检验操作规程》第3版［3］进行操作。②微柱凝胶法:采用Auto Vue Innova全自动血型分析仪及其配套试剂卡，一卡六孔，分别为抗 A、抗 B、Rh(D)、阴性对照孔、A RBC、B RBC。将血标本按1 000 g离心5 min，分离出血浆和RBC。Auto Vue Innova全自动血型分析仪能自动对标本进行条形码扫描，在对试剂卡进行读卡与开孔后，仪器自动对标本进行吸样、稀释RBC、加样、离心，反应级别评判、结果判读、图像保存及结果传输等。如出现正反定型不合、凝集反应＜++以及仪器其他读卡错误等，仪器会报警提示，实验室根据不同情况进行处理。

1.2.3 一次性判读成功标准 仪器法是指全自动仪器能自动判读结果，并自动传输至LIS系统，不需人工复读、重新检测或手工复查。手工法指正反定型相符。

1.2.4 统计学方法 采用SPSS11.0统计软件，计数资料比较采用χ2检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种方法对ABO正反定型检测结果比较Auto Vue Innova全自动血型分析仪一次性判读成功率为 91.04%(4 238/4 655)，手工法为 94.95%(4 420/4 655)，手工法高于仪器法(χ2=54.63，P ＜0.05)。仪器法中因为仪器及试剂卡原因导致一次性判读失败140份，占33.57%(140/417)。在排除仪器及试剂卡原因引起的ABO正反定型判读失败后，对标本进行重新分析，ABO正反定型判读成功率提升至94.05%，(4 378/4 655)，与手工试管法比较差异无统计学意义(χ2=1.92，P ＞0.05)。仪器法及手工法一次性判读失败原因见表1。

表1 仪器法及手工法ABO血型一次性判读失败原因(份)

2.2 两种方法对Rh(D)血型检测结果比较 仪器法对Rh(D)血型检测一次性判读成功率别为99.96%(4 653/4 655)，手工法一次性判读成功率为100%，两种方法比较差异无统计学意义(χ2=2.00，P＞0.05)。仪器法不能成功判读的2份均是仪器未能准确加样，使试剂卡无被检标本RBC，反应孔为空。

2.3 两种方法每小时完成工作量 仪器法每小时检测标本56份，手工法为34～46份、平均42份，主要是不同操作者熟练程度不一所致。仪器法检测速度较手工法快。

3 讨论

手工试管法虽是血型鉴定的经典方法，但操作繁琐，特别是大批量标本检测中易出现差错。微柱凝胶法因其灵敏度高，在各级医院应用广泛。Auto Vue Innova全自动血型分析仪使用微柱凝胶法检测血型，并且能自动实现标本识别、检测、结果判读及保存。本研究结果显示，仪器法一次性判读成功率为91.04%，低于王敏等［4］报道的 99.71%，亦低于同组试验的手工法。主要原因:①反应柱中检测出气泡:多是由于试剂卡在运输途中碰撞、颠倒所致;②反应孔为空:主要是仪器在加样中未能将标本准确加入反应孔或加样针堵塞;③反应柱顶端线形或纤维蛋白:原因是标本中有微小凝集块或纤维蛋白形成，在稀释加样中进入反应孔，经离心后，浮在玻璃珠上层，引起已凝聚的RBC不平整，或未凝聚的RBC在反应孔底，而含有少量RBC的纤维蛋白浮在玻璃珠上层，使仪器不能正常判读;④RBC过多或过少:细胞过多，多见于反定型孔中，由于A、B RBC试剂放置试剂架上时间过长，或使用过久，致水份挥发，使A、B RBC浓度升高;或者部分标本血浆不足，在反定型中吸样针在吸取血浆时，同时吸入标本RBC，此情况多见于新生儿;RBC过少，主要见于正定型孔中，因为标本RBC量少或有凝块，试剂针吸取标本中RBC不足，也可见于试剂针不完全堵塞。仪器由于以上原因引起正反定型不符而报警，可通过调整仪器、挑去标本中小凝块、复测等方法解决。

仪器法与手工法中引起一次性判读失败的主要原因是标本抗体减弱，分别占59.17%和91.06%，此类标本多见于新生儿和婴儿，由于其生理原因［5，6］，虽然正反定型不符，但其血型报以正定型结果。在仪器法中，尚有部分标本抗原、抗体减弱，但在仪器的微柱凝胶法中凝集表现为“+”或“++”，此类标本占仪器法中不能一次性判读成功的11.75%，仪器虽然能判读结果，但仍需要操作者进一步肉眼读卡确认;而在手工法中，此类凝集不良的结果均由操作者直接肉眼判读，故表现为仪器法一次性判读成功率低，由此也反映出Auto Vue Innova全自动血型分析仪在结果判读上的严谨要求，不放过任何一个可疑结果，确保结果的准确性。

本文因特异或非特异性抗体原因引起正反定型不符，仪器法和手工法分别有12份和16份，占总标本数的0.26%和0.34%，经Coombs试验确认，特异性抗体阳性有8份，其余为非特异性抗体，主要是冷凝集或白蛋白/球蛋白比例失调，相对而言，冷凝集或白蛋白/球蛋白比例失调对仪器法的干扰小于试管法，这与不同操作者在使用试管法在检测过程中，主观判断及操作有关。在试管法中，由于人为操作错误，尚有6份标本出现正反定型不符现象，主要是在大批量标本操作中，漏加试剂或未认真核对标本而导致错误发生。

本文结果显示，仪器法及手工法对Rh(D)血型检测结果良好，与吴穗等［7］报道相一致。3份Rh(D)阴性标本中，仪器法的试剂卡结果清晰，手工法于显微镜低倍镜下观察亦无凝聚。仪器法结果出现2份失误均为试剂针将标本加至试剂卡上的金属膜，经工程师对仪器试剂针重新定位后再未出现此现象。

使用Auto Vue Innova全自动血型仪每小时检测的标本量不但较手工试管法快，且仪器从标本扫描识别、血型的检测、结果的判读、反应图像的保存全部实现自动化，操作简便快捷、结果准确、灵敏度高、易于查询，避免在血型检测过程中人为错误的出现，实现血型检测的标准化。但为了减少仪器及试剂卡对标本检测带来的干扰，在仪器的使用过程中，应严格按仪器要求进行日维护与周维护，提供充足的试剂及清洁液，试剂卡在运输及存放中不能颠簸和颠倒，待检血标本要足量且无凝块及溶血，以提高其一次性判读成功率，并逐步代替手工法在血型鉴定中展开应用。

［1］Shin SY，Kwon KC，Koo SH，et al.Evaluation of two automated instruments for pre-transfusion testing:Auto Vue innova and techno Twin station［J］.Korean J Lab Med，2008，28(3):214-220.

［2］申卫和.ABO、RhD血型3种鉴定方法的比较［J］.中国医药导报，2010，7(14):159-160.

［3］叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程［M］.3版.南京:东南大学出版社，2006:246.

［4］王敏，王保龙，姚萍，等.全自动血型仪在输血前检查中的应用［J］.临床输血与检验，2011，13(2):123-125.

［5］杨文勇，和润泞，蔡德康，等.新生儿ABO血型抗体产生情况调查［J］.临床输血与检验，2012，14(3):235-236 .

［6］李荫，冯丽，王晓卫，等.新生儿抗体产生情况分析及微柱凝胶法与盐水试管法的结合应用［J］.南京医科大学学报(自然科学版)，2012，32(8):1174-1176.

［7］吴穗，董伟群，佟力.全自动血型及配血系统在血型鉴定中的应用［J］.山东医药，2012，52(30):87-88.