原发性高血压4个相关候选基因多态性与天津汉族人群原发性高血压的关系

张 凯，毛用敏

(1天津医科大学，天津300070;2天津市胸科医院)

目前发现至少150种原发性高血压(EH)候选基因，对这些候选基因的研究大多局限于单个基因，而对涉及多系统、多基因的协同研究报道较少。2011年11月～2012年10月，我们观察了天津市汉族人群中 SELE rs5361 A/C、eNOS rs1799983 G/T、GNB3 rs5443 C/T和AGT rs699 C/T 4个EH相关基因多态性，并探讨了4个基因多态性与天津市汉族人群EH的关系。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择同期天津市胸科医院收治的EH患者177例(EH组)，均符合1999年WHO/ISH高血压治疗指南分类标准，即收缩压≥140 mmHg和(或)舒张压≥90 mmHg，并排除其他继发性因素。其中，男95例、女82例，年龄(57.45±9.83)岁。同期选择该院健康体检者212例(对照组)，均无高血压及其他心血管疾病治疗史，无高血压家族史。其中，男104 例、女108 例，年龄(55.25 ±9.73)岁。所有研究对象为天津市汉族人。

1.2 方法

1.2.1 DNA制备 取所有研究对象外周静脉血3 mL，枸橼酸钠抗凝，按照天根血液基因组DNA提取试剂盒说明书方法提取基因组DNA。所得DNA溶液浓度在 30 ～200 ng/μL，OD260/OD280为1.7 ～2.0。

1.2.2 SELE rs5361 A/C、eNOS rs1799983 G/T、GNB3 rs5443 C/T和AGT rs699 C/T基因多态性分型 采用贝克曼—库尔特公司的SNPstream基因分型系统的单碱基引物延伸—微阵列芯片法分型方法，严格按照贝克曼—库尔特公司提供的标准操作进行。使用引物设计工具(http://www.autoprimer.com)设计每个SNP位点的一对PCR引物和一个用于单碱基延伸步骤的探针。基因多态性分型的主要步骤:PCR扩增与纯化、单碱基延伸和芯片杂交反应。

1.2.3 统计学方法 采用SPSS16.0软件软件，计数资料以百分数表示，比较采用χ2检验、Fisher精确概率法。采用 PHASE v2.1［1，2］软件进行单体型构建及频率估计。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组基因型和等位基因频率分布 经χ2检验，两组基因型频率符合Hardy-Weinberg遗传平衡，具有群体代表性。其基因型和等位基因频率见表1～4。

2.2 两组单体型分析比较 每种单体型在两组间的分布比较差异无统计学意义(P均＞0.05)。见表5。

3 讨论

表1 两组SELE rs5361 A/C基因型和等位基因频率比较

表2 两组eNOS rs1799983 G/T基因型和等位基因频率分布比较

表3 两组GNB3 rs5443 C/T基因型和等位基因频率分布比较

表4 两组AGT rs699 C/T基因型和等位基因频率比较

表5 两组SNPs单体型分析比较(频率值)

迄今为止，已报道的EH候选基因至少150余种。但EH是一种多因素复杂疾病，其发生是环境因素和遗传因素共同作用、多个微效基因相互累加的结果，而且基因变异的性质和等位基因的频率在不同人群之间存在较大的差异［3］。尽管国内外关于EH相关基因的报道很多，但研究结果多不一致且可重复性差。王佐广等［4］发现，SELE rs5361在男性和女性EH之间存在明显的相关性;李东宝等［5］发现，eNOSrs1799983与中国汉族人EH发病相关，并与GNB3 rs5443等位基因对EH的发生具有协同作用;王丹［6］发现AGT rs699多态性与山西地区人群患EH相关。而其他研究［7～10］却得到相反的结论。此外，目前EH相关基因的研究多为单个位点的变异分析，同时对多个基因进行检测分析的报道较少。

本研究采用基因芯片技术和病例对照研究方法，同时检测4个 EH相关基因的 SNP位点，即SELE rs5361 A/C、eNOS rs1799983 G/T、GNB3 rs5443 C/T和AGT rs699 C/T，并对其频率及单体型进行分析。结果发现，EH组与对照组中，4个EH相关基因的基因型和等位基因频率比较差异无统计学意义;单体型分析结果显示，两组检出的单体型主要有15种，在EH组中只有11种，但分布比较差异无统计学意义。说明检测的4个EH相关基因与天津汉族人群EH发病无关。

本次研究虽然分析了多个EH候选基因，但是每个候选基因的位点仅为一个。而一个位点的变异能否对基因产物的表达产生较大的作用，仍有较大的争论。因此，与EH相关基因多态性对EH的影响有待进一步探讨和研究。

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