纤维素酶在苦参碱提取中的应用

李明松陈 懿许 青

1.安顺职业技术学院，贵州 安顺 561000；2.贵州省安顺市人民医院，贵州 安顺 561000

纤维素酶在苦参碱提取中的应用

李明松1陈 懿1许 青2

1.安顺职业技术学院，贵州 安顺 561000；2.贵州省安顺市人民医院，贵州 安顺 561000

目的：比较加酶组和未加酶提取苦参碱的差别。方法：酶提取工艺即每克生药加入50U（0.25g）纤维素酶，充分搅拌，其他工艺同原工艺。结果：加酶组提高了苦参碱的收率，与未加酶组相比有显著性差异。结论：纤维素酶的加入使苦参碱的收率提高。

纤维素酶；酶解技术；苦参碱

1814年俄国科学院K.Ckirchoff发现了淀粉酶，并初步认识了酶的催化作用。20世纪50年代，酶化学由于多学科的相互渗透得到了迅速发展，使工业化用酶广泛涉及医药、食品、酿酒、饲料、纺织、洗涤、造纸、皮革及污水处理等众多领域。90年代中后期，我国开始将酶用于天然药物及中药的提取分离，并取得了一些成果［1］。

植物的有效成分往往包裹在细胞壁内，细胞壁由纤维素构成，而纤维素则是由β－D－葡萄糖苷键以β－1，4－葡萄糖苷键连结，而纤维素酶可以破坏β－D－葡萄糖苷键，使植物细胞壁被破坏，有利于药物有效成分的提取，较大幅度地提高收率。选用苦参提取苦参碱［2］作为研究对象，并对加酶组和未加酶组进行对比实验，来验证纤维素酶对苦参提取苦参碱的影响。

1 实验仪器与药品

高效液相色谱仪（LC5A），日本岛津；PHS－3CW微机型酸度计，中国上海梅特勒公司；电子分析天平AE240，中国上海理达仪器厂。所用试剂均为分析纯。纤维素酶粗品（国药集团化学试剂有限公司，批号：F20050512，活力单位10000μ／g）；苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110805－200306）。苦参药材购于贵阳市花果园药材批发市场，经中药鉴定教研室刘芃教授鉴定为豆科槐属（Leguminosae）植物苦参Sophora flavescens Ait的干燥根。

2 方法与结果

2.1 供试品的制备方法［3］称取苦参块约50g，精密称定，加入8倍量pH＝4.5的酸水，置于50℃的恒温水浴内浸泡15 min，电炉加热至沸，微沸30min，取出滤液；药渣再分别煎煮两次，每次加入8倍量的酸水，煎煮30min，合并三次滤液，浓缩至250mL左右，3000r／min离心10min，转移到250mL容量瓶中，加水稀释到刻度，摇匀，用10mL移液管精密吸取10mL水提液倒入分液漏斗中，加入氨水用酸度计调pH＝10左右，用60mL氯仿分三次萃取，合并氯仿层，挥干，加入甲醇溶解，定容到10mL容量瓶中，即得。

2.2 加酶提取苦参碱［4－5］先在药材饮片中加入400mL水，用HCL调pH4.5，以每克生药材50U的量加入纤维素酶，充分搅拌，置于50℃恒温水浴15min，水浴期间适时搅拌，酶处理后提取工艺同原工艺，为了除去水浸影响，在原工艺前亦加了一步水浸，pH4.5及50℃水浴15min，而只是没有加酶。

2.3 含量测定方法［6］

2.3.1 色谱条件 色谱柱：Zorbax NH3（4.6mm×1.5mm）；柱温：50℃；流动相：乙腈－无水乙醇－水（80：10：10），磷酸调pH＝2；流速：1.0mL／min；检测波长210nm。

2.3.2 标准曲线的制备 精密称取苦参碱标准品，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，得到浓度为0.4024mg／mL的苦参碱对照品溶液，然后精密吸取1mL对照品溶液至100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，最终得到浓度为4.024μg／mL的苦参碱对照品溶液。精密吸取0.5、3.5、6.5、9.5、12.5、15.5、18.5、21.5μL，按色谱条件进样，测定峰面积。以苦参碱对照品（x，mg·mL－1）为横座标，峰面积积分值（y）为纵座标进行线性回归，见图2，得回归方程为Y苦＝1.2829×10－4X－2.1811×10－4，r＝0.9962，苦参碱在0.0141～0.0865 mg／mL范围内呈良好线性关系。

2.3.3 加酶组与未加酶组提取比较 取苦参样品按供试品溶液的制备方法制备得到加酶组和未加酶组，按色谱条件进行测定，结果见表1。

由表1可知，加酶组与未加酶组提取的苦参碱的收率有显著性差异，加酶组苦参碱的收率优于未加酶组。

表1 苦参碱收率测定结果

3 讨论

从实验中可以看出在纤维素酶参与作用下，苦参碱的收率提高。与对照组相比有显著性的差异。中药大部分属于植物类药材，特别是富含纤维素的根、茎、皮类药材，应用纤维素酶可以破坏植物的细胞壁而使有效成分提取率提高，使药材得到充分利用。当然，能否将纤维素酶推广应用于其它天然产物的提取中，还需要根据有效成分的化学结构而定，以保证有效成分结构完整，保证药材的医疗作用。但酶的浓度、底物的浓度、温度、酸碱度、抑制剂和激动剂等对提取物的影响，还有待进一步的深入研究。

［1］韩丽.实用中药制剂新技术［M］.化学工业出版社，2002：118.

［2］李晓海.HPLC法在生物碱分析中的研究进展［J］.中草药，2002，33 （4）：368.

［3］金莉霞，崔燕岩.苦参生物碱的高效液相色谱法测定［J］.药学学报，1993，28（2）：136.

［4］杨庆隆，许顺荣.浅谈酶在中药制剂中的应用［J］.中成药，1995，17（6）：4.

［5］马桔云，赵晶岩，姜颖，等.纤维素酶在黄连提取工艺中的应用［J］.中草药，2000，31（2）：103.

［6］国家药典委员会编著.中华人民共和国药典（一部）［M］.化学工业出版社，2005：161.

The Application of the Cellulase－Method to extract matrine from Sophora Flavescens

Li Ming－song1，Chen yi1，Xu qin2
1.Anshun Vocational and Technical College，Guizhou，561000；2.The people，s Hospital of Anshun City，Guizhou，561000，China

ObjectiveTo extract matrine from Sophorae Flavexcentis and do omparative experiments between adding enzymes to Sophorae Flavexcentis and not adding enzymes to Sophorae Flavexcentis.MethodsEnzymes extracting process，adding cellulase 50U （0.25g）and stirring.Other process is the same as the original process.ResultsThe extracting ration of matrine has been improved by the enzymatic hydroysis of cellulose.comparec with those without the enzymatic hydrolysis，it has remarkable differences.ConclusionThe extracting ratio of matrine can be improved by the adding of cellulase.

cellulase；enzymatic hydrolysis；matrine

R284.2

A

1007－8517（2013）16－0022－02

2013.06.23）