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HPLC法测定五爪风中补骨脂素的含量

2013-06-07元宋志钊

中国民族民间医药 2013年16期
关键词:补骨脂素测定方法乙腈

刘 元宋志钊

1.广西中医药研究院,广西 南宁 530022;2.广西中药质量标准研究重点实验室,广西 南宁 530022

HPLC法测定五爪风中补骨脂素的含量

刘 元1,2宋志钊1,2

1.广西中医药研究院,广西 南宁 530022;2.广西中药质量标准研究重点实验室,广西 南宁 530022

目的:建立五爪风中补骨脂素的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,以Appollo-C18色谱柱为分离柱,以乙腈-水(33:67)为流动相,246nm为检测波长,柱温为室温。结果:补骨脂素在4.5~72.0μg/mL范围内,峰面积与其浓度呈良好线性关系(r=0.9997),平均回收率为100.3%,RSD为1.50%(n=6)。结论:该方法简便、准确、重复性好,可作为该药材含量测定方法。

五爪风;补骨脂素;HPLC

瑶药五爪风系桑科榕属植物掌叶榕[Ficus simplicissima Lour.var.hirta(Vahl)Migo]的根,别名五指毛桃、五指牛奶、五爪龙、粗叶榕,为传统瑶药“七十二风”中的五爪风[1],具有健脾补肺、利湿舒筋之功效,主要用于治疗脾虚浮肿、食少无力、肝炎、风湿痹痛、肺痨咳嗽等症,瑶医作为治疗慢性病和病后体弱的常用药材。目前瑶药五爪风尚未有法定标准,为了控制其质量,采用高效液相色谱法测定五爪风中补骨脂素的含量,结果令人满意。

1 仪器与试药

日本岛津LC-20ATVP高效液相色谱仪,SPD-20AVP紫外检测仪;威玛龙色谱工作站;Appollo-C18(4.6mm× 250mm,5μm);HH-S恒温数显水浴锅,江苏金坛仪器厂。乙腈为色谱纯,水为超纯水,其余所用试剂均为分析纯。补骨脂素对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号:110739-200310)。五爪风药材6批:20110509(金秀)、20110908(金秀)、20111204(武鸣)由本院黄云峰、宋志钊同志采集;20121220购自金秀县药材市场;20120424购自玉林药市;20120615购自南宁药材市场。以上样品均由本院中药所鉴定。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Appollo-C18色谱柱(4.6mm× 250mm,5mm);检测波长为246nm;流动相:乙腈-水(33:67);流速:1.0mL/min;柱温为室温。理论塔板数按补骨脂素峰计算不低于3000。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取补骨脂素对照品9.00mg,置50mL量瓶中用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,制成180μg/mL对照品溶液,备用。精密吸取上述对照品溶液1.2mL,置10mL棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,即得(21.6μg/mL)。

2.3 供试品溶液的制备 取本品药材粉末(过40目筛)1.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25mL,称定重量,加热回流30min,放冷,再称定重量,用甲醇补足缺失的重量,摇匀,滤过,即得。

2.4 标准曲线及线性范围考察 精密称取补骨脂素对照品9.00mg,置50mL量瓶中用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,制成180μg/mL对照品溶液,备用。分别精密吸取180μg/mL补骨脂素对照品溶液0.25、0.5、0.75、1.0、2.0、4.0mL,分别置10mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,进样10μL,测定。以补骨脂素对照品进样浓度μg/ml为横坐标(X),峰面积积分值为纵坐标(Y)绘制标准曲线,得回归方程为:Y=65979X+69276,r=0.9997。结果表明:补骨脂素进样浓度在4.5~72μg/mL之间与峰面积积分值线性关系。

2.5 精密度试验 分别吸取同一供试品溶液,进样6次,依次测定,即得。测得供试品RSD为1.40%。

2.6 重复性试验 取同一批号(20110908)样品,按供试品溶液制备方法制备6份,分别进样,测定。结果测得补骨脂素含量为0.372mg/g,RSD=1.44%(n=6)。表明该方法重复性良好。

2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液分别于0、2、4、6、8、10、12h进行测定。结果供试品中补骨脂素含量的RSD 为2.10%,表明供试品溶液在12h内保持稳定。

2.8 加样回收试验 取已测知含量(0.372mg/g,批号20110908)的供试品0.5g,精密称定,精密加入补骨脂素对照品溶液(180μg/mL)1.0mL,精密加入甲醇相25mL,按供试液制备项下的方法制备。结果补骨脂素平均回收率为100.3%,RSD为1.50%(n=6),结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n=6)

表2 6批五爪风药材中补骨脂素测量结果

2.9 样品测定 按供试液的制备及检测方法,测定6批五爪风药材中补骨脂素含量,补骨脂素含量(mg/g)在0.139~0.675之间,结果见表2。

3 讨论

3.1 五爪风的化学成分研究发现其含有补骨脂素[2],对五爪风中补骨脂素的含量测定方法进行初步探索,经过预实验,多批五爪风药材中含有补骨脂素。因此五爪风中指标成分补骨脂素的含量测定方法,可作为控制本品质量标准的指标之一。

3.2 对补骨脂素对照品溶液进行紫外扫描,结果其在246nm处有最大吸收,故确定检测波长为246nm。参照《中国药典》2010年版一部里有关补骨脂素含量测定方法,以甲醇-水、乙腈-水为流动相,考察了多个比例,最后确定乙腈-水(33:67)的比例较为适合。

3.3 采用超声处理30min、加热回流1h、索氏提取2h进行提取方法考察,采用加热回流1h补骨脂素含量最高,故采用加热回流作为提取方法。采用甲醇、50%甲醇、流动相作提取溶剂进行考察,甲醇提取补骨脂素含量较高,故采用甲醇作为提取溶剂。以加热回流30、60、90min进行提取时间考察,加热回流30、60、90min,三者补骨脂素含量无明显差别,从节省时间考虑,故加热回流提取时间定为30min。

[1]戴斌,李钊东,丘翠嫦,等.“虎牛钻风”类传统瑶药的调查研究[J].中国民族民间医药杂志,1998,31(2):28-34.

[2]轧霁,张晓琦,王英,等.五指毛桃黄酮和香豆素类成分研究[J].林产化学与工业,2008,28(6):49-52.

Determination of Psoralen in Ficus hirta Vahl by HPLC

Yuan LIU1,2,Zhi-zhao Song1,2
1.Guangxi Institute of Chinese Medicine&Pharmaceutical Scince,Nanning,Guangxi 530022,China;2.Guangxi Key Laboratory of traditional Chinese medicine quality standards,Nanning,Guangxi 530022,China

ObjectiveTo assay the content of Psoralen in Ficus hirta Vahl by HPLC.Method The Appollo-C18(4.6mm× 250mm,5μm)column was used,the mobile phase consisted of acetonitrile-water(33:67),the detection wave length was 246nm and the column temperature was room temperature.Resuilts Linearity of Quercitr was good at 4.5~72.0μg/mL(r=0.9996).The average recovery of buddleodide was100.3%with RSD less than 1.50%(n=6).Conclution The method is simple,accurate and repeatable,which can be applied in determination of Psoralen in Ficus hirta Vahl.

Ficus hirta Vahl;Psoralen;HPLC

R284.1

A

1007-8517(2013)16-0016-02

2013.06.14)

广西科技攻关项目(桂科攻11107010-3-4)。

刘元,女,高级实验师,从事中药药理学研究与新药开发。E-mail:liuyuan0821@vip.163.com

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