鹿角壮骨胶囊质量标准研究

周 勇 文芳杰

贵州省黔南布依族苗族自治州中医医院，贵州 都匀 558000

鹿角壮骨胶囊质量标准研究

周 勇 文芳杰

贵州省黔南布依族苗族自治州中医医院，贵州 都匀 558000

目的：鹿角壮骨胶囊为黔南州中医医院“骨伤Ⅲ”号验方，根据医院制剂的注册要求，对其质量标准进行研究。方法：采用薄层色谱法定性鉴别处方中臣药炙黄芪和佐药川芎；采用高效液相色谱法测定骨碎补中柚皮苷含量。结果：炙黄芪、川芎能定性鉴别出，阴性无干扰；柚皮苷的回归方程分别为Y＝1745.5X＋31.35，r＝0.9998，胶囊中柚皮苷含量为0.036～0.052%。结论：该质量标准及相关检测方法正确、简便、重现性好，对于控制和评价鹿角壮骨胶囊的品质有重要意义。

鹿角壮骨胶囊；薄层色谱法；高效液相色谱法；柚皮苷

鹿角壮骨胶囊处方为黔南州中医医院老中医丰仕多年的临床实践总结出来的经验方。全方配伍严谨，方中鹿角霜具温肾助阳、收敛止血之功，为君药；枸杞子、黄芪、自然铜共为臣药，协助君药补肾益气，接骨续筋；熟地黄、骨碎补、白术、川芎四药共为佐药，佐助君、臣药，补肾填髓，养血和肝，益气续筋之功。诸药合用，共奏补益肝肾，强筋壮骨之功效。适用于骨折肝肾亏虚证，症见骨连未坚，腰膝酸软，肢体萎软，神疲乏力，舌质红、苔薄白，脉细。此方在临床疗效好。根据临床需要和剂型选择依据将原汤剂改进为硬胶囊剂，提高患者应用的顺应性，以更好的服务于广大患者。本文在剂型改进的基础上，采用中试稳定的鹿角壮骨胶囊进行质量标准研究，为鹿角壮骨胶囊医院制剂的注册提供依据。

1 仪器与试药

Agilent12000高效液相色谱仪；Agilent－G1311A四元泵；Agilent-G1322A真空脱气器；Agilent－G1314B可变波长检测器；CHEMSTATION B.04.02化学工作站；AT－330柱温箱（天津奥特赛恩斯科学仪器有限公司）；超声清洗机（无锡超声电子设备厂）；电子天平（瑞士Mettler公司）；KQ－250B型超声波清洗器（昆山市超声波仪器公司）；

鹿角壮骨胶囊，黔南州中医医院制剂室自制；柚皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110722－201111）；阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110773－200611）；黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0781－200210）。甲醇为色谱纯，水为纯净水；其它试剂均为分析纯。

2 定性鉴别

2.1 川芎的薄层鉴别 取本品4g，加1%碳酸氢钠溶液50mL，超声处理30min，离心，取上清液用稀盐酸调节pH值至2～3，用乙醚提取3次，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。按处方及胶囊制备工艺制作缺川芎胶囊，称取4g，同法制得阴性对照样品。另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB）试验，吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸（4：1：0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下观察。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照样品在在与对照品色谱相应的位置上，无相同颜色的荧光斑点。见图1。

2.2 炙黄芪薄层鉴别 取本品5g，加甲醇50mL，回流提取1.5h，滤过，滤液蒸干，残渣加水30mL使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20mL，合并正丁醇液；用氨试液洗涤两次，每次20mL，弃去洗液，再用正丁醇饱和的水洗至中性，分取正丁醇液，蒸干，残渣加水5mL使溶解；通过D101大孔吸附树脂柱层析，以水50mL洗脱，弃去水液，再以30%乙醇50mL洗脱，弃去洗脱液，继续用70%乙醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。按处方及胶囊制备工艺制作缺川芎胶囊，称取4g，同法制得阴性对照样品。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成1mg／mL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB）试验，吸取上述三种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－水（13：7：2）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显示相同颜色的斑点；紫外光灯（365nm）下显相同颜色的荧光斑点。阴性对照样品在在与对照品色谱相应的位置上，无相同颜色的斑点与荧光斑点。见图2、3。

3 柚皮苷含量测定

3.1 色谱条件 色谱柱为Lincrospher－C18（江苏汉邦科技，250×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇：醋酸：水＝35：4：65；检测波长：283nm；柱温：35℃；流速：1.0mL／min；进样量10μL。

3.2 对照品纯度检查 在选定色谱条件分离后，按面积归一化法，计算其含量为100%。

3.3 系统适应性 在“3.1项”色谱条件下，柚皮苷和样品中其它组分色谱峰可基线分离，按柚皮苷峰计算，理论板数为4177。同时取阴性供试品溶液进样，结果表明，阴性供试品在柚皮苷色谱峰处无相应色谱峰出现。柚皮苷、样品及阴性供试品的HPLC图谱见图4。

3.4 对照品溶液的制备 取柚皮苷对照品适量，精密称定，置量瓶中，加甲醇制成每1mL含100μg的溶液，即得0.1mg／mL。

3.5 供试品溶液的制备 提取时间的考察：取鹿角壮骨胶囊（批号为1204231）约3.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称重，分别超声处理不同时间，放冷后，加甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。分别精密吸取供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，按上述条件测定，结果表明：处理20min，柚皮苷含量基本不再增加，为保证提取完全，故确定超声处理时间为30min。

3.6 线性关系考察 分别精密吸取柚皮苷对照品溶液（0.1mg／mL）2、4、6、8、10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以峰面积积分值（Y）为纵坐标，柚皮苷进样量（X）为横坐标，得回归方程为：Y＝1745.55X＋31.35，r＝0.9998。结果表明：柚皮苷进样量在0.2－1.0μg范围内，进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。

3.7 精密度考察 分别精密吸取柚皮苷对照品溶液（0.1mg／mL）5μL，按上述色谱件重复进样6次，柚皮苷峰面积积分值的RSD＜2%。结果表明：精密度良好。

3.8 稳定性试验 分别精密吸取供试品溶液（批号1204231）10μL，于0、1、2、4、8h分别进样，测得柚皮苷峰面积积分值，RSD为0.12%。结果表明：供试品溶液在8h内稳定。1个月后，取鹿角壮骨胶囊（批号1204231）约3.0g，精密称定，按供试品溶液的制备方法制成供试液，进样10μL，测得峰面积积分值并计算含量，0月平均含量为0.048%，1个月后平均含量为0.050%。结果表明：样品在1个月内稳定。

3.9 重复性试验 取鹿角壮骨胶囊（批号1204231）约3.0g，精密称定6份，按供试品溶液的制备方法制成供试液，分别进样10μL，测得峰面积积分值并计算含量，含量平均为0.048%，RSD值为1.73%，试验结果表明：重复性试验良好。

3.10 回收率试验 取已知含量的样品（批号1204231）1.5g，精密称定，分别加入柚皮苷对照品适量，按供试品溶液的制备方法制备加样回收供试品溶液，分别进样10μL，测定，结果见下表1。

表1 回收率试验结果

试验结果表明：回收率在96～100%之间，加样回收良好。

3.11 样品测定 取样品约3.0g，精密称定，按上述条件进行测定，结果鹿角壮骨胶囊中柚皮苷的含量为0.036－0.052%，结果见下表。

样品测定结果

批号样品重（g）柚皮苷含量（%）平均值（%）201200173.02630.051 3.00120.0520.052

4 讨论

鹿角壮骨胶囊在临床应用中收到了较好的疗效，一直沿用至今。原为汤剂煎服，服用、携带不方便，不宜大量制备。根据临床需要改进剂型为硬胶囊剂。剂型改进后为了保证其原有临床疗效，需制定相应质量标准，本文薄层定性鉴别为鉴定鹿角壮骨胶囊是否按方投料生产提供相关鉴定方法；柚皮苷含量为0.036～0.052%，考虑到不同批次含量的差异，暂定本品每1g含骨碎补以柚皮（C27H32O14）计，不得少于0.20mg。本文质量研究方法对鹿角壮骨胶囊的质量标准制定具有一定意义。

炙黄芪鉴别参考《中华人民共和国药典》2010年版一部“黄芪”药材的鉴别，以黄芪甲苷为对照品，以三氯甲烷－甲醇－水（13：7：2）的下层溶液为展开剂，但由于是复方，其它成分干扰大，导致其它成分的斑点与炙黄芪相重叠，影响其分离度，故对前处理方法进行改进，通过D101大孔吸附树脂处理，选择合适浓度的洗脱剂，可使样品纯化，有效除去其它杂质成分对黄芪甲苷的干扰。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：38、239、285.

［2］林昱，李新田，求财荣，等.芪参富康胶囊质量标准研究［J］.中成药，2008，30（9）：26－27.

［3］邹俊，张玉洁，田宏，等.川芎茶调丸（浓缩丸）的薄层色谱鉴别［J］.中国药师，2002，5（8）：505－506.

R286.0

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1007－8517（2013）16－0020－03

2013.06.17）