4种中草药提取物抑菌效果与其有效成分含量的相关性

2013-04-30胡春红赵锦慧

周口师范学院学报 2013年5期

郭婕，胡春红，赵锦慧

（周口师范学院生命科学系，河南周口466001）

中草药以天然植物作为原料而被广泛认为比西药安全，因此，中草药的开发利用成为一些学者关注的焦点.有关中草药抑菌方面的研究已见大量报道［1-3］，对具抑菌作用的药理活性物质的成分分析、分离纯化及含量与抑菌效果的相关性研究，将有助于人们更好研究植物性杀菌剂及开发利用宝贵的中草药资源.笔者以常引起各种炎症发生的罪魁祸首——大肠杆菌为供试菌种，通过试管稀释法，研究4种中草药（野黄菊花、怀牛膝、金银花、苦地丁）的抑菌效果，并初步探讨了抑菌药理活性物质含量与其抑菌效果的相关性.

1 材料与方法

1.1 实验材料

4种中草药：野黄菊花、怀牛膝、金银花、苦地丁.供试菌种：大肠杆菌

1.2 实验方法

1.2.1 药液的制备

准确称取干燥后的野黄菊花168g，置砂锅中，加蒸馏水1000mL，浸泡30min后，先用大火煮沸，改用中小火继续加热40min，用纱布过滤得滤液，在滤渣中加入等量蒸馏水煮1h，过滤得滤液.收集两次滤液，离心、浓缩为含生药药量4g／mL，灭菌后作为母液，4℃保存备用.其他3种中药液制备方法同上.

1.2.2 培养基制备及灭菌

参照相关资料［4］制备牛肉膏蛋白胨固体培养基和液体培养基，灭菌后，分别用于菌种活化和抑菌实验.

1.2.3 菌种活化与大肠杆菌悬浮液的制备

无菌操作，将冷藏的菌种用接种环接种于上述固体培养基上，置于37℃恒温培养箱中培养48h.如此培养活化菌种3代后，用10mL无菌水进行洗脱，将洗脱液接种于100mL上述液体培养基，恒温震荡2h，即得大肠杆菌菌悬液，备用.

1.2.4 接种与实验结果测定方法

4种中草药培养液分别按照表1进行分组加样，每组做3个平行.加样后，37℃下摇床培养18 h.以“对照＊”进行调零，在560nm波长处测定其余8组光密度OD值.

参照相关资料［5］，分别采用分光光度法、三氯化铝比色法、酒石酸铁比色法测定4种中草药母液中多糖类、黄酮类、多酚类含量.

2 结果与分析

2.1 4种中草药母液中3种主要成分的含量

4种中草药母液中3种主要成分含量见表2.

表1 不同实验组加样情况

表2 4种中草药3种主要成分含量

由表2可知：4种中草药均以黄酮类含量最多，而多糖类、黄酮类、多酚类3种成分均以野黄菊花含量最多，其次为苦地丁、金银花，怀牛膝含量最少.

2.2 4种中草药对大肠杆菌的抑菌效果

运用SPSS16.0统计软件，采用one-way ANOVA方法对所测抑菌实验结果的OD值进行统计分析，结果见表3.为了降低实验误差，取各中草药对照组的平均OD值与各浓度下平均OD值之差为纵坐标（差值越大，说明抑菌效果越好），中草药浓度为横坐标作图，见图1.

图1 4种中草药不同浓度下的抑菌效果

由图1和表3可知，4种中草药对大肠杆菌的抑菌效果，基本上呈现出随浓度增加而增强的趋势.与对照组相比，野黄菊花、怀牛膝、苦地丁和金银花的抑菌效果分别在浓度≥0.4g／mL、0.6g／mL、1.0g／mL、0.2g／mL时，达差异显著水平.但由图1知，在相同浓度下，抑菌效果强弱依次为野黄菊花＞怀牛膝＞苦地丁＞金银花.

表3 4种中草药抑菌情况分析表

2.3 抑菌活性与有效成分含量相关性

运用SPSS16.0统计软件，对4种中草药抑菌效果和3种有效成分含量进行相关分析，结果见表4.

表4 4种中草药抑菌效果和3种有效成分含量的相关性

由表4知，4种中草药的抑菌效果与其多糖类、黄酮类、多酚类含量的相关性以野黄菊花的最强，其次是苦地丁、金银花，怀牛膝最弱.

3 讨论与结论

实验结果表明，4种中草药均具有明显的抑菌效果，且抑菌效果随浓度增加而增强.相同浓度下，抑菌效果强弱依次为野黄菊花＞怀牛膝＞苦地丁＞金银花，而抑菌效果与多糖类、黄酮类、多酚类含量的相关性从大到小依次为野黄菊花＞苦地丁＞金银花＞怀牛膝.野菊花的化学成分主要有黄酮类、萜类、绿原酸类、多糖类，具有广谱的杀菌效果，特别是对大肠杆菌具较强的抑菌效果［6，7］；苦地丁主要含生物碱、黄酮类、多糖类、酚类等物质，具有广谱的抑菌效果［8］；金银花的化学成分主要有黄酮类化合物、绿原酸类、多糖类，具有一定的抑菌效果［9，10］；怀牛膝的主要化学成分为萜类、生物碱（小檗碱），具有抗生育、镇痛、抗炎、增强免疫功能、抗衰老等作用［11，12］.黄酮类化合物，在抗菌、防病等方面起着重要的作用；多糖在抗肿瘤、抗炎、抗病毒等方面发挥着生物活性作用；多酚类物质具有很强的抗氧化作用.因此，野黄菊花、苦地丁、金银花可能均因含有黄酮类、多糖类、酚类或酚类衍生物而具抑菌效果，且抑菌效果与其有效成分含量具有较大的相关性.怀牛膝虽然具有较强的抑菌效果，但与其有效成分含量相关性却最小，说明怀牛膝的抑菌效果可能与其含有的主要成分萜类和生物碱有关.

4种中草药对大肠杆菌的抑制作用的时效性如何，抑菌效果与生物碱类、萜类的相关性怎样，还有待进一步研究.

［1］姚广龙，侯晓东，王晓星，等.中草药提取物抑菌作用的研究进展［J］.食品科技，2007，32（8）：16-19.

［2］张武岗，李定刚，宋毓民，等.地丁、蒲公英、野黄菊花抑菌活性成分的研究初报［J］.西北农林科技大学学报，2006，34（11）：125-127.

［3］李书华，陈封政，李仲芳，等.鹅掌楸树皮提取物的抑菌作用研究［J］.江苏农业科学，2008（3）：114-115.

［4］沈萍，陈向东.微生物学实验［M］.北京：高等教育出版社，1999：21-23.

［5］王福荣，宋文军，戚薇，等.生物工程分析与检验［M］.北京：中国轻工业出版社，2012：160-163，249-250，255.

［6］金红英，施松善，王顺春，等.野菊花中性多糖CIP C的分离纯化及结构解析［J］.高等学校化学学报，2012，33（4）：755-760.

［7］任爱农，王志刚，卢振初，等.野菊花抑菌和抗病毒作用实验研究［J］.药物生物技术，1996，6（4）：241.

［8］吕惠子，崔兴日，王广录.苦地丁的化学成分与药理［J］.中国野生植物资源，2002，21（4）：54-55.

［9］石远苹.连翘和金钱草与金银花提取物或浸膏对几种常见耐药茵的体外作用研究［J］.临床合理用药杂志，2012，5（15）：82.

［10］赵尤，刘鑫钰.金银花的化学成分及药理作用研究［J］.黑龙江科技信息，2012（15）：14.

［11］杨柳，姜海，杨炳友，等.怀牛膝中化学成分的分离与鉴定［J］.中医药信息，2012，29（1）：22-24.