甘露糖结合凝集素在念珠菌性包皮龟头炎中的表达及临床意义

方德仁　周云晓　丁颖果　金晓东

【摘要】 目的 探讨念珠菌性包皮龟头炎（CB）患者外周血甘露糖结合凝集素（MBL）水平及其临床意义。方法 采用酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测80例CB患者和46例健康对照者外周血MBL水平，运用多因素非条件Logistic法分析MBL与临床症状的相关性。结果 CB组患者血清MBL的平均值为13.6±6.2ug/L，与健康对照组血清MBL的平均值17.6±5.4ug/L比较显著下降，差异有统计学意义（P﹤0.05）；血清MBL低水平组中，CB52人，占65%（52/80），健康对照男性7人，占15.2%（7/46），低水平组中CB的发病率明显高于高水平组；CB组中MBL血清水平在低水平组中的人数52人，大于在高水平组中的28人，两组比较差异具有统计学意义（x2=2.18，P﹤0.05）；多元素Logistic回归分析显示血清MBL水平低、合并性传播性疾病（STD）、性伴侣合并外阴阴道念珠菌病（VVC）均增加男性发生CB的风险（P﹤0.01）。结论 外周血MBL水平在CB的发病过程中起重要作用，并且与临床症状密切相关。

【关键词】 包皮龟头炎；甘露糖结合凝集素；念珠菌

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2013.09.054 文章编号：1004-7484（2013）-09-4837-02

念珠菌性包皮龟头炎（candidal balanoposthitis；CB）是男性常见的生殖器感染性疾病之一，随着性传播疾病发病率不断增加及抗生素的广泛滥用，CB的发病率也越来越高，尤其是具有反复发作的特征，不仅给患者带来巨大的痛苦，也成为临床医生治疗和预防复发的难题，因此MPB一直是临床研究的热点。但其病因及发病机制至今尚不完全清楚，除外界接触感染外，研究认为自身免疫机制可能在其发病中起重要作用。甘露糖结合凝集素（Mannan-binding lectin，MBL）是天然免疫中的关键分子。我们采用ELISA法对80例MPB患者外周血MBL的表达水平进行检测，并结合临床资料进行分析，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象 2008年9月至2009年9月我院皮肤科和泌尿外科门诊经真菌学培养确诊CB患者80例。年龄19-62（33.4±10.3）岁。病程3天-12个月，平均2个月。其中初发MPB患者33例，再发性MPB47例。同期在我院行健康体检男性，匹配年龄因素后，随机抽取46例设为健康对照组。所有入组患者采集一般的统计学资料，包括有无合并其他性传播性疾病，性活跃度，近1月内抗生素使用情况，性伴侣患病情况以及生活习惯等，同时排除近4周内使用免疫抑制劑及皮质类固醇激素，排除糖尿病病史。

1.2 试剂与方法 本试验采用双抗体夹心ELISA法，定量检测血清中MBL的浓度。试剂盒购于北京科杰生物有限公司，最低敏感度5.0ng/L，板内变异系数﹤5.5%，板间变异系数﹤6.8%。2组受试者于清晨空腹抽取静脉血2ml，析出血清后置-20℃低温冰箱保存。操作步骤：①所用血清标本平衡至室温，高精度加液器和吸头清洁干燥后备用；②待测标本用浓缩标本稀释液按1：105倍稀释；③除空白孔外，分别将不同浓度的标准品、对照品及稀释后的待测血清标本加入相应孔中（20ul/孔）；④每孔中加标本稀释液100ul，混匀并封孔，室温避光孵育120分钟；⑤标记抗体稀释液按1：21稀释HRP标记的MBL抗体；⑥每孔加350ul洗涤液，洗涤5次；⑦除空白孔外，每孔加100ulHRP底物，混匀后封孔，室温避光孵育20分钟；8、加100ul终止液，混匀测量OD450值。

1.3 统计学方法 采用SPSS12.0统计软件处理数据。采用多因素非条件Logistic回归进行分析，病例对照组间计量资料的比较采用t检验，样本率的比较采用x2检验，以P﹤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CB组与健康对照组血清MBL水平的比较 我们对80例CB患者进行了MBL血清水平的检测，并以年龄匹配的46例健康男性作为对照，总共126例。血清MBL水平检测结果的数据呈非正态分布，MBL血清值在5.6-38.5ug/L之间，平均值在16.5±4.8ug/L。CB患者血清MBL的平均值为13.6±6.2ug/L，对照组血清MBL的平均值为17.6±5.4ug/L，CB组血清MBL的平均值低于对照组，差异有统计学意义，（P﹤0.05），见表1。

2.2 血清MBL与CB发生的关系 在本研究中，入组CB患者血清MBL的平均值为16.5ug/L，据此我们以16.5ug/L作为界值，将血清MBL水平分为低水平组和高水平组。通过观察MPB组及对照组血清MBL水平的分布可见，患者MBL水平主要集中在低水平组，而健康对照组的MBL值主要集中在高水平组。由表2可见，血清MBL低水平组中，CB52人，占65%（52/80），健康对照男性7人，占15.2%（7/46），低水平组中CB的发病率明显高于高水平组；CB组中MBL血清水平在低水平组中的人数52人，大于在高水平组中的28人，两组比较差异具有统计学意义（x2=2.18，P﹤0.05）。

2.3 CB发病相关因素多元素Logistic回归分析 CB组患者血清MBL的平均值13.6±6.2ug/L，健康对照组血清MBL的平均值17.6±5.4ug/L；CB组中合并其他性传播性疾病（STD）的阳性率为52%，健康对照组中支原体亚临床感染2例，占4.3%；CB组中发病期间性伴侣阴道分泌物真菌培养的阳性率为21.3%，健康对照组中性伴侣阴道分泌物真菌培养仅1例阳性（阳性率为2.2%）。分别以是否为CB为因变量，其他STD、性伴侣念珠菌性阴道病（VVC）发病情况、血清MBL水平为自变量建立多元素Logistic回归分析模型。模型显示血清MBL水平低、合并STD、性伴侣合并VVC均增加男性发生CB的风险（P﹤0.01），见表3。

3 讨论

MBL是由肝脏和胰岛分泌的一种急性期反应蛋白，广泛存在于多种哺乳动物血液循环中，能选择性的与微生物表面一组特异性的糖结构相结合，进而启动机体的天然免疫机制（MBL途径），因此国外有學者将MBL认定为天然免疫中的关键分子[1-2]。MBL在人体内是通过其受体发挥作用的。

CB是男性泌尿科及皮肤科的常见病、多发病，但其机制未明。近年来对该病免疫机制的研究呈现出渐增趋势。国外Szolnoky等发现人皮肤角化上皮细胞表达一种与巨噬细胞甘露糖受体不完全一致的甘露糖结合受体，该受体介导了上皮细胞抗白色念珠菌的作用。Nomanbhoy等进一步研究发现：小鼠阴道上皮细胞经高碘酸处理后，与念珠菌之间的粘附力不受影响，但其抗念珠菌作用却明显减弱，提示阴道上皮细胞表面的甘露糖结合受体为糖蛋白，其糖链对细胞粘附没有影响，却对细胞粘附发生后的上皮细胞抗念珠菌作用是必要的。目前尚未有关于MBL与CB发病关系的报道。本研究显示CB患者血清MBL的水平低于健康对照组，而低血清MBL组中CB的发病率明显高于高血清MBL组，这一结果说明血清MBL降低可能增加CB发病的风险，因此我们推测：MBL作为一个非常重要的免疫因子，其水平的降低可能诱发CB。

众所周知，年龄、性伴侣患病史、合并性传播性疾病等都是CB的高危因素，由于样本量有限，只能容纳2-3个高危因素进行多元素Logistic回归分析，在匹配了年龄之后，我们将血清MBL水平作为CB发病的一个高危因素，与上述高危因素一起进行Logistic回归分析，结果显示血清MBL水平低与合并性传播性疾病和性伴侣患VVC均为CB发病的高危因素，说明MBL血清水平可能是上述高危因素同样能够影响CB发病的另一种独立危险因素，并且比较三者的OR值可知，对于可能影响CB发病的因素来说：血清MBL水平可能比合并性传播性疾病和性伴侣患VVC更有意义。

总之，CB的发病是一个复杂的过程，既有内在的自身免疫包括细胞免疫和体液免疫的因素，也有外在的接触感染等多种因素，目前对CB发病原因的认识还是初浅的，有待进一部的研究和探讨。

参考文献

[1] Turner MW.The role of mannose-binding lectin in health and disease[J].Moleul Immunol，2003，40：423-429.

[2] Jack DL，Turner MW.Anti-microbial activities of mannose-binding lectin[J].Biochemi Soci Transaction，2003，31：753-757.