和络泄浊方对慢性肾功能衰竭大鼠内皮素水平的影响

冯广青　吴琼

【摘要】 目的 研究單侧输尿管梗阻后，实验大鼠内皮素水平以及肾功能等指标的变化，从而探讨与内皮素相关的肾间质纤维化的发生机制及和络泄浊方对延缓肾间质纤维化的作用。方法 实验研究采用单侧输尿管梗阻（UUO）诱导肾间质纤维化的物模型，将48只Waster大鼠随机分为假手术组（Sham）、模型组（UUO）、和络泄浊方治疗组（UUO+REL），在术后3d、10d、20d、30d每组各取4只处死，处死前收集空腹血清，尿液标本，检测血浆内皮素水平及肌酐、尿素氮水平和凝血机制，以及尿蛋白水平。结果 术后3天，各组大鼠血尿素氮、肌酐水平比较无统计学意义（P>0.05）；术后10天，UUO组大鼠血尿素氮、肌酐升高，与相应假手术组比较有统计学差异（P<0.01），手术后3天各组大鼠的内皮素水平无显著差异。结论 内皮素（ET）参与了单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的发生发展全过程，和络泄浊方能影响ET的代谢，能够降低ET水平，改善肾功能并延缓肾间质纤维化的进展。

【关键词】 内皮素；慢性肾功能衰竭；和络泄浊方

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2013.09.005 文章编号：1004-7484（2013）-09-4790-02

1 资料与方法

1.1 实验材料 实验动物：健康Wistar大鼠48只，雌雄各半，6-8周龄，体重180-220g，平均体重200g，由青岛市动物研究所提供。于室温23℃，用标准大鼠饲料分笼喂养，每笼4只。自由饮水。12小时交替照明。

1.2 实验药品和络泄浊方 方剂：当归12g、川芎12g、赤芍12g、白术15g、制大黄10g、六月雪30g、土茯苓30g、海藻15g、葫芦巴15g。由青岛市中医医院制剂室制成灭菌浓煎密封制剂，药物比重为1.10g/L，生药含量为1.8g/ml。

1.3 仪器和试剂 全自动生化分析仪、722s分光光度计、高速低温台式离心机3K30型、可调式微量移液器、恒温水浴箱、无菌工作台、天平、台式离心机、超净工作台、代谢笼、照相装置等均为国产。低温冰箱、内皮素试剂盒。

1.4 实验方法

1.4.1 实验分组 48只大鼠适应性饲养一周后随机分为Ⅰ组——假手术组（Sham）、Ⅱ组——模型组（UUO）、Ⅲ组——中药灌胃组（UUO+REL），每组16只。

1.4.2 模型制作及动物处理 参考《现代医学实验动物学》，采用单侧输尿管结扎法（UUO）进行肾间质纤维化模型制备。正常对照组开腹后不结扎输尿管，直接缝合。REL组在术后第一天开始给予和络泄浊方浓缩液1.5ml灌胃，早晚各一次，对照组灌等量生理盐水。全部大鼠术后均以原方式喂养。术后3、10、20、30天每组各杀4只大鼠。处死前留取24小时尿，腹主动脉穿刺取血检测血生化指标。

1.4.3 大鼠的处死及标本的采集和处理

1.4.3.1 血液标本 每只大鼠用10%水合氯醛4ml/kg腹腔注射麻醉后，腹腔正中切口打开腹腔，腹主动脉穿刺抽血5ml，分别装密封试管三只。

1.4.3.2 24小时尿蛋白采集 处死大鼠前一天金属代谢笼收集24小时尿量，收集前大鼠禁食不禁水。记录每只大鼠24小时尿总量，取适量（约5ml）用比浊法测定尿蛋白浓度，24小时尿蛋白定量=尿蛋白浓度×24小时尿量。

1.5 统计学处理 所有数据用（χ±s）表示。应用SPSS12.0软件包进行统计学分析，计量资料采用单因素方差分析和q检验（Newman-Keuls法）。相关分析采用两变量间直线相关分析。P<0.05为差异有统计意义，P<0.01为差异有显著性统计意义。

2 结果

2.1 实验大鼠肾功能变化 术后3天，各组大鼠血尿素氮、肌酐水平比较无统计学意义（P>0.05）；术后10天，UUO组大鼠血尿素氮、肌酐升高，与Sham组比较有统计学差异（P<0.01），随时间进展血尿素氮、肌酐逐渐升高，REL组血肌酐、尿素氮较UUO组下降（P<0.01），但未降至Sham组水平，见表1。

2.4 实验大鼠凝血机制变化 手术后3天各组大鼠的APTT水平无统计学差异（P>0.05），术后3天、10天、20天、30天UUO大鼠APTT水平呈递减态势，Sham组则呈现递增态势，但组间对比无统计学差异（P>0.05），REL组大鼠APTT在10天以后相对比Sham组和UUO组缩短（P<0.05），组间对照有统计学差异。FIB检测数值显示UUO组在各个试验点显著高于其他两组（P<0.01）。REL组与UUO组有统计学差异（P<0.05），与Sham组之间无统计学差异（P>0.05），见表4。

3 讨论

肾间质纤维化几乎是各种肾脏疾病进展到终末期肾衰竭的共同途径和主要病理基础，内皮素（endothelin，ET）是Yanagisawa等于1988年从猪主动脉内皮细胞培养液中分离出的一种小分子生物活性肽，除了收缩血管作用外，ET还是一个强大的炎症介质。近年来的研究表明，ET参与了肾间质纤维化的进展过程。生理条件下血浆中ET达到很高水平是不可能的。但试验证实：发生肾功能衰竭的动物血浆内皮素、尿内皮素及肾组织中内皮素的含量均有显著的增高。有人对CRF患者透析前后血浆内皮素水平作了对照，结果有显著差异。并有人提出ET水平的高低可以作为反映肾功能衰竭病情严重性的一个指标。

在治疗肾脏病方面：当归具有防治肾缺血再灌注损伤的作用，以及抗氧化和清除自由基的作用，可提高机体的抗氧化能力，抑制由自由基参与的糖基化终末产物（AGE）的产生，保护超氧化物歧化酶（SOD）活性，使肾脏基质细胞的增值受到抑制，从而抑制了肾小球的损害，减少尿蛋白，保护肾功能。

慢性肾功能衰竭的中医临床分型中，各个类型都存在内皮素升高，也都有血瘀证兼夹存在，提示“久病致瘀，久病入络”，和络泄浊法应该作为肾功能衰竭治疗的基本治则和络泄浊方经实验研究和临床验证，安全有效，能影响ET的代谢，降低ET水平，还能够改善脂质代谢，改善凝血功能，从多个环节实现延缓肾间质纤维化的进展，从而达到改善肾功能的目的。

参考文献

[1] 周钦.大剂量黄芪注射液对慢性肾功能不全患者血浆、尿液内皮素的影响[J].中国中药杂志，2001，26（3）：200-202.

[2] 赵玉庸.肾毒清对慢性肾功能衰竭大鼠血脂及内皮素影响的研究[J].中国中医基础医学杂志，2002，8（12）：23-25.