骨骼风痛片中鸡血藤高效液相特征图谱研究

2013-04-25王婷婷徐国强

长春中医药大学学报 2013年5期

徐建，徐云，王鑫，王婷婷，徐国强，白冰

(吉林修正药业新药开发有限公司，长春 130012)

骨骼风痛片为修正药业集团通化通药制药股份有限公司生产,由鸡血藤、穿山甲、干姜3味药制成，具有祛风除湿，活血通络，散寒止痛的功效，用于风湿痹痛等症。鸡血藤为豆科植物密花豆SpatholobussuberectusDunn的干燥藤茎，具有补血、活血、通络之功，用于月经不调，血虚萎黄，麻木瘫痪，风湿痹痛等症[1]，是处方中的君药。

中药特征图谱能全面、综合的反映所含成分的相对关系，较好的体现中药成分的复杂性和相关性，具有特征明显、专属性强、重现性好等特点[2-5]。本研究通过HPLC方法建立方中鸡血藤药材特征图谱，从而确定成品中鸡血藤的特征图谱。由于鸡血藤在骨骼风痛片中是以水提物入药，决定以鸡血藤水提物为基础，研究鸡血藤原药材与成品骨骼风痛片的相关性。

1 实验材料

1.1 仪器 HITACHI高效液相色谱仪，紫外检测器；Mettler AE240十万分之一分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)；AB204-E电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)等。

1.2 试剂与试药不同来源的鸡血藤药材，S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7、S8、S9、S10分别产自广西白色、广西宁明、广西柳州、广西凭祥、广西宁明、广西玉林、广西钦州、广东德庆、广东高要、云南等地。药材经长春中医药大学王淑敏教授鉴定；骨骼风痛片(批号:20120901)；乙酸乙酯、环己烷、磷酸、甲醇等为分析纯，乙腈为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[6]色谱柱GraceSmart RP 18 (5 μm,4.6 mm×250 mm) ；流动相：乙腈-0.1%磷酸(34∶66)；检测波长：280 nm；柱温40 ℃；流速0.8 mL/min。

2.2 对照品溶液的制备精密称取芒柄花素10 mg，用甲醇溶解于50 mL容量瓶中，稀释至刻度，作为储备液。取储备液2 mL至10 mL容量瓶中混匀,甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备精密称取鸡血藤药材粗粉10 g，加水100 mL，100 ℃水浴回流提取2 h，趁热过滤，滤液浓缩至20 mL，先用乙酸乙酯萃取3次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，在水浴锅上80 ℃蒸干，残渣用水洗2次，每次10 mL，合并补足20 mL，再用环己烷萃取3次，每次20 mL，合并环己烷液，在水浴锅上80 ℃蒸干，残渣用甲醇洗涤2次，每次2 mL，定容至5 mL容量瓶中，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得。

2.4 HPLC-UV特征图谱方法学考查

2.4.1 精密度实验选择S1号鸡血藤药材，按照2.3项下制备方法制备供试品,按2.1项下方法连续进样测量6次，各共有峰的相对保留时间的RSD为0.12%～0.90%。表明仪器精密度良好。

2.4.2 重复性实验取S1号鸡血藤药材，按照2.3项下制备方法制备供试品,按2.1项下方法连续进样测量供试品制备方法制备6分样品,各共有峰的相对保留时间RSD为0.11%～0.72%，表明该方法重现性良好。

2.4.3 稳定性实验取S1号药材，按照2.3项下制备方法制备供试品,按2.1项下方法在0,2，6，8，12 h分别进样检测，各共有峰的相对保留时间的RSD为0.13%～0.33%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.5 特征图谱的建立与相似度评价[7-11]

2.5.1 特征图谱的建立按2.3项下的方法制备10批不同产地的鸡血藤药材HPLC特征图谱供试品溶液。按2.1项下方法依次进行检测，获得10批不同产地的鸡血藤药材HPLC特征图谱和共有模式图根据10批供试品溶液的测定结果，标定共有特征峰6个,以3号共有峰(芒柄花素)作为参照峰，计算相对保留时间，见表1。