OPN和CD44v6在脑胶质瘤中的表达及意义

杜权 俞文华 董晓巧

OPN和CD44v6在脑胶质瘤中的表达及意义

杜权 俞文华 董晓巧

目的检测OPN、CD44v6在脑胶质瘤中的表达水平，探讨两者与脑胶质瘤临床特征的关系以及意义。方法应用免疫组化SP法检测60例胶质瘤和60例减压手术中切除的正常脑组织中OPN和CD44v6的表达水平，并对两者的表达水平与脑胶质瘤临床特征进行分析。结果OPN、CD44v6表达阳性率在脑胶质瘤中分别为75.0%、66.7%，在正常脑组织中分别为16.7%、13.3%，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。脑胶质瘤中OPN、CD44v6的表达水平均与患者的年龄、性别、肿瘤部位无关（均P＞0.05），但在复发与非复发者、高级别胶质瘤（Ⅲ～Ⅳ级）与低级别胶质瘤（Ⅰ～Ⅱ级）之间差异均有统计学意义（均P＜0.05），而且两者表达水平呈显著正相关（r=0.65，P＜0.01）。结论OPN和CD44v6在脑胶质瘤中高表达，两者均反映了脑胶质瘤的生物学特性，并与患者预后有关，且OPN和CD44v6的表达之间有内在联系。

OPN CD44v6 胶质瘤

【 Abstract】 ObjectiveTo investigate the expression of osteopontin(OPN)and CD44v6 in human gliomas and their clinical significance.MethodsImmunohistochemistry was used to detect the expressions of OPN and CD44v6 in 60 specimens of brain gliomas and 60 specimens of normal brain tissues.The relationships between OPN and CD44v6 expressions and their correlation with clinical characteristics were analyzed.ResultsThe positive expression rates of OPN and CD44v6 in brain gliomas were 75%and 67.7%,respectively,while those in normal brain tissue were 16.7%and 13.3%,respectively (P＜0.05). There are significant differences in expressions of OPN and CD44v6 between gliomas grade III-IV and grade I-II,and between tumor with recurrence and without recurrence;however their expressions were not related to age,sex and tumor locations of patients(P＞0.05).The expression of OPN is positively correlated with CD44v6(r=0.65,P＜0.01).ConclusionThe expressions of osteopontin and CD44v6 are closely related to the malignant behaviors of glioma,and their expressions are correlated with each other.

骨桥蛋白（Osteopontin,OPN）是一种分泌型钙结合磷酸化糖蛋白，其中含有特异的与细胞黏附有关的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（Arg-Gly-Asp，RGD）序列，可通过结合其受体介导肿瘤细胞的黏附、迁移和侵袭浸润[1]；CD44 v6在肿瘤转移复发过程中同样发挥着重要作用[2]。本研究对脑胶质瘤中OPN和CD44v6的表达进行了检测，探讨其与患者临床特征之间的关系。

1 对象和方法

1.1 研究对象 收集本院2002-06—2004-12手术治疗的60例胶质瘤患者的临床资料，其中男36例，女24例，年龄5～79岁，中位年龄47岁。术中切除的肿瘤标本立即放入冻存管置于液氮中贮存备检，病理检查结果按2000年WHO关于神经系统肿瘤的分类及分级标准进行分级，Ⅰ级6例，Ⅱ级21例，Ⅲ级23例，Ⅳ级10例，并对每例患者术后进行随访，记录生存时间。随访时间6～36个月，平均（14.4±4.1）个月；其中术后复发46例，死亡35例。另以同期因颅脑外伤和高血压脑出血患者手术减压所得的非肿瘤正常脑组织作为对照，患者共60例，其中男40例，女20例，年龄15～79岁，中位年龄51岁。

1.2 试剂和检测方法 采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶（S-P）法。抗OPN鼠抗人单抗购于美国Santa Cruz生物科技公司，抗CD44v6鼠抗人单抗购于北京中山生物科技公司，免疫组织化学染色试剂盒购自北京中山生物科技公司。OPN和CD44v6工作浓度分别为1∶200和1∶50，每批染色均用已知阳性切片作为阳性对照，磷酸盐缓冲液代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判断 采用双盲法观察阳性反应，并由两位医师独立观察每张切片后一起做出判断。用低倍镜和高倍镜观察切片，判断标准根据以下两个方面：（1）按切片中显色肿瘤细胞数比例计分，0分为无肿瘤细胞显色，1分为显色肿瘤细胞数占肿瘤细胞总数＜25%，2分为显色细胞超过切片中肿瘤细胞总数的25%～50%，3分为显色细胞超过切片中细胞总数的50%。（2）按切片中肿瘤细胞显色强度计分，0分为细胞无显色，1分为呈浅黄色（弱染色），2分为呈棕黄色（中等染色），3分为呈棕褐色（强染色）。（1）十（2）＞3分记为阳性（其中＞4分为强阳性），≤3分记为阴性。

1.4 统计学处理 采用SPSS11.0统计软件，其中OPN和CD44v6的表达水平与临床特征的关系分析采用χ2检验，OPN和CD44v6的表达水平的相关性分析采用Spearman等级相关分析。

2 结果

2.1 OPN和CD44v6在胶质瘤中的表达 OPN表达大多定位于细胞胞质，少量细胞胞膜同时阳性；CD44v6表达主要定位于细胞膜，部分细胞胞质阳性（图1-4，见插页）OPN、CD44v6在脑胶质瘤中表达阳性率分别为75.0%（45/60）、66.7%（40/60），正常脑组织的阳性率分别为16.7%（10/60）、13.3%（8/60），两者在脑胶质瘤与正常脑组织中表达阳性率的差异均有统计学意义（χ2=6.48、4.85，均P＜0.05)。

2.2 OPN和CD44v6表达与胶质瘤患者临床特征关系胶质瘤中OPN、CD44v6的表达均与患者的年龄、性别、肿瘤部位无关，但与是否复发、高级别（Ⅲ～Ⅳ级）还是低级别(Ⅰ～Ⅱ级）有关，详见表1。

2.3 OPN和CD44v6在胶质瘤组织中表达的相关性分析结果显示，胶质瘤中OPN与CD44v6的表达呈显著正相关（r=0.65，P＜0.01），OPN和CD44v6共同表达对预测胶质瘤复发更有意义，详见表2。

表1 胶质瘤中OPN和CD44v6表达与肿瘤患者临床特征的关系（例）

表2 胶质瘤中OPN和CD44v6表达的相关性（例）

3 讨论

OPN是一种具有多种生物学活性的分泌型磷酸化糖蛋白，富含RGD序列，可与其αvβ3整合素、CD44等受体相互作用，促进细胞趋化、黏附、迁移和增殖，在恶性肿瘤发生及发展中起重要作用并与肿瘤的侵袭转移及患者预后密切相关[1,3]。Saitoh等[4]用Northern blot、Southern blot、免疫荧光细胞化学及Western blot对5株脑胶质瘤细胞株进行OPN检测，发现这些细胞株中恶性度高的OPN表达水平较高，而良性星形细胞瘤与非肿瘤组织表达水平较低，免疫组化检测也有类似结果，Takano等[5]比较了68例胶质瘤组织标本与正常脑组织中与血管内皮生长因子（VEGF）、组织因子（TF）、OPN、αvβ3受体表达情况，结果发现OPN和整合素αvβ3受体在多形性胶质母细胞瘤组织中表达水平明显增高，且与VEGF、TF表达水平相关，推测OPN可能参与了肿瘤的血管形成，Jang等[6]也有类似报道。本文胶质瘤OPN阳性表达率为75%，显著高于正常脑组织的16.7%。此外,病理分级高的胶质瘤OPN表达水平明显高于病理分级低的胶质瘤，复发者显著高于非复发者，差异均有统计学意义。我们曾通过RT-PCR半定量法检测胶质瘤组织OPN mRNA表达水平[7]，并探讨其与肿瘤临床特征之间的关系，也提OPNmRNA表达水平增高的胶质瘤患者预后不良。

目前研究认为，OPN在肿瘤发生、发展和转移过程中的可能作用机制主要有以下几个方面：（1）富含的RGD序列与细胞黏附密切相关，可与肿瘤细胞表面的整合素受体相结合，激活一系列细胞内信号，促进了肿瘤细胞增殖及浸润转移；（2）VEGF、血管通透性因子（VPF）协同作用，促进肿瘤生长，加快肿瘤迁移；（3）以自分泌形式促进自身生长，并与自身细胞表面受体结合，导致细胞移动能力增强、蛋白溶解酶分泌增加，引起基质降解；（4）抑制激活的巨噬细胞产生NO，提高肿瘤细胞的存活能力。可以认为：OPN表达反映了胶质瘤不良生物学行为的特性，一方面通过信号异常传导等刺激使正常细胞向恶性生物学行为细胞转化，另一方面通过降解细胞外基质促使肿瘤细胞浸润迁移,致使肿瘤生长迅速,病程进展，术中难以达到生物学全切除，因此OPN有促进胶质瘤发生、发展的作用。

CD44是细胞表面的跨膜糖蛋白，是介导细胞与细胞、细胞与基质间相互作用的黏附分子，其功能是促进细胞外基质与透明质酸结合，维持组织或器官的结构，促进细胞的浸润和迁移[2]。本研究发现与OPN类似，胶质瘤复发者CD44v6表达水平明显高于非复发者、高级别胶质瘤显著高于低级别胶质瘤，而与患者的年龄、性别、肿瘤部位无关；相关性分析表明，OPN和CD44v6在胶质瘤中的表达水平有显著相关性，两者在肿瘤细胞生物学行为转变及侵袭转移中可能起协同作用。我们推测其机制是肿瘤细胞高表达的OPN与其CD44v6受体相互结合，激活某种信号传导途径，引起肿瘤细胞的恶性转化及浸润迁移，且两者表达有协同作用，但其确切机制尚待进一步研究。检测OPN或CD44v6的表达水平可能有助于判断胶质瘤的生物学行为，尤其是联合检测对预测患者预后更具有临床意义。

[1] Wai P Y,Kuo P C.The role of osteopontin in tumor metastasis[J]. J of Surg Res,2004,121(2):228-241.

[2] 郝波,张国新,施瑞华.食管鳞癌中骨桥蛋白和CD44 v6的表达及其意义[J].中华内科杂志,2005,44（12）:928-929.

[3] Coppola D,Szabo M,Boulware D,et al.Correlation of osteopontin protein expression and pathological stage across a wide variety of tumor histologies[J].Clin Cancer Res,2004,10(1):184-190.

[4] Saitoh Y,Kuratsu J I,Takeshima H,et al.Expression of osteopontin in human glioma.Its correlation with the malignancy[J]. Lab Invest,1995,72(1):55-63.

[5] Takano S,Tsuboi K,Tomono Y,et al.Tissue factor,osteopontin, alphavbeta3 integrin expression in microvasculature of gliomas associated with vascular endothelial growth factor expression[J]. Br J Cancer,2000,82(12):1967-1973.

[6] Jang T,Savarese T,Low H P,et al.Osteopontin expression in intratumoral astrocytes marks tumor progression in gliomas induced by prenatal exposure to N-ethyl-N-nitrosourea[J].Am J Pathol,2006,168(5):1676-1685.

[7] 俞文华,车志豪,许培源,等.胶质瘤中骨桥蛋白表达的初步研究[J].医学研究杂志,2006,35(8):17-19.

Expressions of osteopontin and CD44v6 in glioma and their clinical significance

Osteopontin CD44v6 Glioma

2012-07-26）

（本文编辑：沈叔洪）

310006 杭州市第一人民医院神经外科

俞文华，E-mail：ywh699@hotmail.com