石蜡包埋骨组织的DNA检验

（昆明医学院法医学院法医物证教研室，云南 昆明 650500）

石蜡包埋骨组织切片标本是临床病理和法医鉴定中重要的个人实物档案，由于特殊需要，有时需对石蜡骨组织切片标本进行同一认定，与常规的血痕、唾液斑及新鲜组织不同，骨组织经甲醛等化学试剂固定、脱钙处理后的DNA更容易降解，石蜡包埋的骨组织切片能否有效提取出DNA是成功进行同一认定的关键。针对这一问题，本研究采用酚-氯仿法对石蜡包埋骨组织切片进行DNA检测，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 样本

某医院送检石蜡包埋骨组织切片5份，分别编号为：1号（骨组织中见腺癌）、2号（骨组织中见可疑上皮样细胞团）、3号（骨组织中见可疑肿瘤）、4号（骨组织中未见可疑肿瘤）、5号（正常骨组织）。

1.2 方法

按编号把石蜡切片小心剥离，放入1.5mL离心管中，54℃干燥箱中静置2 h，加入1 mL二甲苯于干燥箱中过夜，以离心半径5cm，10000r/min，离心5min，弃上清液，留沉淀。沉淀加1.5mL 95%乙醇溶液，室温静置 30 min，以离心半径 5 cm，10 000 r/min，离心5min，弃去上清液。再分别用80%、75%、70%乙醇溶液各洗涤1次。待乙醇挥干后加TES液1.5mL，振荡，以离心半径5cm，10000r/min，离心10min，弃去上清液，留沉淀。把上述脱蜡后的样本用酚-氯仿法提取DNA备用。

采用PCR扩增、PAGE电泳银染的方法对上述检材进行分析，检测9个常染色体基因座分别为D3S1359、D10S2325、D12S391、D19S253、D19S400、FABP、D21S2055、LPL、PLA2A。

2 结果与讨论

1号、2号、3号样本均获得了8个常染色体STR基因座的分型结果，4号样本获得了7个常染色体STR基因座的分型结果，5号样本获得全部常染色体STR基因座的分型结果。因1～4号切片样本是非正常骨组织，本身存在变异，故未检出全部基因座可能性大；5号切片样本是正常组织，故检出全部基因座。

脱蜡洗涤是能否成功提取DNA非常关键的步骤。对于石蜡包埋组织的DNA提取必须保证石蜡完全融化，处理前先将包埋组织置于54℃恒温箱中静置2h，过夜使包埋组织石蜡充分融化，加入足量二甲苯溶解并过夜，保证石蜡充分溶解于二甲苯。用梯度乙醇溶液洗涤，确保有效提取DNA。

骨组织的石蜡切片中提取的DNA通常是低拷贝DNA，DNA降解严重，导致有些基因座不能有效扩增。在法医鉴定中微量、污染的检材，可以使用酚-氯仿法、Chelex-100结合纯化法[1]、多重置换扩增技术[2]、硅珠法[3]、载体法[4]等DNA提取技术。

[1]严江伟，唐晖，王静，等.DNA提取方法和PCR循环次数对STR扩增成功率的影响[J].中国法医学杂志，2005，20（3）：151-153.

[2]陈玲，刘超，王慧君，等.多重置换扩增技术用于法医学微量 DNA 检测效果[J].证据科学，2008，16（6）：752-756.

[3]刘雅诚，王静，严江伟，等.硅珠法提取骨组织DNA[J].中国法医学杂志，2002，17（1）：38-40.

[4]毛坤云，周建清，顾西蒙，等.载体法检验微量检材DNA[J].法医学杂志，2008，24（6）：439-441.