山楂叶总黄酮乙醇溶液的稳定性研究*

林 冰，王慧娟，王 莹，沈燕君，齐美娜

(1.贵州大学生命科学学院，贵州贵阳550025;2.贵州省中药(民族药)创制工程中心，贵州贵阳550025;3.贵州大学中药天然药研发中心，贵州贵阳550025)

山楂叶为蔷薇科植物山里红Crataegus pinnatifida Bge.var.major N.E.Br.或山楂Crataegus pinnatifida Bge.的干燥叶［1］。山楂叶中含多种黄酮类化合物、有机酸类化合物、微量化合物和含氮化合物等［2］。山楂叶总黄酮(又称益心酮，HLF)具有抗氧化、降血压、降脂、抗炎镇痛等多种药理作用［3］。山楂叶总黄酮在应用及含量测定时多需要配制成乙醇溶液，本文考察了温度、pH值、光照、空气、氧化剂、还原剂以及金属离子等因素对山楂叶总黄酮乙醇溶液稳定性的影响，以期为合理开发和利用山楂叶总黄酮资源，以及为保证山楂叶总黄酮类化合物在加工贮藏中的稳定性提供科学依据。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 试验材料 山楂叶总黄酮提取物(临沂爱康药业有限公司);无水乙醇、盐酸、氢氧化钠、可溶性淀粉、葡萄糖、蔗糖、30%过氧化氢、氯化钾、氯化钠、三氯化铁、氯化钙、抗坏血酸等均为分析纯;蒸馏水。

1.1.2 试验仪器FA1004电子分析天平(上海分析仪器总厂);HB－8数显恒温水浴锅(上海梅香仪器有限公司);751G型紫外可见分光光度计(上海分析仪器总厂);WMK－02型电热恒温干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司);台式超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司);PHS－3C型pH计(上海雷磁仪器厂)。

1.2 方法

1.2.1 HLF供试溶液的制备HLF供试溶液在试验前配制。精确称量山楂叶总黄酮提取物0.500 0 g，加适量50%乙醇，超声溶解，过滤，滤液用50%乙醇定容至500 mL，得HLF供试溶液。

1.2.2 HLF供试溶液中总黄酮的含量测定 按照《中国药典2010年版》［1］“山楂叶总黄酮含量测定”项下方法，精密量取供试溶液1 mL，置25 mL容量瓶中，加水至6 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加氢氧化钠试液10 mL，再加水至刻度，密塞，摇匀，放置15 min，以相应的试剂为空白，在500 nm处测定吸光度。

1.2.3 温度对HLF乙醇溶液的影响 分别精密量取供试溶液5 ml于7支试管中，密塞，分别在30、40、50、60、70、80、90℃水浴条件保温30 min，取出冷却至室温后，照1.2.2项下含量测定方法测量吸光度值。

1.2.4 pH对HLF乙醇溶液的影响 分别精密量取供试溶液5 mL于12支试管中，再用HCl及NaOH调成pH值介于1～12之间的12份不同的样品，密塞，避光放置15 min后，照1.2.2项下含量测定方法测量吸光度值。

1.2.5 氧化剂H2O2对HLF乙醇溶液的影响 用30%H2O2配制3%、6%、9%、12%的H2O2溶液，分别量取配制好的4种不同浓度的H2O2溶液1.7 mL于4个10 mL容量瓶中，用供试溶液定容，即得H2O2浓度分别为0.5%、1.0%、1.5%、2.0%(2.0%为一般食品药品中的最大安全使用量)［5］的供试溶液，另于第5个10 mL容量瓶中加入1.7 mL蒸馏水，用供试溶液定容。避光放置15 min后，照1.2.2项下含量测定方法测量吸光度值。

1.2.6 还原剂Na2SO3对HLF乙醇溶液的影响用Na2SO3配制浓度为0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%的亚硫酸钠溶液，分别量取配制好的5种不同浓度的Na2SO3溶液1.0 mL于5个10 mL容量瓶中，用供试溶液定容，即得Na2SO3浓度分别为0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%(0.05%为一般食品药品中的最大安全使用量)［5］的供试溶液，另于第6个10 mL容量瓶中加入1.0 mL蒸馏水，用供试溶液定容。避光放置15 min后，照1.2.2项下含量测定方法测量吸光度值。

1.2.7 自然光照和空气对HLF乙醇溶液的影响分别精密量取供试溶液50 mL于3个100 mL烧杯中，其中1个烧杯用保鲜膜密封置于室内暗处避光保存，1个烧杯用保鲜膜密封置于室内自然光下保存，1个敞口置于室内自然光下保存，分别在0、5、10、15、20、35、50 h取样。照1.2.2.项下含量测定方法测量吸光度值。

1.2.8 金属离子对HLF乙醇溶液的影响 分别用氯化钠、氯化钾、氯化钙、三氯化铁配制含Na+、K+、Ca2+和Fe3+离子各为1 mg/mL的溶液。分别精密量取供试溶液50 mL于5个100 mL烧杯中，分别向4个烧杯中精密加入2 mL含上述离子的溶液，第5个烧杯中加入2 mL蒸馏水，密封避光放置，分别于0、1、2、3、4、5 d取样。照1.2.2项下含量测定方法测量吸光度值。

2 结果与分析

2.1 温度对HLF乙醇溶液的影响

温度对HLF乙醇溶液的影响结果见图1。由图1可知，HLF乙醇溶液吸光度值随温度的升高而变大，且当温度大于60℃以后，溶液吸光度的增加幅度明显变大。类似的现象殷丽君等人亦有报道［4］，原因可能是加热促使黄酮成分分解，产生了更多的酚羟基，因而吸光度明显升高。

图1 温度对HLF乙醇溶液稳定性的影响Fig.1 The effect of temperature on the stability of ethanol solution of howthorn leaf flavonoids

2.2 pH对HLF乙醇溶液的影响

pH对HLF乙醇溶液的影响结果见图2。由图2可知，pH值在2～11之间时，HLF乙醇溶液吸光度变化不大，较为稳定。当pH值大于11或者小于2时，吸光度随pH变化较明显。因此，HLF乙醇溶液在弱酸、弱碱及中性的环境时能够保持在较为稳定的状态，在强酸或者强碱环境时稳定性较差。

图2 pH值对HLF乙醇溶液稳定性的影响Fig.2 The effect of pH on the stability of ethanol solution of howthorn leaf flavonoids

2.3 氧化剂H2O2对HLF乙醇溶液的影响

氧化剂H2O2对HLF乙醇溶液的影响结果见图3。由图3可知，HLF乙醇溶液的吸光度随着氧化剂H2O2浓度的增大而线性减小。因此，山楂叶总黄酮在生产、贮存及使用过程中应注意避免与氧化剂接触。

2.4 还原剂Na2SO3对HLF乙醇溶液的影响

还原剂Na2SO3对HLF乙醇溶液的影响结果见图4。由图4可知，HLF乙醇溶液的吸光度随着还原剂Na2SO3浓度的增大而线性增加。因此，山楂叶总黄酮在生产、贮存及使用过程中应注意避免与还原剂接触。

图3 氧化剂H2 O2对HLF乙醇溶液稳定性的影响Fig.3 The effect of H2 O2 on the stability of ethanol solution of howthorn leaf flavonoids

图4 还原剂Na2 SO3对HLF乙醇溶液稳定性的影响Fig.4 The effect of Na2 SO3 on the stability of ethanol solution of howthorn leaf flavonoids

2.5 自然光照和空气对HLF乙醇溶液的影响

自然光照和空气对HLF乙醇溶液的影响结果见图5。由图5可知，密封避光条件下HLF乙醇溶液的稳定性较好，自然光对HLF乙醇溶液的稳定性有明显影响，而在空气与光照条件下，HLF乙醇溶液有较强的降解作用。

2.6 金属离子对HLF乙醇溶液的影响

金属离子对HLF乙醇溶液的影响结果见图6。由图6可知，Na+、K+和Ca2+离子对HLF乙醇溶液的稳定性影响不大，Fe3+具有使HLF乙醇溶液的吸光度数值增大的作用。类似的情况张久春等人亦曾经观察到过［6］。

图5 自然光照和空气对HLF乙醇溶液稳定性的影响Fig.5 The effect of light and air on the stability of ethanol solution of howthorn leaf flavonoids

图6 金属离子对HLF乙醇溶液稳定性的影响Fig.6 The effect of metal ions on the stability of ethanol solution of howthorn leaf flavonoids

3 结论

黄酮类化合物是一类稳定性较差的化合物。本文对山楂叶总黄酮乙醇溶液的稳定性进行了考察，发现高温、强酸强碱、氧化剂、还原剂、光照及空气等因素均对其稳定性有显著的影响。因此，山楂叶总黄酮乙醇溶液在使用过程中应尽量避免上述因素，长期存放时应置常温密闭避光处保存。