高效液相色谱-质谱联用法检查止喘灵胶囊中非法添加的醋酸泼尼松和茶碱

王 戈，赵培敬

（河南省南阳市食品药品检验所，河南 南阳 473061）

中成药制剂具有疗效确切、毒副反应小的优点，适用于一些 慢性疾病的治疗。目前市场上一些不法商家利用患者对传统中医药的信任，以及急于获得疗效的心理，在部分产品中非法添加了醋酸泼尼松、茶碱等激素类成分，此类成分有抗炎、抗过敏等作用，见效快，但不宜长时间使用，以免对人体造成危害。止喘灵胶囊，标识称系全部采用中药材加工而成，主要适用于咳嗽、哮喘、急慢性支气管炎、肺气肿、肺心病等症。由于此类药物成分比较复杂，尚未有有效方法检测非法添加的激素类成分。在此建立的高效液相色谱-质谱联用法，可快速、准确地对此类药物中非法添加的醋酸泼尼松、茶碱作出判断，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200-6310型液相色谱质谱联用仪，配有Agilent 1200型液相单元（在线脱气机、四元梯度泵、自动进样器、柱温箱、紫外检测器）、电喷雾离子化源（ESI）。醋酸泼尼松对照品（批号为100012-200105）、茶碱对照品（批号为 100121-199903）由中国药品生物制品检定所提供；止喘灵胶囊（抽验样品）；乙腈（色谱纯，天津市彪仕奇科技发展有限公司）；冰醋酸（分析纯，天津化学试剂有限公司）；乙酸铵（分析纯，天津市化学试剂三厂）；水为纯化水。

2 方法与结果

2．1色谱条件

色谱柱：Shimadzu shim-pack VP-ODS柱（250 mm ×4．6 mm，5 μm）；流动相：0．02 mol／L 乙酸铵 -0．1% 冰醋酸水溶液 ∶乙腈（71∶29）；流速：1．0 mL ／min；检测波长分段设置：0 ～9 min 为 240nm；9～15 min为 271 nm；柱温：35℃；进样量：10 μL。

2．2 质谱条件

电喷雾离子源（ESI），雾化气压力：50 psi，干燥气温度：380℃，流速：9．5 mL ／min，扫描范围：100 ～500 m ／z，毛细管电压：3 500 V。检测方式：0～9 min正模式一级、二级同时扫描；9～15 min负模式一级、二级同时扫描。

2．3 溶液配制

精密称取醋酸泼尼松与茶碱对照品各5 mg，分别置50 mL容量瓶中，加流动相适量，使溶解并稀释至刻度，作为储备液；精密量取上述2种贮备液各5 mL，置50 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取本品10粒，取出内容物，精密称定，混合均匀后称取相当于1粒的质量，置50 mL容量瓶中，加流动相适量，超声处理15 min，放冷，加流动相至刻度，摇匀；精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。

2．4 检测结果

按上述条件进样后，高效液相色谱（HPLC）紫外图谱在保留时间7．08 min和10．49 min处出现色谱峰，见图1 A，两个峰的塔板数及分离度均符合《中国药典》[1]要求；醋酸泼尼松一级、二级质谱见图2 A、图2 B，茶碱的一级、二级质谱见图2 C、图2 D。在相同的色谱及质谱条件下对供试品溶液进行分析，所得的HPLC紫外图谱见图 1 B，峰1的质谱图见图 2 E、图2 F，峰2的质谱图见图2 G、图2 H。供试品 HPLC图谱在与醋酸泼尼松、茶碱对照品保留时间处有色谱峰，经过与对照品溶液的质谱图相比较，供试品溶液中峰1的一级、二级质谱与醋酸泼尼松对照品溶液一级、二级质谱图相吻合，峰2的一级、二级质谱与茶碱对照品溶液一级、二级质谱图相吻合。由此可以确定，供试品溶液中添加了醋酸泼尼松、茶碱成分。

3 讨论

图2 质谱图

对照品溶液为醋酸泼尼松和茶碱的混合溶液，由于是液相质谱联用，故可根据离子质量数很容易辨别出醋酸泼尼松和茶碱。

在试验中，质谱的扫描采用正负模式交替扫描，经比较，醋酸泼尼松在正模式、茶碱在负模式下检测灵敏度高，二级质谱响应好，故最终选定文中的检测条件[2-4]。

中成药制剂中通常都含有多种组分，采用紫外检测法或荧光检测法对样品提取液进行检测时，由于选择性不强，在干扰组分多的情况下，目标组分不易分离。采用LC-MS／MS技术，将高效液相色谱的高分离能力与质谱分析的高选择性相结合，对纯中药制剂中非法添加的化学成分进行多级质谱分析，增强了检测结果的可信度。该法灵敏度高、选择性强，可为打击中成药的非法添加提供有力依据。

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典（二部）[M]．北京：化学工业出版社，2005：60．

[2]刘 斐，陈长青，郑 静．LC-MS／MS方法鉴定中药制剂中掺入的7种西药成分 [J]．药物分析杂志，2009，29（8）：1 378-1 381．

[3]胡 青，崔益冷．液质联用法测定解热镇痛类中药及保健品中非法掺加化学药品的研究[J]．中成药，2009，31(10)：1 547-1 550．

[4]向智敏，张 骊．HPLC和LC-MS／MS鉴定锁阳固精丸中非法添加的西地那非衍生物[J]．中国现代应用药学，2010(2)：167-171．