高效液相色谱法测定复方芩兰口服液中绿原酸含量

李延雪，杨立志，苏玉娟

（黑龙江省鸡西市食品药品检验检测中心，黑龙江 鸡西 158100）

复方芩兰口服液是由金银花、黄芩、连翘、板蓝根组方，经适宜加工方法制成的中药口服制剂，收载于《国家中成药标准汇编·内科肺系（一）分册》[1]，具有辛凉解表、清热解毒的功效，用于外感风热引起的发热、咳嗽、咽痛。笔者采用高效液相色谱法测定了绿原酸的含量[2-10]，样品处理方法简单，分离效果好，快速准确，重复性好，可更好地控制该制剂的质量，现报道如下。

1 仪器与试药

岛津 LC-2010A型高效液相色谱仪；AG285型电子分析天平；岛津UV-2550型紫外分光光度计。绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110753-200413）；复方芩兰口服液（批号分别为 20110907，20110908，20110909）；水为纯化水，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：Agilent Extend C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流动相：甲醇 -水 -冰醋酸（17 ∶83 ∶1）；流速：1．0 mL／min；柱温：30 ℃ ；进样量：10 μL；检测波长：324 nm。理论板数按绿原酸峰计算不低于5 000。绿原酸与相邻杂质峰之间的分离度均大于1．5。

2．2 溶液制备

精密称取经减压干燥12 h的绿原酸对照品适量，加水制成每1 mL中含绿原酸对照品0．036 4 mg的溶液，即得对照品溶液。精密量取样品4 mL，置50 mL棕色容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0．45 μm）滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按处方量并以相同工艺制备不含金银花的阴性对照品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

专属性试验：取 2．2项下3种溶液，按2．1项下色谱条件测定。结果阴性对照品溶液色谱图中，在绿原酸色谱峰相应位置上无干扰峰出现，表明阴性对照品的其他组分对绿原酸的测定无干扰（图 1）。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：精密吸取绿原酸对照品溶液 2，5，10，15，20 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，以对照品进样质量浓度（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行回归分析，得回归方程 Y=2．838 9 ×104X ＋8．732 3×103，r=0．999 9（n=5）。结果表明，绿原酸质量浓度在 7．28～72．8 μg／mL 范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液10 μL，连续进样5次，以峰面积计算，结果的 RSD为0．92%（n=5），表明仪器精密度良好。

重现性试验：取同一批样品（批号为20110909），分别依法制备6份供试品溶液并测定含量。结果的 RSD为0．76%（n=6），表明方法重现性良好。

稳定性试验：取同一批样品（批号为20110909）的供试品溶液，分别于配制后 0，2，4，6，8，12，24 h 时依法测定。结果的 RSD为1．14%（n=7），表明供试品溶液在24 h内稳定。

加样回收试验：取已知含量的同批样品（批号为20110909，绿原酸含量为 0．398 mg／mL）6份，每份精密量取本品2 mL，以2份为 1组，共 3组，每组分别精密加入绿原酸 0．625 0，0．780 0，0．937 5 mg，按拟订方法制备溶液及测定含量，计算回收率。结果见表 1。

2．4 样品含量测定

取3批样品，按2．2项下方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件测定峰面积，用外标法计算峰面积。结果批号分别为20110907，20110908，20110909的样品中绿原酸含量分别为0．382，0．419，0．398 g ／L。

表1 绿原酸加样回收试验测定结果（n＝6）

3 讨论

取绿原酸对照品适量，加水制成对照品溶液，进行光谱扫描，结果显示绿原酸在324 nm波长处有最大吸收，故选择324 nm作为测定波长。

因绿原酸见光见热不稳定，温度太高会发生分解，故试验中对绿原酸对照品和样品均采用棕色瓶盛放并尽量避免加热。

为达到良好的分离效果，曾采用甲醇-0．4%磷酸溶液（10∶90）、甲醇 - 乙腈 -0．05% 磷酸溶液（5 ∶5 ∶90）、乙腈 -0．4% 磷酸溶液（15 ∶85）、甲醇 -水 -冰醋酸（17 ∶83 ∶1）作为流动相进行分离，结果表明，采用甲醇 -水 -冰醋酸（17∶83∶1）作为流动相时，绿原酸峰与其他峰分离较好，基线较稳，可得到较好的分离效果。

金银花作为复方芩兰口服液中的主要成分，测定绿原酸的含量具有重要意义。该方法简便、快速、准确，重复性好，回收率好，可作为复方芩兰口服液的质量检测方法，以便有效控制该制剂的质量。

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