HPLC法测定颈腰康片中士的宁的含量

张 进 李文君

（吉林省通化市食品药品检验所中药室，通化134001）

HPLC法测定颈腰康片中士的宁的含量

张 进 李文君

（吉林省通化市食品药品检验所中药室，通化134001）

目的 建立以HPLC法检测颈腰康片中士的宁的含量测定。方法 色谱柱：依利特C18（4.6×250mm，5μm）；流动相：乙腈-0.01mol／L庚烷磺酸钠与0.02mol／L磷酸二氢钾等量混合溶液（用10%磷酸调节pH值2.8）（23∶77）；流速：1.0ml／min；柱温：室温；检测波长：254nm；以士的宁为对照品，采用外标法定量。结果 士的宁线性范围为0.0247-0.2223μg（r=1.0000），平均回收率为99.80%，RSD为1.29%。结论 本法简便，结果准确，重现性好，可用于该药品的质量控制。

颈腰康片；士的宁；HPLC；含量测定

颈腰康片是由制马钱子、伸筋草、香加皮、乳香（醋炒）、没药（醋炒）、红花等十味中药组成，其中制马钱子为本处方中的君药之一。制马钱子为马钱科植物马钱Strychnos nux-vomica L的干燥成熟种子的炮制加工品，主要成份为番木鳖碱（士的宁）、马钱子碱、伪番木鳖碱、番木鳖次碱等，均属生物碱类成分。具有通络止痛、散结消肿等作用，用于风湿顽痹，麻木瘫痪、跌扑损伤、类风湿性关节痛等症。为了有效地控制颈腰康片的内在质量，我们以制马钱子中士的宁作为指标性成分，采用反相高效液相色谱法测定制马钱子中士的宁的含量，方法易于操作，结果准确，重现性好专属性强，现报告如下。

1 仪器与试药

日本岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪，士的宁对照品（由中国药品生物制品检验所提供）批号：110715-200212；规格：供含量测定用。乙腈为色谱纯，水为纯化水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：依利特C18（4.6×200mm，5μm）；流动相：乙腈-0.01mol／L庚烷磺酸钠与0.02mol／L磷酸二氢钾等量混合溶液（用10%磷酸调节p H值2.8）（23∶77）；流速：1.0ml／min；柱温：室温；检测波长：254nm；理论板数按士的宁峰计算应不低于6000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取士的宁对照品12.5mg置50ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，再精密吸取1ml置10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取约1.2g，置具塞锥形瓶中，精密加入氢氧化钠试液3ml，放置30分钟，再精密加入三氯甲烷20ml，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，分取三氯甲烷提取液，用铺有少量无水硫酸钠的滤纸滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液3ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例配成不含制马钱苷的阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。分别精密吸取阴性对照溶液、供试品溶液及对照品溶液各5μl，注入液相色谱仪中，按液相色谱条件测定，结果表明，阴性对照溶液色谱图中与对照品相同保留时间处无干扰。

2.3 线性关系考察 精密称取士的宁对照品适量加甲醇制成每1ml含25μg的溶液，分别精密吸取1、3、5、7、9μl测定，记录色谱图并测定峰面积，以峰面积（A）对进样量（μg）回归，回归方程为：Y=2510579x-794（r =1.0000），结果表明士的宁在0.0247-0.2223μg范围内，与峰面积呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验 精密吸取对照品溶液5μl，注入液相色谱仪，重复进样5次，RSD为1.09%。

2.5 稳定性试验 取同一批样品的供试品溶液，分别于0、2、4、8、12h，测定含量，RSD为0.13%。结果表明供试品溶液在12h内稳定。

2.6 重复性试验 取同一批样品，按2.2.2项下操作方法独立测定五次，用外标法计算士的宁含量（mg／片），分别为0.532、0.534、0.534、0.530、0.533；RSD为0.31%。

2.7 回收率试验 精密称取已知含量的样品适量，精密加入一定量的对照品，按2.2.2项下操作，作为试验溶液；分别精密量取对照品溶液和试验溶液各5μl进样，计算回收率（结果见表1）。平均回收率99.80%，RSD= 1.29%，结果表明本法回收率较好，准确度较高。

表1 回收率试验结果

2.8 样品测定 取不同批号的颈腰康片，按2.2.2项下操作，分别精密量取对照品溶液和样品溶液各5？l，注入高效液相色谱仪，测定士的宁的含量（结果见表2）。

表2 三批样品中士的宁的含量测定结果

3 讨论

3.1 检测波长的选择 取士的宁对照品的甲醇溶液，经UV-260紫外分光光度计200nm～400nm范围内测定，结果士的宁在254nm波长处，有最大吸收故选择254nm为本实验的测定波长。

3.2 流动相的选择 参照有关资料［1］我们对乙腈-0.01mol／L庚烷磺酸钠与0.02mol／L磷酸二氢钾等量混合溶液（用10%磷酸调节pH值2.8）（21∶79）、乙腈-0.01mol／L庚烷磺酸钠与0.02mol／L磷酸二氢钾等量混合溶液（用10%磷酸调节PH值2.8）（22：78）、乙腈-0.01mol／L庚烷磺酸钠与0.02mol／L磷酸二氢钾等量混合溶液（用10%磷酸调节p H值2.8）（23∶77）进行优化试验，结果，以乙腈-0.01mol／L庚烷磺酸钠与0.02mol／L磷酸二氢钾等量混合溶液（用10%磷酸调节p H值2.8）（23∶77）为流动相分离效果较好，保留时间适度，因此，确定其为本法的流动相。

3.3 样品提取方法的考察 我们采用了三氯甲烷50ml与浓氨试液1ml，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置24小时及精密加入氢氧化钠试液3ml，放置30分钟，再精密加入三氯甲烷20ml，称定重量，加热回流2小时。结果后者提取方法即节省时间又提取充分，因此我们采用正文所述的供试品溶液的制备方法。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：化学工业出版社，2010.

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.06.113

1672-2779（2013）-06-0157-02

��韩世辉

2013-03-12）