益肾康颗粒对慢性移植肾肾病患者T 淋巴细胞亚群的影响

王光策 王锁刚 张 缠 陈 铸 崔 勇 何 伟 张 翥

河南中医学院第一附属医院肾移植科，河南郑州 450003

肾移植受者出现的排斥反应、感染是术后最常见的并发症，其次是服用免疫抑制剂造成的肝肾功能损害，其结局是引起慢性移植肾肾病（CAN），往往造成移植肾失功，严重影响移植者/肾的长期存活。因此，肾移植术后并发症的预防尤为重要，而减少并发症的关键在于调节患者的免疫状态，T 淋巴细胞亚群的水平能够反应机体的免疫状态。本研究采用中药益肾康颗粒（由积雪草、川芎、生白芍等组成）治疗CAN，并观察T 淋巴细胞亚群的变化，以明确益肾康颗粒对CAN 患者免疫状态的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料

以河南中医学院第一附属医院2009年8月～2012年3月门诊及住院CAN 患者120例为研究对象，其中，男84例，女36例，平均年龄41.2岁。将120例患者分为益肾康大剂量组（益肾康组）、标准免疫抑制剂治疗组（对照组）。益肾康组79例，男57例，女22例，平均年龄41.3岁，肾移植术后6～81个月；对照组41例，男28例，女13例，平均年龄40.6岁，术后6.5～72个月。两组患者性别、年龄、病程及用药前各项指标比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

入组标准：①年龄18～60岁的肾移植患者，且在6个月后发生血肌酐（Cr）异常升高，复查仍证实133 μmol/L＜Cr＜442 μmol/L；②调整免疫治疗方案，如增减环孢素（CsA）用量、用他克莫司（FK506）替换 CsA后Cr 稳定 4周以上无变化；③移植肾功能呈现出进行性减退趋势；④未进行血液透析治疗；⑤未使用血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）类降压药和对肾功能有同等影响的药物；⑥移植肾穿刺活检呈现出以肾间质纤维化、肾小管萎缩为特征的CAN 改变（Banff 模式计分均为Ⅰ级）。

排除标准：①临床表现和病理穿刺符合急性排斥反应；②急性CsA 或FK506 中毒；③彩超排除尿路梗阻以及肾动脉狭窄等病变所致的肾功能损害；④血Cr＞400 μmol/L；⑤过敏体质，或对多种药物过敏者；⑥因各种原因不合作，不能坚持用药者。

1.2 方法

所有患者术后常规应用CsA 或FK506+吗替麦考酚酯（MMF）+强的松三联免疫抑制方案治疗。益肾康组在常规治疗的基础上加用益肾康颗粒30 g/d，共治疗12周。对照组除不给予益肾康颗粒外，其余治疗及疗程均与治疗组相同。两组治疗期间未加入任何对肾功能有影响的药物，不注射促红细胞生成素，根据病情变化及血药浓度情况进行动态调整CsA、FK506等免疫抑制剂用量，按时记录各项观察指标。所有患者对治疗方案均知情同意。

1.3 观察指标

治疗前及治疗后第4、8、12周后，两组病例均抽静脉血 2 mL，EDTA 抗凝，外周血 CD3+、CD4+、CD8+细胞亚群的检测采用三色流式细胞术。应用美国BD公司Cell Quest软件分析T 淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+计数， 计算出每例CD4+/CD8+的比例，血液生化、血常规、CSA/FK506 血浓度、尿常规，每人每次填写自制观察项目登记表，以利统计。治疗过程中详细观察、记录药物的不良反应，比较各项指标的变化。

1.4 统计学方法

采用SPSS 19.0 软件进行统计数据处理。计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用t检验。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组治疗前后外周血T 淋巴细胞亚群水平比较

治疗前两组患者外周血T 淋巴细胞亚群水平均较低，其水平相近，差异无统计学意义（P＞0.05）；，治疗前后T淋巴细胞 CD3+、CD4+、CD8+计数及 CD4+/CD8+的比例比较，益肾康组差异有统计学意义（均P＜0.05），对照组患者治疗后各指标虽有上升，但差异均无统计学意义（均P＞0.05）；与对照组比较，益肾康组各指标差异有统计学意义（P＜0.05）；益肾康组间比较差异亦有统计学意义（P＜0.05）；各组第4、8、12周间比较，益肾康组各指标差异均有统计学意义（P ＜0.05），而对照组无明显差异（P＞0.05）。见表1。

2.2 不良反应

治疗组有l例患者在用药过程中诉腹胀、食欲减退，但程度较轻，未见肝功能异常者，不影响治疗。其余患者未见严重的不良反应。

3 讨论

CAN的临床特征为进行性移植肾功能减退，伴有高血压、蛋白尿；组织学上将移植肾呈现出间质纤维化、肾小管萎缩等特点的各种非特异性病理改变定义为CAN[1]。免疫学和非免疫学因素均能引起CAN，而CAN的最终结局是导致移植肾功能衰竭而回归透析，是影响移植肾远期功能的重要因素[2]。排斥和感染是肾移植后常见的并发症，通常会诱发CAN，而抗排斥和感染是一对不可避免的矛盾，了解机体的免疫状态则能够很好地解决这个矛盾。CD3+、CD4+、CD8+细胞是具有重要功能的T 淋巴细胞亚群，可以反映机体细胞免疫状态；CD4+/CD8+比值为免疫调节标志，在一定程度上反映机体细胞免疫调节功能[3]。因此，T 细胞亚群是反应机体免疫状态的敏感指标。

表1 两组治疗前后外周血T淋巴细胞亚群水平比较（±s）

注：与对照组治疗后比较，*P＜0.05；与本组治疗前比较，★P＜0.05

组别时间 CD3+（个/μL）CD4+（个/μL）CD4+（%）CD8+（个/μL）CD4+/CD8+益肾康组（n=79）对照组（n=41）治疗前治疗第4周治疗第8周治疗第12周治疗前治疗第4周治疗第8周治疗第12周326.1±159.6 533.1 ±267.9*★698.4 ±362.5*★1 602.3±807.7*★496.5±212.8 528.5±198.4 547.7±251.2 580.7±239.7 240.3±127.6 301.3±130.5*★351.9±131.6*★478.6±117.6*★281.4 ±87.5 278.4±113.8 298.1 ±98.6 304.8±124.6 40.6±9.8 42.3 ±8.5*★47.2 ±7.8*★50.7 ±8.2*★37.3±13.1 37.7±10.8 38.2±9.6 39.4±12.7 157.6±68.4 259.6 ±123.1*★385.3 ±143.2*★541.3 ±143.6*★348.1±151.0 457.6±168.2 481.4±89.3 469.4±101.5 1.1 ±0.2 1.3±0.6*★1.5±0.1*★1.9±0.2*★0.7 ±0.3 0.8 ±0.3 1.1 ±0.2 1.0 ±0.1

近年来，中药制剂逐步应用到CAN的治疗[4]，但目前尚缺乏中医药在CAN 治疗中的系统研究。益肾康颗粒由积雪草、川芎、生白芍等组成，为我院张翥教授的经验名方，在慢性肾脏病（chronic kidney disease，CKD）患者蛋白尿和慢性肾功能不全患者的治疗中取得较满意效果。现代药理表明，方中生白芍具有双向调节免疫、抗炎、抗应激、镇痛、保肝等作用，现已广泛应用于自身免疫性疾病的治疗[5]；川芎可改善微循环，抗氧化及抗纤维化，抑制肾系膜细胞增殖，并有效提高慢性肾功能不全患者肌酐清除率等作用[6]，其提取物川芎嗪可显著抑制T 淋巴细胞活化和增殖[7]；积雪草提取物对ConA 诱导的淋巴细胞增殖有明显的抑制作用，可显著抑制G0/G1期细胞向S和G2/M期转化，并能降低细胞内Ca2+水平，抑制白介素 2（IL-2）和γ干扰素（IFN-γ）转录和表达，从而阻滞淋巴细胞进入S期，起到免疫抑制的作用[8]；有研究提示，积雪草能够抑制间质细胞外基质（extracellular matrixc，ECM）和成纤维细胞生成，防止粘连发生，缓解粘连形成[9]。既往研究证实[10-12]，益肾康颗粒中的主要组分积雪草可降低单侧输尿管结扎大鼠肾结缔组织生长因子（CTGF）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达，并可通过直接抑制体外培养的肾小管上皮细胞中转化生长因子 β1（TGF-β1）的表达，维持骨形成蛋白（BMP-7）的表达，减轻肾小管间质的损伤，发挥抗肾间质纤维化作用。益肾康颗粒的上述药理作用是治疗CAN 和影响CAN 患者T淋巴细胞亚群的理论基础。益肾康颗粒是复合制剂，药物之间具有协同和拮抗的作用，发挥了多种成分、多个靶点作用，药物之间的相互作用共同调节着机体的免疫状态。

本组资料显示，在常规免疫抑制治疗的情况下，益肾康组 CD3+、CD4+、CD8+计数及 CD4+/CD8+的比例较治疗前有不同程度的上升，且呈剂量、时间依赖关系，说明益肾康颗粒可以提高T 淋巴细胞亚群的水平，提高机体的免疫状态，减少肾移植术后的感染机会，从而对抗排斥治疗和感染的矛盾起到关键调节作用，同时在一定程度上阻止了诱发CAN 发生的危险因素，改善移植肾的长期预后，并减少感染的发生率，且无严重不良反应。因此，益肾康颗粒对T淋巴细胞亚群的影响为防治CAN 提供了新的思路和理论依据。然而，益肾康颗粒调节CAN 患者免疫状态的机制尚需更深入的研究。

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