CD10蛋白在结直肠癌中的表达及临床意义
2013-01-29粟连秀张兆明
粟连秀 张兆明
(广西医科大学第八附属医院 广西贵港 537100)
结直肠癌是人类常见的消化道恶性肿瘤,其发病率及死亡率在逐年上升。CD10是一种细胞表面锌依赖性金属蛋白酶,它在多种正常细胞、肿瘤细胞及一些肿瘤组织的间质细胞中表达,调控着肿瘤的浸润转移[1、2]。本研究采用免疫组织化学的方法检测CD10蛋白在结直肠癌中的表达,探讨其表达与结直肠癌的发生及其与各临床病理因素间的关系。
1 材料和方法
1.1 一般资料 收集我院病理科2010年1月至2012年12月手术切除的结直肠癌标本80例,男56例,女24例。患者年龄28~81岁,平均年龄56.4岁。其中结肠癌48例,直肠癌32例;按Dukes分期:A期14例,B期18例,C期28例,D期20例;按肿瘤的分化程度:高中分化腺癌62例,低分化腺癌18例;有脉管侵犯者24例,无脉管侵犯者56例;肿瘤浸透浆膜者66例,未浸透浆膜者14例;有淋巴结转移者48例,无淋巴结转移者32例。以同期结肠癌根治术标本中远离癌的正常结肠黏膜50例作为对照组。所有标本均经病理证实,术前均未行放、化疗。
1.2 主要试剂 鼠抗人CD10单克隆抗体、即用型快捷免疫组化MaxVisionTM试剂盒及DAB显色剂均为福州迈新生物技术公司产品。
1.3 方法 采用快捷免疫组化MaxVisionTM法。严格按照产品的操作说明。具体染色步骤:①石蜡切片脱蜡和水化后,用PBS(PH7.4)冲洗3次,每次3min。②高温高压抗原修复。③3%H2O2室温下孵育10min,以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS冲洗3次,每次3min,除去PBS液。④分别滴加CD10一抗工作液,室温下孵育60min。⑤PBS冲洗3次,每次5min,除去PBS液,每张切片加1滴即用型 MaxVisionTM试剂,室温下孵育15min。PBS冲洗3次,每次3min。⑥除去PBS液,每张切片加2滴新鲜配制的DAB溶液,显微镜下观察5 min。⑦自来水冲洗,苏木素复染,自来水冲洗返蓝,梯度酒精脱水干燥,中性树胶封固。用已知子宫内膜间质细胞CD10阳性的组织切片做阳性对照,以PBS代替-抗做阴性对照。
1.4 结果判断 CD10蛋白免疫染色阳性物质呈棕黄色颗粒,在细胞质和细胞膜上着色。染色结果判定:按阳性细胞数>5%为阳性表达。
1.5 统计学分析 用SPSS13.0统计软件包进行分析,各组之间率的比较采用χ2检验。P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 CD10蛋白表达情况 在正常结肠黏膜组织和结直肠癌组织中,CD10蛋白阳性率分别为0(0/50)和30.0%(24/80)。CD10蛋白在结直肠癌组织中的阳性率与正常结肠黏膜组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。
2.2 CD10蛋白的表达与结直肠癌临床病理特征的关系 结直肠癌组织中CD10蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤部位无关(P>0.05),而与肿瘤细胞的分化程度、脉管侵犯、浸润深度、临床分期及有无淋巴结转移有关(P<0.05)。见表1。
表1 CD10蛋白表达与结直肠癌临床病理特征的关系
3 讨 论
CD10是金属蛋白酶家族中的一员,是一种细胞表面锌依赖性金属蛋白酶,相对分子量为100kD左右,在细胞膜上发挥生物学作用。CD10常常作为急性白血病和非霍奇金淋巴瘤分类中的诊断指标之一[3]。CD10蛋白广泛表达于人类多种细胞,如前淋巴细胞、中性粒细胞、肌上皮细胞、肾小管上皮细胞、正常骨髓及子宫内膜间质细胞等。CD10蛋白结构与MMP的间质溶解素相似,肿瘤细胞产生可溶性因子诱导间质细胞分泌CD10,来促进肿瘤细胞的增殖[4]。周春辉[5]等采用原位杂交技术和体外细胞培养的方法研究CD10在胰腺癌中的表达,研究发现CD10mRNA表达与胰腺癌组织学分级及淋巴结转移存在密切关系,提示CD10在胰腺癌的发展、转移及预后中有重要作用。白冬雨[6]等研究发现CD10在乳腺UDH及ADH肌上皮中呈中重度阳性着色;在DCIS中呈轻中度阳性着色,较ADH表达水平明显降低;而在IDC中,癌巢周围未见明显的CD10着色,提示CD10对鉴别ADH和DCIS,DCIS和IDC具有一定意义,联合运用P63和calponin可以提高乳腺良恶性疾病的鉴别诊断。李守宾[7]等研究发现CD10在正常膀胱黏膜中不表达,在膀胱癌组织中高表达,而且在高级别、临床分期晚及淋巴结转移的癌组织中表达率明显升高,且差异有统计学意义。
本实验研究对正常结肠黏膜组织及结直肠癌组织进行CD10蛋白的检测,结果显示:在正常结肠黏膜组织中CD10蛋白不表达,在结直肠癌组织中存在CD10蛋白的高表达,二者差异具有统计学意义(P<0.01),提示CD10蛋白在结直肠癌间质细胞的过度表达可能与结直肠癌的发生有关。研究结果还显示:结直肠癌中CD10蛋白的表达与患者性别、年龄、肿瘤部位无关,而与肿瘤细胞的临床分期、分化程度、浸润深度、脉管侵犯及有无淋巴结转移有关,随着肿瘤细胞分化程度下降,CD10蛋白表达升高;已浸透浆膜组织中CD10蛋白阳性率明显高于未浸透浆膜者;有脉管侵犯病例CD10蛋白阳性率明显高于无脉管侵犯病例;有淋巴结转移病例CD10蛋白阳性率明显高于无淋巴结转移病例,差异均具有统计学意义(P<0.05)。本研究提示结直肠癌组织中CD10蛋白阳性可促进结直肠癌细胞的浸润转移,CD10蛋白可以作为结直肠癌患者预后的参考指标。
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[7]李守宾,刘俊江,李连印,等.CD10在膀胱移行细胞癌中的表达及意义[J].中国煤炭工业医学杂志,2010,13(5):728-729.