应用酶联免疫吸附试验检测肝炎病毒血清标志物临界结果的报告分析

郑 赫

（辽宁省大连市金州区第一人民医院检验科，辽宁 大连 116000）

应用酶联免疫吸附试验检测肝炎病毒血清标志物临界结果的报告分析

郑 赫

（辽宁省大连市金州区第一人民医院检验科，辽宁 大连 116000）

目的 分析酶联免疫吸附试验测定肝炎病毒血清标志物假阳性的临界值、产生原因及处理方法。方法 收集2010年1月至2013年8月期间，我院接受肝炎病毒筛查的患者370例，取血液标本采用酶联免疫吸附试验进行肝炎病毒血清标志物检测，对于报告结果为假阴性或者假阳性者进行临界值分析。结果 本组370份标本中，检出HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb弱阳性依次为8例（14.0%）、65例（34.8%）、2例（13.3%）、14例（17.1%）、16例（14.3%）；15例HBeAb阴性和12例HBcAb阴性。结论 弱阳性标本往往存在临界值问题，检测中存在时阴时阳的情况。在临床检验中，在报告阴性、阳性结果的同时应报告临界值以及标本OD值。临界值直接影响着检测结果的准确性，应尽量避免，应用统一临界值质控血清对于提高检测结果的准确性具有重要意义。

酶联免疫吸附试验；肝炎病毒；血清标志物；临界值

肝炎病毒血清免疫学标志物检测是临床诊断肝炎患病情况及判断病情、传染性等的重要手段。酶联免疫吸附试验（ELISA法）因具有简便快速、特异性好、灵敏度高以及特异性强等特点而在临床中广泛应用。其诊断方法主要是根据配套试剂所设定的判断值进行判断，因该法在检测中受到的影响因素较多，检测结果重复性不好，极易导致处于判断值周围的标本产生假阴性或者假阳性[1]。目前，如何正确处理和报告肝炎病毒血清标志物检查临界结果是临床检验人员关注的重点问题。本文就临床实践过程中出现的临界值情况进行探讨，旨在为临床报告和处理临界结果提供参考，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源

选取2010年1月至2013年8月期间，我院门诊以及住院患者370例的血清标本，均接受乙肝病毒血清标志物检测。

1.2 仪器和试剂

TECAN SUNRISE酶标仪，TECAN HydroFlex 洗板机，移液器由赛默飞世尔科技公司提供。乙肝五项标志物试剂盒由上海科华公司生产，质控品均选自卫生部检验中心。

1.3 方法

所有操作均严格按照说明书进行。HBcAb按照1∶30的比例进行稀释，将标本与质控品同时进行检验；质控品HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb的含量依次为2ng/mL、2mIu/mL、30mIu/mL，4NCU/mL，2NCU/mL。临界值计算严格按照说明书提供计算公式进行计算，其中，HbsAg、HBeAg及HBsAb的计算公式相同，对于平均阴性值＜0.05者，均按照0.05×2.1=0.105报告。即标本OD＞0.105表示阳性，反之则为阴性。HBeAb的临界值计算为（平均阳性值+平均阴性值）/2。如标本的OD值＜临界值则为阳性，反之则为阴性。HBcAb的临界值计算为0.5×平均阴性OD值。临界值判断与HBeAb相同。

2 结 果

本组370份受检标本中，57份为HBsAg阳性，其中，8份为弱阳性（标本OD≤2ng/mL质控品的OD），占总阳性数的14.0%。187份为HBsAb阳性，其中65份为弱阳性（标本OD≤2ng/mL质控品的OD），占总阳性数的34.8%；15份为HBeAg阳性，其中，2份为弱阳性（标本OD为0.157、0.114），占总阳性数的13.3%；82份为HBeAb阳性其中，14份为弱阳性（标本OD＜临界值0.2），占17.1%；15份为弱阴性标本（标本OD＞临界值0.2）；112例为HBcAb阳性，其中16例（14.3%）为弱阳性，12例为弱阴性（标本OD＞临界值0.2）。

3 讨 论

3.1 临界结果的干扰因素

临床研究发现，对于肝炎病毒标志物测定为强阳性患者而言，多次复查仍为阳性，而对于弱阳性或者弱阴性患者而言，其OD值越接近临界值，重复性就会越差，在复查中极易出现时阴时阳的情况，导致患者或者临床难以接受[2]。ELISA法的影响因素较多，例如试剂盒质量、仪器未校准、标本被细菌污染、标本溶血、标本凝固不全、剧烈震荡样本以及检测时操作误差等，均可导致测量值误差而出现临界结果[3]。本研究中，340例经ELISA检查后，共有105例显示为弱阳性，28例显示为弱阴性。

3.2 临界值范围的界定

对于ELISA法临界值的判定，目前尚无统一的临界范围界定标准，国内主要是根据试剂盒上提供的判断值作为依据进行判断，对测定结果未要求进行复检，而进口试剂盒多要求进行复检，但对于阴性结果小于判定值者亦未要求复检。此外，进口检验试剂盒中，对于阳性结果均要求进行双份复检，对于阴性结果报告均要求以双孔测定呈阴性时方可报告为阴性，对于复检双孔中一阴一阳者要求进行确认实验[3]。因此，临床实践中应根据具体情况而定，可选择低浓度定值室内质控品进行阳性临界复检范围的设定，并对弱阳性以及较为接近判定值的阴性标本进行多次复检，以初检和复检结果不相符较多的范围作为临界复检范围。

3.3 临界结果的确认

对于筛查呈阳性的标本，应采用2种不同原理的试剂或者不同厂家的试剂进行复检。根据国外检测标准，所有的阳性标本均应作双孔复检，对于复检结果不统一时再进行确认性试验，以排除内源性干扰因素[4]。

3.4 临界结果的处理与报告

在临床检验中，对于献血肝炎病毒的筛查应高度重视对于临界阴性样本的复检，对于经复检显示仍呈临界阴性者，则应避免采集此类血源。对于体检人员的肝炎病毒筛查，则重视临界阳性标本的复检，对于经复检仍呈临界阳性者，应报告为“可疑”，并建议其进行进一步检查。可改为定量基因扩增法或者具有较高灵敏度的免疫测定法进行复检，切勿轻易报告阳性。对于经多次复检仍为临界阴性或者临界阳性者，应结合其他标志物进行综合分析，对于非初诊患者，可查阅其以往检测结果，分析其临床用药情况作出可疑、弱阳性或者阴性报告；也可向临床医生提供S/CO值，以指导临床诊断治疗。

[1] 司志霖,蔡晓宁.化学发光免疫分析与酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒标志物比较分析[J].现代医药卫生,2013,29(2):196-198.

[2] 陈慧英,肖艳群,张健,等.酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒表面抗原临界样本复检范围的探讨[J].检验医学,2010,25(6):447-450.

[3] 卢振,汪海华.酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒标志物的影响因素及存在问题[J].检验医学与临床,2011,8(2):255-256.

[4] 林耀堂,陈海荧.乙型肝炎病毒前S1蛋白检测在乙型肝炎病毒感染临床诊断的应用[J].现代医药卫生,2013,29(12):1870-1871.

R373.2

B

1671-8194（2013）34-0081-02