同步固—液双相泌尿生殖道支原体培养、鉴定和药敏

陈玉莲 徐涛 翁杏花 马碧蓝 李磊邦

(台山市人民医院检验科 广东台山 529200)

支原体(mycoplasma)是一类大小和结构比较复杂介于细菌和病毒之间,无细胞壁,可通过滤菌器,能在无生命的培养基中生长繁殖的最小原核微生物。支原体包括解脲脲原体(Uu)与人型支原体(Mh)是人类泌尿道和生殖道常见寄生菌之一,在特定情况下可致病,是引起非淋球菌性尿道炎(NGU)的主要病原体[1]。NGU发病率远远超过淋病,因泌尿道和生殖道不是无菌的,所以往往是混合感染。固体培养是支原体培养的“金标准”,液体培养补充支原体鉴定和药敏。我院对6363例疑似非淋菌性尿道炎(NGU)患者用固-液双相泌尿生殖道支原体培养、鉴定和药敏试验,报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

2010年1月至2011年6月在本院就诊的疑似非淋菌性尿道炎的6363例患者。其中,男性为皮肤科门诊及泌尿外科门诊患者,共1468例,年龄20～60岁,平均年龄40岁；女性为妇产科门诊及皮肤科门诊患者,共4895例,年龄20～55岁,平均年龄38岁。

1.2 标本的采集

1.2.1 女性患者标本 采集宫颈分泌物,暴露宫颈后,用无菌棉球将宫颈口外的粘液拭去,然后用无菌肉汤拭子插入宫颈管内2cm处,旋转拭子,15～20s后取出,置于配套的无菌试管中立即送检。

1.2.2 男性患者标本 取尿道分泌物,用无菌棉球拭去尿道口分泌物,用无菌肉汤拭子自尿道口插入1～2cm,旋转拭子并停留20s取出置于配套的无菌试管中立即送检。在采集标本前,患者应1周内未使用任何抗菌药物治疗,且应在排尿后2h采集。前列腺液由临床医生按摩前列腺后采集,放入无菌试管中立即送检。

1.3 支原体固体、液体培养及药敏试验

固体培养基用上海恩科生物有限公司生产的解脲脲原体和人型支原体的选择显示培养基。液体培养、鉴定和药敏采用试剂为Mycoplasma IST2支原体试剂盒,由法国生物梅里埃公司生产,药敏试剂盒内有9种抗菌药物,即强力霉素、交沙霉素、氧氟沙星、红霉素、四环素、环丙沙星、阿齐霉素、克拉霉素、原始霉素。实验室具体操作和结果判断严格按照支原体试剂盒说明书进行。

1.4 方法

将取自女性的宫颈拭子、男性尿道拭子或前列腺液,同时接种在固体培养基(解脲脲原体/人型支原体)和Mycoplasma IST2支原体液体培养,35℃培养箱内培养(固体培养放入CO2发生片在密闭的环境中会自动形成5%～10%的CO2环境)24～48h后。

1.5 结果观察

固体培养基在低倍镜下观察菌落形态,解脲脲原体—棕褐色海胆样菌落(菌落中有沙粒状物质)、人型支原体—油煎蛋样菌落；液体培养基肉眼观察染色变化,是否变红,是否清亮；固体培养和液体培养相结合,固体培养看菌落、液体培养看鉴定和药敏。

2 结果

2.1 支原体感染检出率

在6363例标本中,支原体阳性总数为2087例,阳性率为32.8%,具体的检出情况详见表1。两者经统计学处理差异有统计学意义(p＜0.01)。

表1 6363例患者支原体培养阳性率[例(%)]

2.2 支原体对抗菌药物的耐药性

解脲脲原体、人型支原体、解脲脲原体和人型支原体混合感染,对9种抗菌药物的药敏试验结果,见表2。

表2 2087例支原体属对9种抗菌药物体外的耐药率[例(%)]

2.3 固体培养与液体培养相符率

固体培养主要解决混有其他微生物支原体感染,固-液培养相符率,见表3。

表3 固体、液体培养相符率(%)

3 讨论

目前,从人类泌尿生殖道中分离出的支原体有5种。其中分离较高、致病性较强的主要是解脲脲原体和人型支原体。支原体可产生脲酶、IGA蛋白酶、磷脂酶,可引起泌尿系统感染、妊娠期感染、新生儿疾病、生殖道外感染等。通过开展支原体培养近13年临床观察,非淋菌性尿道炎远远超过淋病,而且存在复合感染,快速准确诊断是对因治疗的关键。

采用液体培养基鉴定泌尿生殖道中的解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)是各级实验室广泛开展的检验项目,其是根据液体培养基和试条反应杯的染色变化来判断阳性和阴性,简单方便。但由于泌尿生殖道不是无菌的,还有其他微生物,仅凭Uu为尿素阳性、Mh为精氨酸阳性作为鉴定的依据仍存在不足。因此,判断支原体阳性的结论最终是建立在固体培养基上的典型支原体菌落。在检验时,如果混合其他微生物感染,则须将固体培养和液体培养相结合,以确保鉴定的准确性。在检验的过程中,如果液体变红且清亮,可以不用固体培养；如果液体变红但浑浊,则需增加固体培养,以确保检验的准确性。

本文的试验结果表明,泌尿生殖道支原体属阳性检出率为32.8%,其中Uu阳性率为75%、Mh阳性率为2%、Uu+Mh混合感染阳性率为26%。Uu阳性率明显高于Mh和Uu+Mh阳性率,与何玥等[1]报道一致。

支原体无细胞壁结构,对以破坏细胞壁为主要的抗菌药物,如青霉素、头孢菌素等β-内酰胺类抗菌药物天然不敏感,因此,不宜选用β-内酰胺类抗菌药物治疗[2～3]。本试验结果表明,常规治疗支原体感染的抗菌药物中,喹诺酮类抗菌药物作用机制为抑制微生物DNA旋转酶,由于使用方便,在国内外应用较为广泛。但由于我国喹诺酮类抗菌药物在人类、动物界的广泛应用,导致Uu对喹诺酮类抗菌药物的耐药性急剧上升[4～5]。表2结果显示,Uu对环丙沙星和氧氟沙星耐药率很高[6],环丙沙星和氧氟沙星敏感率仅为8.46%和16.14%；Uu最敏感的抗菌药物为原始霉素、交沙霉素、克拉霉素、强力霉素、阿齐霉素,与国内报道基本一致[7]。由此可见,我院应慎用喹诺酮类抗菌药物治疗Uu感染,在治疗的过程中,可结合患者的综合情况选用抗菌药物,以减少耐药菌株的产生。强力霉素、交沙霉素是治疗泌尿生殖道感染经验用药的首选药物。

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