CD44v6及VEGF在子宫腺肌病中的表达及意义

杨 静，杨苏安，段 智

（长沙市第一医院，湖南 长沙 410002）

子宫腺肌病（adenomyosis）是指子宫内膜间质和腺体存在于子宫肌层中，伴随周围肌层细胞的代偿性肥大和增生[1]。目前病因不明确。多数研究者认为子宫腺肌病（AM）是基底层内膜细胞增生，侵入至肌层间质的结果[1]。CD44分子作为细胞黏附分子中的一类，是一种分布极广的细胞表面跨膜糖蛋白。能与多种配体分子结合。主要参与细胞与细胞间，细胞与细胞外基质（ECM）间的黏附过程及肿瘤转移过程[2]。VEGF是近年来发现的最主要的一个血管调节因子。VEGF的表达与肿瘤浸润，转移有明显相关性。本研究采用免疫组织化学技术检测CD44v6及VEGF在子宫腺肌病（AM）患者在位内膜及异位内膜中的表达，进一步探讨他们在AM发生，发展中的作用。

1 对象和方法

1.1 对象

选取2010年11月～2011年8月在本院进行子宫切除并经病理证实的子宫腺肌病标本45例作为实验组。其中子宫内膜增生期30例，分泌期15例。年龄35～55岁（平均44岁）。另选同期子宫切除病理诊断为子宫平滑肌瘤标本共35例作为对照组。其中子宫内膜增生期20例，分泌期15例。术前3个月均未使用激素类药物。

1.2 标本取材与方法

标本经10%甲醛固定，石蜡包埋，切成4μm厚的切片。采用免疫组化SP法。即用型UltraSensitive-SP试剂盒，鼠抗人单克隆抗体CD44v6（克隆号2F10）及VEGF（克隆号VG1）均购自福州迈新生物技术有限公司。CD44v6一抗工作浓度1∶100，VEGF一抗工作浓度1∶500。染色步骤参照说明书进行。二氨基联苯胺（DAB）显色，脱水，透明，封片。CD44v6用已知胃癌切片作阳性对照，VEGF用已知胃癌切片作阳性对照。磷酸盐缓冲液代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判定

染色结果判定：CD44v6主要表达于细胞膜和（或）细胞质。为标黄色颗粒。①按照细胞中着色深浅评分：无着色（0分），浅黄色（1分），棕黄色（2分），棕褐色（3分）。②按照阳性细胞百分比评分：＜5%为0分，6%～≤25%为 1分，26%～＜50%为 2分，＞50%为3分。取①②项评分的乘积作为总评分，0分为阴性（-）；1～5分为弱阳性（+）；6分～8分为阳性（++）；≥9分为强阳性（+++）。

1.4 VEGF主要表达于细胞浆

标为棕黄色。根据细胞中染色深浅评分：无着色（0分）、浅黄色（1分）、橘黄色（2分）和棕黄色（3分）。按照阳性细胞百分比评分：0为0分、＜25%为1分、26%～50%为2分和＞50%为3分。将两者评分相加，相加结果：＜3 分为阴性（-）；3～5 分为弱阳性（+）；6～8分为阳性（++）；≥9分为强阳性（+++）。

1.5 统计学方法

应用SPSS 13.0统计软件进行分析，采用秩和检验比较各组CD44v6和VEGF的表达差异。采用Spearman等级相关分析CD44v6和VEGF间的关联程度。

2 结果

2.1 CD44v6在各组内膜组织中的表达

CD44v6在AM异位内膜组织中的表达强度高于在位内膜组织及对照组。在位内膜组CD44v6的表达强度高于对照组。各组增生期与分泌期CD44v6的表达差异无显著性。

表1 CD44v6在各组内膜组织中的表达

表2 VEGF在各组内膜组织中的表达

2.2 VEGF在各组内膜组织中的表达

VEGF在AM异位内膜组织中的表达强度高于在位内膜组织及对照组。在位内膜组VEGF的表达强度显著高于对照组。各组的增生期内膜及分泌期内膜的VEGF表达强度差异无显著性。

2.3 AM组异位内膜组织中CD44v6与VEGF表达的相关程度

经Spearman等级相关分析，CD44v6和VEGF在实验组的异位内膜组织中表达呈正相关（r=0.340，P=0.01）。

3 讨论

CD44v6在不同子宫内膜组织中的表达及意义。CD44是一类分布广泛的具有高度异质性的单链膜表面蛋白。包括胞外区，疏水性的跨膜区及胞内区3个部分。CD44通过细胞膜外受体与相应配体如透明质酸，纤维连接蛋白，选择蛋白[3]等结合，介导细胞与细胞，细胞与细胞外基质（extracellular matrix，ECM）之间的黏附作用，调节细胞的增殖与移动。CD44是淋巴细胞归巢和透明质酸的主要受体，参与细胞伪足形成，引起细胞形态和游动性改变，直接参与肿瘤的发生、发展和转移[4]。CD44v6是CD44的变异体，与CD44标准型的基本结构相似，主要分布与上皮源性细胞和肿瘤细胞。近年来许多研究表明，CD44v6参与肿瘤的发生，发展与转移[5-6]。子宫腺肌病中子宫内膜腺上皮细胞黏附，种植于子宫肌层，与肿瘤细胞相似。本研究发现CD44v6在AM异位内膜组织及在位内膜组织中的表达强度均高于对照组。提示异位子宫内膜腺上皮细胞能破坏子宫肌层细胞外基质，黏附种植于子宫肌层，并浸润性生长。在位子宫内膜CD44v6表达上调，提示在位子宫内膜腺上皮细胞能与基质黏附性增强，更容易突破基底层，向组织深层浸润。研究发现，各组中增生期及分泌期CD44v6的表达无明显差异，提示AM在增生期及分泌期具有同样侵袭性。

VEGF最先从肿瘤细胞分离出来，是一种结合肝素的二聚体蛋白。其糖蛋白单体以二硫键结合成二聚体才有活性。是通过酪氨酸激酶传导通路发挥作用的。现在已经证实VEGF及其家族成员不单在肿瘤血管生成，在其他生理和病理的血管生成中都是必不可少的诱导因子。PEPPER等[7]在裸鼠子宫内膜异位症模型中发现：注射VEGF能促进异位病灶生长，DONNEZ等[8]研究结果表明，子宫内膜异位症患者原位子宫内膜异位子宫内膜VEGF水平较正常妇女子宫内膜水平高。本研究应用免疫组化方法检测了子宫腺肌病患者在位和异位内膜与子宫肌瘤子宫内膜中VEGF的表达，结果显示VEGF在异位内膜中表达明显高于对照组，提示腺肌病中异位内膜具有很强的血管生成能力，使异位内膜能存活，并进一步侵袭，使病灶不断扩大，加速异位病灶的种植，子宫腺肌病患者在位内膜VEGF表达明显高于对照组，提示子宫腺肌病患者在位内膜可能因VEGF过度表达而表现比正常子宫内膜更强的血管生成能力，子宫内膜间质血管渗透性增加，为子宫内膜侵入子宫肌层创造条件，提示对在位子宫内膜的研究可能成为揭示子宫腺肌病发病机制的关键。本研究中各组内膜增生期和分泌期VEGF的表达无明显差异，提示腺肌病病灶和在位内膜的强血管生成能力贯穿于整个月经周期，使病情迁延不愈，病情进行性发展。

目前对异位子宫内膜细胞生物学特性的研究报道存在较大的分歧[9-10]，其黏附与血管活性的相关性的研究报道不多。本研究结果显示CD44v6与VEGF在AM异位内膜组织中的表达存在正相关，提示AM黏附性的改变与血管活性的持续性存在，两者协同作用可能是导致其发病的病理基础。CD44v6的表达上调使AM腺上皮细胞的黏附，游动性增强，VEGF表达上调使AM腺上皮细胞具有强的血管生成能力，两者相互作用使AM腺上皮细胞易于突破基底层，并血管生成黏附、种植并生长于肌层，促使了子宫腺肌病的发生、发展。

[1]丰有吉,沈 铿.妇产科学[J].北京：人民卫生出版社,2011：377.

[1]FENG YJ,SHEN K.Obstetrics and Gynecology,BeiJing,People's Medical Publishing House,2011：377.Chinese

[2]朱光君,熊正文.CD44基因的分子生物学特性及其与肿瘤关系的研究进展[J].中国组织化学与细胞化学杂志,2002,11(1)：102-105.

[2]ZHU GJ,XIONG ZW.CD44 gene molecular biology characteristic and its correlation with tumor research progress, Chinese Journal of histochemistry and Cytochemistry,2002,11(1)：102-105.Chinese

[3]HANLEY WD,NAPIER SL,BURDICK MM,et al.Variant isofoms of CD44 are P-and L-selectin ligands on colon carcinoma cells[J].FASEB J,2006,20：337-339.

[4]BORLAND G,ROSS JA,GUY K.Forms and functions of CD44 Immunology[J].1998,93(2)：139-148.

[5]LIU YJ,YAN PS,LI J,et al.Expression and significance of CD44s,CD44V6,and nm23 mRNA in human cancer[J].World J Gastroentero,2005,11(42)：6601-6606.

[6]KUNCOVA J,URBAN M,MANDYS V.Expression of CD44s and CD44V6 in transitional cell careinomas of the urinary bladder：comparision with tumour grade,proliferative activity and P53 inmunoreactivitv of tumour cells[J].APM IS,2007,115(11)：1194-1205.

[7]PEPPER MS,FERRARA N,ORCLL L,et al.Potent synergism between vascular end of helial growth factor and basic frbroblastgrowth factor in theinduction of angiogenesis in vitro[J].Biochern Biophys Res Commun,1992,189(8)：824-831.

[8]DONNEE J,SOMES D,et al.Vascular endothelial growth factor(VEGF)in endometriosis [J].Hum Reprod,1998,13(6)：1686-1690.

[9]KIM HO,YANG KM,KANG IS,et al.Expression of CD44s,vascular endothelial growth factor,matrix metalloproteinase-2 and Ki-67 in peritoneal,rectovaginal and ovarian endometriosis[J].J Reprod Med,2007,52(3)：207-213.

[10]YANG JH,WU MY,CHEN CD,et al.Altered apoptosis and prdiferation in endometrial stromal cells of woman with adenomyosis[J].Hum Reprod,2007,22(4)：945-952.