猪支原体肺炎活疫苗(168株)的免疫效力研究

苏国东，刘茂军，周勇岐，2，刘冬霞，甘 源，朱晓玮，2，毛火云，2，邵国青

(1.江苏省农业科学院兽医研究所·农业部兽用生物制品工程技术重点实验室·国家兽用生物制品工程技术研究中心，南京 210014;2.南京天邦生物科技有限公司，南京 211102)

猪支原体肺炎(Mycoplasma Pneuoniae of swine，MPS)又称地方性肺炎，该病是由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneuoniae)引起的一种猪慢性呼吸道传染病［1］。凡是有养猪的国家和地区都有此病存在。感染后病猪发生干咳、低烧、生长缓慢，饲料报酬低，发病率高，死亡率低，严重制约我国养猪业向前发展［2-3］。

防控猪支原体肺炎已成为猪场难缠的问题，疫苗防控是控制该病的重要手段［4］。为给猪场提供更加有效的猪支原体肺炎活疫苗，江苏省农科院兽医研究所经历五十多年研制成功猪支原体肺炎活疫苗(168株)。本研究评价了该疫苗的免疫效力和免疫期，以及与同类制品的差异。

1 材料

1.1 疫苗、稀释液和培养基 3批次猪支原体肺炎活疫苗(168株)(X+15)代和猪肺炎支原体JS株组织强毒由江苏省农业科学院兽医研究所保存。5批次猪支原体肺炎活疫苗(168株)(X+15)代由南京天邦生物科技有限公司生产。猪支原体肺炎活疫苗由北京海淀中海动物保健科技公司生产。疫苗专用稀释液由南京邦生物科技有限公司制备。KM2培养基由江苏省农业科学院兽医研究所制备。

1.2 试验猪 试验使用5～15日龄健康小猪220头，来源于江苏省农科院猪场，仔猪和哺乳母猪均为猪肺炎支原体IHA抗体阴性，饲养于江苏农业科学试验动物房，各组隔离饲养，饲喂无抗生素饲料，饮用自来水。120头商品猪来源于广东某猪场，一直饲养于该猪场。

2 方法

2.1 免疫效力试验 25头5～15日龄健康仔猪分成5组，每组5头。用3批猪支原体肺炎活疫苗(168株)按10倍稀释成每头份1 mL，分别肺内注射各1组，另设攻毒对照组和健康对照组各5头不免疫。在免疫后60 d，用猪肺炎支原体JS株组织强毒1∶100稀释后，气管内注射5 mL，对所有免疫组和攻毒对照组试验猪进行攻毒。攻毒后25 d，观察临床症状，扑杀5组试验猪，按照28分评分法计算肺病变指数，以肺病变减少率达到60%以上判为保护［5］。

2.2 免疫期试验 100头5～15日龄健康易感猪分成5组，每组20头，每头在5～15日龄仔猪通过肺内接种猪支原体肺炎活疫苗(168株)1头份。免疫后5个月、6个月、7个月、8个月，1～4组各取5头猪逐次进行攻毒保护试验，第5组各取5头不攻毒作为对照。在攻毒后25 d内，观察所有猪的临床症状;在攻毒后25 d后，对所有猪进行剖检，计算肺病变指数，判定保护率。

2.3 免疫效力比较试验 35头5～15 d龄健康易感仔猪分成4组，第1组、第2组各10头分别按疫苗使用说明肺内免疫猪支原体肺炎活疫苗(168株)和北京中海动物保健科技公司生产的猪支原体肺炎活疫苗;第3组5头不免疫，作攻毒对照组;第4组5头不免疫，作健康对照组。在疫苗免疫后60 d，第1组、第2组和第3组用猪肺炎支原体JS株组织强毒1∶100稀释气管内注射5 mL进行攻毒，第4组5头猪不攻毒作健康对照组。攻毒后25 d，观察临床症状，扑杀5组试验猪，计算肺病变指数，判定保护率。

2.4 免疫期比较试验 80头健康易感猪分成4组，1、2组各20头分别按使用说明免疫中海动物保健科技公司生产的猪支原体肺炎活疫苗和南京天邦生物科技有限公司生产的猪支原体肺炎活疫苗(168株)，3组20头不免疫作攻毒对照，4组20头不免疫不攻毒作健康对照。免疫后5个月、6个月、7个月、8个月，1～3组各取5头用猪肺炎支原体JS株组织强毒1∶100倍稀释逐次气管内注射5 mL进行攻毒保护试验，4组5头不攻毒作为对照;在攻毒后25 d内，观察所有猪的临床症状，在攻毒后25 d后，对所有猪进行剖检，计算肺病变指数，判定保护率。

2.5 临床免疫试验 用5批次南京天邦生物科技有限公司生产的猪支原体肺炎活疫苗(168株)在广东某猪场进行免疫，每批次免疫20头，1头份/头，对照20头不免疫。疫苗免疫后2个月、3个月、4个月、5个月进行临床观察，观察是否有食欲不振、弓背、长期咳嗽、低烧、生长缓慢和皮毛粗乱等临床症状。免疫5个月后对所有试验猪进行剖检，计算肺病变指数，判定保护率。

3 结果与分析

3.1 免疫效力试验结果 猪支原体肺炎活疫苗(168株)免疫5～15日龄仔猪60 d后攻毒，在攻毒25 d后解剖观察肺部病变情况见图1。结果显示，3个免疫组平均肺病变指数均与攻毒对照组差异显著，与健康对照组无差异，攻毒保护率均在80%以上。

3.2 免疫期试验结果 3批次免疫组免疫5个月和6个月后攻毒，25 d内80%以上免疫猪不表现猪支原体肺炎临床症状;免疫7个月后攻毒25d内仍有60%以上免疫猪不表现临床症状。攻毒25 d后逐次解剖5头，各组猪的平均肺病变指数见图2。结果显示，3批次猪支原体活疫苗(168株)免疫5～7个月攻毒，3个免疫组平均肺病变指数均与攻毒对照组差异显著，与健康对照组无差异，攻毒保护率均在60%以上;免疫后8个月攻毒，3个免疫组平均肺病变指数均与攻毒对照组和健康对照组均差异显著，攻毒保护率均在40%以上，表明猪支原体活疫苗(168株)的免疫期至少在6个月以上。

图1 3批疫苗免疫攻毒肺病变结果

图2 3批疫苗不同免疫期攻毒肺病变结果

3.3 同类制品免疫效力比较试验结果 在两种猪支原体肺炎活疫苗免疫5～15日龄仔猪60 d后攻毒。攻毒25 d内，免疫试验组和同类疫苗免疫试验组都有80%免疫猪没有表现临床症状，攻毒25 d后解剖观察肺部病变，结果见图3。结果显示，两种猪支原体肺炎活疫苗免疫后60 d有80%免疫猪获得保护，两组免疫试验组平均肺病变指数无差异，均与攻毒对照组差异显著，与健康对照组无差异。

3.4 同类制品免疫期比较试验结果 两种猪支原体肺炎活疫苗免疫5～15日龄仔猪5个月、6个月和7个月后攻JS强毒株，攻毒25 d内80%以上免疫猪不表现猪支原体肺炎临床症状;免疫8个月后攻毒25 d内仍有60%以上免疫猪不表现临床症状。攻毒25 d后逐次解剖5头，免疫猪免疫7个月后仍有60%以上免疫猪的肺部无病变。攻毒对照组攻毒后25 d内和25 d后解剖表现猪支原体肺炎的临床症状和典型的肺部病变，健康对照组没有表现肺部病变。说明南京天邦生产的猪支原体活疫苗(168株)和北京中海的支原体肺炎活疫免疫5～7个月后均有80%以上的猪获得保护，两种猪支原体活疫苗的免疫期至少在6个月以上，免疫保护期没有明显差异。两种猪支原体肺炎活疫苗不同免疫期的攻毒保护率见图4。

图3 两种活疫苗攻毒保护比较试验结果

图4 两种猪肺炎支原体疫苗不同免疫期免疫攻毒肺病变结果

3.5 临床免疫试验结果 5批次疫苗免疫临床试验猪2个月、3个月、4个月、5个月后，80%以上的试验猪表现正常，未见食欲不振、弓背、长期咳嗽、低烧、生长缓慢和皮毛粗乱等临床症状，而对照组未免5个月后，临床表现长期咳嗽、低烧、生长缓慢和皮毛粗乱的猪占到40%。猪支原体肺炎活疫苗(168株)免疫5个月后对所有试验猪进行剖检，结果显示5批次免疫组的肺病变与对照组差异显著，免疫组的肺病变减少率均在60%以上。猪支原体肺炎活疫苗(168株)临床试验肺病变结果见图5。

4 讨论与结论

猪气喘病的防治是控制猪场呼吸道综合症难题的关键，在今后我国养猪场仍然要把控制猪气喘病成为重点防控疾病之一。目前我国很多猪场常用全群脉冲用药方式控制猪气喘病，疾病控制容易反复发生，药物依赖性很强，花费巨大，防治效果不满意。疫苗免疫成为猪场防控猪支原体肺炎疾病最有效的方法，在我国疫苗免疫有猪支原体肺炎灭活疫苗和活疫苗，灭活疫苗存在价格贵、应激大、免疫次数多和不能阻止野毒感染等诸多因素制约了灭活疫苗的推广［6］，活疫苗由于价格低、应激小、免疫次数少、阻止野毒感染和置换猪场野毒等诸多优势，在规模化猪场迅速得到推广［7-9］。

图5 5批次猪支原体肺炎活疫苗(168株)临床免疫5月后肺病变结果

在猪支原体肺炎活疫苗(168株)免疫效力试验和免疫期试验中，疫苗免疫5～15日龄健康仔猪后60 d攻强毒，疫苗免疫保护率达到80%以上;疫苗免疫后5个月、6个月、7个月和8个月逐次攻强毒，免疫7个月后免疫保护率仍在60%以上，猪支原体肺炎活疫苗(168株)免疫期超过6个月以上。与同类制品比较免疫效力和免疫期，两种猪支原体肺炎活疫苗的免疫保护率和免疫期相当。5批次猪支原体肺炎活疫苗(168株)免疫临床5～15日龄小猪5个月后，85%以上的猪都得到免疫保护。综合以上结果分析，说明猪支原体肺炎活疫苗(168株)具有很好的免疫效力，完全可以应用于我国猪场气喘病的控制和净化。

［1］Elieen L T.Mycoplasmal Diseases［M］//赵德明，张仲秋，沈建忠译.猪病学.第9版.北京:中国农业大学出版社，2008:795-802.

［2］Maes D，Segales J，Meyns T，et al.Control of Mycoplasma hyopneumoniae infections in pigs.［J］.Veterinary Microbiology，2008，126(4):297-309.

［3］沈青春，宁宜宝，覃青松.猪肺炎支原体的研究进展［J］.中国兽药杂志，2003，37(6):26-30.

［4］邵国青.猪喘气病的控制与净化方法的建议［J］.养猪，2010(6):65-69.

［5］邵国青，刘茂军，孙佩元，等.猪气喘病实验猪模型的建立［J］.微生物与感染，2007，2(4):215-218.

［6］Chae C.Vaccinating pigs against Mycoplasma hyopneumoniae infection:Failure to prevent transmission［J］.Vet J，2011，188(1):7-8.

［7］ 周勇岐，赵永前.猪支原体肺炎(168株)活疫苗的作用机理与应用［J］.中国牧业通讯，2008，(10):49-50.

［8］ 刘茂军，苗连叶，赵永前，等.猪支原体肺炎活疫苗(168株)临床试验［J］.畜牧与兽医，2009，41(8):93-95.

［9］陈 兵.江苏研制出猪支原体肺炎打破国外垄断［N］.农业日报，2011-11-16.