不同炮制方法对佛手总多糖含量的影响＊

李 勇，姚 曦

(广东药学院药物研究所·广东省药物新剂型重点实验室，广东 广州 510006)

佛手(Bergamot)为芸香科(Rutaceae)柑橘属植物佛手 Cirtus medica L.var.Sarcodactylis(noot.)Swingle的干燥果实，主产于闽、粤、川、江、浙等省，为“十大广药”之一，具有舒肝理气、和胃止痛功效。佛手主要含黄酮类、多糖、香豆素类等成分，尚含有胡萝卜素、琥珀酸等[1-3]。佛手传统炮制方法主要采用蒸制，市场上佛手饮片常见蒸制品、清炒品。目前笔者尚未见炮制对佛手成分影响的文献报道。本研究中对佛手不同炮制品中的多糖类成分含量进行测定，以其为佛手的深入研究提供试验支持，现报道如下。

1 仪器与试药

UV-1101型分光光度计(上海天美科技仪器有限公司);BS-224S型电子天平(赛多利斯);移液枪(德国)。佛手、制佛手(批号为20091201，广州致信药业有限公司);芦丁对照品(批号为100080-200306)、葡萄糖对照品(批号为110833-200302)，购自中国药品生物制品检定所;浓硫酸、苯酚等试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 药材炮制

制佛手:取生佛手250 g，蒸1 h即得。

炒佛手:取生佛手250 g，大小分档，置干锅内文火炒至佛手表面呈黄色，即得。

微波制:取生佛手50 g，分别采用微波加热(输出功率700 w)90，120，180 s，每组平行 6 份，即得。

2.2 样品制备(用于总多糖含量测定)

水提取[4]:分别取生佛手、制佛手、炒佛手、微波制(90，120，180 s)样品各50 g，分别置1 000 mL圆底烧瓶中，加水回流提取两次(10倍量水、8倍量水)，每次1.5 h，提取液过200目滤布，合并提取液，减压浓缩，定容至250 mL量瓶中，作为供试品溶液。

醇提取[5]:分别取生佛手、制佛手、炒佛手、微波制(90，120，180 s)样品各50 g，分别置1 000 mL圆底烧瓶中，加50%乙醇回流提取2次(10倍量、8倍量)，每次1.5 h，提取液过200目滤布，合并提取液，减压回收乙醇，定容至250 mL量瓶中，作为供试品溶液。

2.3 含量测定[6]

2.3.1 对照品溶液制备

精密称取葡萄糖对照品20.01 mg，置250 mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3.2 测定波长选择

精密量取对照品溶液1 mL、供试品溶液0.1 mL，分别加水补至2 mL，分别加入5%苯酚溶液1.0 mL，摇匀，再加入浓硫酸5.0 mL，迅速振摇混匀，沸水浴15 min，取出放至室温，加水定容至10 mL，摇匀。按紫外分光光度法，在200～800 nm波长范围内扫描，扫描波谱图见图1和图2。最终选用490 nm作为测定波长。

图1 葡萄糖光谱图

图2 佛手多糖光谱图

2.3.3 方法学考察

标准曲线制备:分别吸取对照品溶液 0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6，1.8 mL，按 2.3.2 项下自“加水补至 2.0 mL”起操作，在490 nm波长处测定吸光度，以2.0 mL的水按照同样方法显色操作为空白，以葡萄糖质量浓度为横坐标、吸光值(A)为纵坐标绘制标准曲线，回归方程为 Y=0.047 X+0.009，r=0.998 2(n=8)，结果表明线性关系较好。

稳定性试验:精密移取2.2项下佛手水提取液1 mL，加水稀释到250 mL，取1 mL，按照2.3.2项下自“加水补至2.0 mL”起操作，分别在 0，15，30，45，60 min 时测定其吸光度。结果吸光度平均值为0.365，RSD为1.36%，说明供试品溶液在60 min内稳定。

重复性试验:精密移取2.2项下佛手水提取液1 mL，加水稀释到250 mL，取1 mL，平行6份，按照2.3.2项下自“加水补至2.0 mL”起操作，依法测定吸光度，计算总多糖含量。结果佛手中总多糖平均含量为46.52 mg/g，RSD=2.29%(n=6)。

回收率试验:精密移取2.2项下佛手水提取溶液1 mL，加水稀释到250 mL，取1 mL，共9份，精密加入葡萄糖对照品溶液0.186，0.233，0.280 mL(质量浓度 80.04 μg/mL)，按供试品溶液制备方法制备溶液，测定多糖含量，计算回收率。结果见表1。

表1 多糖加样回收试验结果(n=9)

2.3.4 样品含量测定

精密移取2.2项下供试品溶液各1 mL，加水稀释到250 mL，取1 mL，按照2.3.2项下操作测定吸光度，按回归方程求出供试液中葡萄糖含量，计算样品中多糖含量。结果见表2。试验结果表明用水提取，总多糖含量优于用50%乙醇提取，不同炮制方法对总多糖含量基本无影响，总多糖含量随微波加热时间增加而降低。

表2 样品总多糖含量测定结果(mg/g)

3 讨论

苯酚-硫酸法是测定多糖含量的常用方法之一，具有简便、快速、准确、灵敏的特点。在试验中发现，该法中苯酚和浓硫酸的比例十分关键，浓硫酸加入量不足，会使多糖水解不完全，单糖不能充分释出;但加入量也不能过多，过多浓硫酸会使释出的单糖或衍生物部分被破坏，影响含量测定，须控制为1∶5，同时应保证溶液中硫酸的浓度。硫酸的加入方法不同对显色结果也有影响，故在操作过程中尽量保持一致。

微波穿透力强，药物在加热过程中吸收微波能量，使极性分子发生旋转运动，分子间互相磨擦而生热，从而使水分汽化产生的压力将细胞膜和细胞壁冲破，形成微小的孔洞或裂缝，药物质地酥脆而达到炮制的目的。微波炮制佛手药材，色泽均匀、微黄，可达到炒黄的标准，不但温度和时间可控，而且操作简便。但当加热超过90 s时，药材出现部分炭化，是导致多糖成分损失的主要原因，应严格控制微波加热时间。

[1]尹 锋，成 亮，楼凤昌.佛手化学成分的研究[J].中国药学杂志，2004，2(3):149-151.

[2]李小凤，蔡 春，程荷凤，等.广佛手多糖的分离纯化与相关成分的气相色谱分析[J].广东医学院学报，2005，23(3):240-241.

[3]崔红花，高幼衡，蔡鸿飞，等.主成分分析对佛手最佳产地的探讨[J].广州中医药大学学报，2009，26(3):281-283.

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[6]邹士玉，马方励，丁 博.苯酚-硫酸法测定“润和津露”的粗多糖含量[J]. 中药材，2007，30(11):1 470-1 472.