高效液相色谱法测定半夏厚朴汤不同煎液中和厚朴酚含量＊

2012-11-06聂明华罗秀琼王祥培邹孔强令狐昌敏

中国药业 2012年4期

冯华，聂明华，罗秀琼，王祥培，邹孔强，令狐昌敏

(1.贵州省遵义市药品检验所，贵州遵义 563002; 2.贵阳中医学院，贵州贵阳 550002)

半夏厚朴汤出自张仲景《金匮要略》，由半夏、厚朴、茯苓、生姜、苏叶组方，具有行气散结、降逆化痰等之功效。用分煎法与合煎法制备的中药复方汤剂，有效成分含量有何变化，药理作用有何变化，一直是中医药理论和临床实践中值得探讨的课题。特别是近年来单味中药精制颗粒逐渐在临床上推广应用，更引起了国家对单味中药精制颗粒的重视。笔者以中药经方半夏厚朴汤中的有效成分和厚朴酚为指标，比较用合煎法与分煎法制得的该方汤剂中和厚朴酚含量差异，探索中药复方汤剂不同制法对有效成分溶出量的影响，为单味中药精制颗粒应用于临床提供一些理论依据。

1 仪器与试药

Waters1525型高效液相色谱仪，KQ-300DE型超声仪。半夏、厚朴、茯苓、生姜、苏叶5味药材饮片由遵义医药有限公司提供，经遵义市药品检验所邓顺超副主任中药师鉴定均符合2010年版《中国药典(一部)》收载品种标准;和厚朴酚对照品(批号为110730-2003609，中国药品生物制品检定所);甲醇为色谱纯，水为娃哈哈纯净水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Diamonisl C18柱 (200 mm×4.6 mm，5μm);流动相:甲醇 -水(78∶22);流速:1 mL/min;检测波长:294 nm; 柱温:25℃[1];进样量:10μL。在此条件下的色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

对照品溶液:称取和厚朴酚对照品11.6 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取1 mL，置100 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液。

合煎液供试品溶液(传统煎煮法):称取药材饮片半夏12.0 g，厚朴9.0 g，茯苓12.0 g，生姜9.0 g，苏叶6.0 g，加8倍量的水煎煮，保持微沸30 min，倒出煎液;药渣再加8倍量的水煎煮20 min，合并两次煎液，减压干燥成干粉。称取相当原药材处方量的干粉，置100 mL量瓶中，用开水溶解定容至刻度，精密吸取5 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，称重，超声处理(功率250W，频率20kHz)25 min，取出，放冷，加甲醇补足质量，摇匀，取续滤液，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即得合煎液供试品溶液。

分煎液供试品溶液:称取上述处方量的药材半夏、厚朴、茯苓、生姜、苏叶，分别加8倍量的水，以合煎液相同时间煎煮2次，制备各药材的煎液，减压干燥成干粉。称取相当原药材处方量各药材的干粉混合均匀，同合煎液法制得分煎液供试品溶液。

阴性对照品溶液:再分别按供试品溶液制备法制备不含厚朴药材的合煎液、分煎液的阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

标准曲线绘制:分别精密称取和厚朴酚对照品，用甲醇稀释配制成质量浓度分别为 1.393，1.856，2.320，2.786，3.248，3.712 g/L的系列和厚朴酚对照品溶液，各精密吸取10μL，按上述色谱条件依次测定，以峰面积积分值(A)对进样量(C)进行线性回归，得回归方程 A=2.0×106X-14 917，r=0.999 3(n=6)。结果表明，和厚朴酚进样量在13.93～37.12μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液10μL，重复进样6次。结果峰面积的 RSD=0.5%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于 0，4，8，16，24 h 时测定。结果含量的 RSD合煎液为1.2%，分煎液为1.5%，表明两种供试品溶液在24 h内均稳定。

重复性试验:取同一样品各5份，依法制备供试品溶液并测定含量。结果合煎液的 RSD=0.8%(n=5)，分煎液的 RSD=1.0%(n=5)，表明方法重复性好。

加样回收试验:按分煎液、合煎液制备项下制备半夏厚朴汤传统汤剂及其配方颗粒汤剂各6份，按进样量10μL折算，精密加入和厚朴酚对照品 3 个质量浓度(10.40，13.00，15.20 μg/mL)，进行加样回收试验，滤液过0.45μm滤膜，并按色谱条件进样，依法测定。结果见表1。