HPLC测定酚磺乙胺注射液有效成分含量的方法研究

2012-11-01刘近荣韩佩莲

亚太传统医药 2012年1期

刘近荣，韩佩莲

（山西振东泰盛制药有限公司，山西大同 037300）

酚磺乙胺注射液是止血药，《中国药典》1995年版二部采用紫外可见分光光度法测定其有效成分含量，因紫外法干扰较多，为了严格控制其质量，特探讨用HPLC法对其的含量进行测定。

1 仪器与试药

Waters515HPLC Pump高效液相色谱仪；Waters2487紫外检测器；酚磺乙胺对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0134-9302规格：50mg）；酚磺乙胺注射液（大同市惠达药业有限责任公司，批号：0507121、0508181、0508301，规格：5mL：1g）；甲醇为色谱纯；磷酸二氢钾为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：NH2柱（5μm，4.6mm×250mm）；流动相：甲醇-0.2%磷酸二氢钾（10：90）；检测波长：223nm；流速：1.0 mL／min；进样量10μL；柱温：25℃。理论塔板数以酚磺乙胺峰计算为6495。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液

精确称取酚磺乙胺对照品100.2mg，置100mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为1.002 mg／mL的对照品贮备液。精密量取对照品贮备液5mL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液

精密量取供试品溶液5mL，置100mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置25mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 检测波长的选择

取浓度为0.2004mg／mL的酚磺乙胺对照品溶液在190～600nm波长范围内进行扫描，在223nm处有最大吸收，故选择223nm作为检测波长。

2.2.4 线性关系考察

将对照品贮备液依次稀释，并制成浓度分别为801.6、400.8、200.4、100.2、50.1μg／mL的对照品溶液。各精密量取10μL分别注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积。以酚磺乙胺对照品的浓度（μg／mL）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，线性回归，其回归方程为：Y＝785.21X-4585.2，r＝0.9999（n＝5）；结果表明在50.1～801.6μg／mL范围内呈良好的线性关系。

2.2.5 密度试验

取浓度为200.4μg／mL的对照品溶液连续进样6次，记录色谱图，测定峰面积；RSD为0.55%。

2.2.6 重复性试验

精密量取批号0507121的样品6份，制成供试品溶液，照样品测定项下的方法测定含量，RSD为0.35%。

2.2.7 稳定性试验

精密称取批号为0507121的样品1份，制成供试品溶液，于0、2、4、6、8、24h分别进样，记录色谱图，测定峰面积；RSD为0.64%。

2.2.8 回收率试验

精密称取酚磺乙胺对照品，按供试品溶液制备方法，制备成高、中、低三种不同浓度的溶液9份，（80%～120%，每一浓度各3份），进样测定含量，记录色谱图，测定峰面积，按外标法计算其中酚磺乙胺的加样回收率。结果见表1。

2.2.9 样品测定

精密量取三批样品各5mL，分别制成供试品溶液，各精密量取10μL分别注入液相色谱仪，记录色谱图（见图1），测定峰面积，按外标法计算酚磺乙胺的含量并与UV法进行比较。结果见表2。