翡翠贻贝粗多糖降血脂作用的研究

李孟婕，范秀萍，吴红棉*，胡雪琼

(广东海洋大学食品科技学院，广东 湛江 524025)

翡翠贻贝粗多糖降血脂作用的研究

李孟婕，范秀萍，吴红棉*，胡雪琼

(广东海洋大学食品科技学院，广东 湛江 524025)

目的：研究翡翠贻贝粗多糖(PCP)对高脂血症小鼠的降血脂作用及其机制。方法：取雄性昆明小鼠72只，每组12只。随机分正常对照组(灌饲生理盐水)、模型对照组(灌饲生理盐水)、阳性对照组(灌饲辛伐他汀5mg/kg) 、翡翠贻贝粗多糖低剂量组(50mg/(kg·d))、中剂量组(100mg/(kg·d))、高剂量组(200mg/(kg·d))。正常对照组小鼠从实验开始至结束用普通饲料喂养，其他5组小鼠均喂高脂饲料。30d后测定小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和一氧化氮(NO)含量，肝脏TC、TG含量，血清卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)以及血清和肝脏脂蛋白脂酶(LPL)、肝脂酶(HL)活性。结果：翡翠贻贝粗多糖能明显降低模型小鼠血清TC、TG、LDL-C含量和动脉粥样硬化指数(AI)(P＜0.01)，显著降低肝脏TC含量(P＜0.01)、TG含量(P＜0.01)，提高血清HDL-C含量和NO含量(P＜0.01)，提高血清LCAT、血清和肝脏HPL、HL活性(P＜0.01)。结论：翡翠贻贝粗多糖对小鼠有显著的降血脂效应，该作用可能与翡翠贻贝粗多糖能明显增强LCAT、LPL、HL酶活性，提高HDL-C、NO水平有关。

翡翠贻贝粗多糖；小鼠；高脂血症

血脂浓度升高会增加心血管疾病的发生风险和冠心病患者的死亡率，是冠心病发生的一个独立危险因素[1-2]。如何调节脂质代谢、预防心脑血管疾病的发生，已成为科研工作者研究的热点。目前较常用的调血脂药(如苯氧乙酸类、烟酸酯类、他汀类)，如果长期使用对肝功能有一定损害作用。因此，从海洋中寻找有效低毒的降血脂药一直受到人们的关注。

翡翠贻贝是海产双壳贝类，俗称青口螺，其干制品统称淡菜，有很好的药用和食疗功效。现代药理学研究表明，从贻贝中提取到的多种活性成分，具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化、抗肿瘤等作用[3]，但目前对翡翠贻贝粗多糖降血脂活性还未见报道，本实验对翡翠贻贝粗多糖对小鼠降血脂作用进行探讨，为其开发成为免疫调节保健食品提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂与仪器

翡翠贻贝，购自湛江市东风市场。

昆明种SPF级小白鼠，全雄性，体质量18～22g，由湛江422医院提供。高脂饲料[4]：基础饲料加胆固醇2%、胆盐0.4%。

总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白-胆固醇 (HDL-C)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)试剂盒 中生北控生物科技有限公司；一氧化氮(NO)、卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT) 、脂蛋白脂酶/肝脂酶(LPL/HL)试剂盒 南京建成生物工程研究所；胆固醇 国药集团化学试剂有限公司；三号胆盐 北京奥博星生物技术有限公司；辛伐他汀 济南利民制药有限责任公司；其他试剂均为国产分析纯。

ES-500E电子天平 长沙湘平科技发展有限公司；Anke TGL-16GB高速离心机、TDL-5-A台式离心机 上海安亭科学仪器厂；722s型分光光度计 上海精密仪器仪表有限公司；YLE-2000数显式电热恒温水浴锅 上海跃进医疗器械厂； Multiskan Mk3酶标仪 热电(上海)仪器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 翡翠贻贝粗多糖的制备流程

翡翠贻贝全脏器→解冻、匀浆→双酶酶解→单层纱布过滤→脱色→双层纱布过滤→离心除杂蛋白→上清液醇沉→分离→洗涤→干燥→等电点去蛋白→超滤脱盐浓缩→翡翠贻贝粗多糖(PCP)

药物临床试验数据核查是一项全新的工作，时间紧、任务重、专业性要求高，且备受社会各界关注。研究核查处克服困难，创造性地开展了工作，确保了药物临床试验数据核查稳妥有序开展。针对试验过程中的关键数据，他们开发药物临床试验数据自查报告填报系统，增强筛选被检查对象的有效性；制定了与国际标准接轨的核查要点和判定原则，建立了符合WHO标准的临床试验检查体系；并制定了严谨的工作程序，做到了检查公开透明、公平公正。

1.2.2 高脂血症动物模型的建立及分组

小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组和翡翠贻贝粗多糖3个剂量的实验组，每组12只。在实验环境下小鼠喂基础饲料观察5d，除正常对照组外，其余各组于实验的首日开始给予高脂饲料，同时灌胃给受品。每天上午9点进行灌胃，实验组灌胃翡翠贻贝粗多糖(剂量分别为50、100、200mg/(kg·d))，阳性对照组灌胃辛伐他汀(剂量为5mg/(kg·d))，正常和模型对照组灌胃生理盐水，灌胃体积为1mL/100g，连续30d。于末次给药后，小鼠禁食不禁水16h，摘眼球取血，离心获得血清。取相同部位肝脏，用生理盐水制备10%肝匀浆，离心取上清。按照试剂盒操作说明测定血清TC、TG、LDL-C、HDL-C、NO和LCAT含量，血清和肝脏LPL、HL含量。并计算动脉粥样硬化指数(AI)。

1.2.3 肝脏中脂质含量测定

参照文献[5]方法，制备肝脏匀浆，以氯仿和甲醇混合液(体积比1:1)抽提肝脏脂质，离心取上清液，参照TC试剂盒和TG试剂盒方法，分别测定肝脏TC和TG含量。

1.2.4 脏器指数

实验结束后，小鼠处死后称质量计算。

1.2.5 数据统计分析

2 结果与分析

2.1 翡翠贻贝粗多糖对小鼠各生长指标的影响

表1 翡翠贻贝粗多糖对小鼠各生长指标的影响(±s，n=12)Table 1 Effect of PCP on growth indicators of mice (±s，n=12)

表1 翡翠贻贝粗多糖对小鼠各生长指标的影响(±s，n=12)Table 1 Effect of PCP on growth indicators of mice (±s，n=12)

体质量/g组别 初始 第1周 第2周 第3周 第4周 最终 体质量增长量/g 平均摄食量/(g/d)正常对照组 20.57±1.36 25.89±1.57 33.44±1.93 38.78±2.02 47.30±2.06 45.47±2.07 24.90±3.28 3.80±0.17模型对照组 20.94±1.09 28.03±1.90 35.64±1.89 39.36±1.90 48.04±1.42 47.05±1.69 26.11±2.76 3.61±0.16阳性对照组 20.38±1.29 26.43±1.25 34.57±2.00 38.55±2.11 47.06±1.55 45.71±0.94 25.34±1.60 3.63±0.18低剂量组 21.13±1.85 25.89±1.57 33.26±1.24 38.78±2.02 46.36±2.59 45.08±2.71 23.95±2.67 3.79±0.05中剂量组 20.73±1.65 27.39±1.55 33.56±1.82 37.57±2.56 46.11±3.01 44.92±2.15 24.19±2.45 3.72±0.11高剂量组 20.94±1.70 25.93±2.99 33.92±0.92 38.61±2.55 46.38±2.14 45.06±1.62 24.12±2.50 3.58±0.05

表2 翡翠贻贝粗多糖对小鼠各脏器指数的影响(±s，n=12)Table 2 Effect of PCP on viscera indice of mice (±s，n=12)

表2 翡翠贻贝粗多糖对小鼠各脏器指数的影响(±s，n=12)Table 2 Effect of PCP on viscera indice of mice (±s，n=12)

注：#. 与正常对照组比较，有显著性差异(P＜0.05)；##.与正常对照组比较，有极显著性差异(P＜0.01)；*. 与模型对照组比较，有显著性差异(P＜0.05)；**. 与模型对照组比较，有极显著性差异(P＜0.01)；Δ. 与阳性对照组比较，有显著性差异(P＜0.05)；Δ Δ. 与阳性对照组比较，有极显著差异(P＜0.01)。下同。

组别 心指数 肝指数 肾指数 脑指数 脾指数正常对照组 0.4912±0.0772 5.009±1.4024* 1.6152±0.1585** 1.0263±0.0127 0.2064±0.0301模型对照组 0.5313±0.0638 5.9922±0.5780# 1.3284±0.1323##△ 0.9919±0.0325 0.2601±0.0403阳性对照组 0.5469±0.0219 5.1152±0.4210 1.5795±0.0279* 1.0428±0.0551 0.2040±0.0267低剂量组 0.4363±0.0840 5.5315±0.6242 1.4024±0.0215# 1.0130±0.0339 0.2363±0.0461中剂量组 0.5120±0.1178 5.0999±0.5637* 1.5274±0.0355* 1.0463±0.0223 0.2067±0.028高剂量组 0.4808±0.0559 5.0049±0.4307* 1.5776±0.1266* 1.0060±0.0339 0.2568±0.0052

由表1可知，各剂量组分别与正常对照组、模型对照组和阳性对照组比较，体质量无明显变化(P＞0.05)，各组摄食量也无明显变化(P＞0.05)。说明翡翠贻贝粗多糖对小鼠体质量增长和摄食量无影响，可初步断定食用翡翠贻贝粗多糖并未妨碍小鼠的生长和摄食量。

2.2 翡翠贻贝粗多糖对小鼠各脏器指数的影响

脏器指数常能反映实验动物总的营养状态和内脏的病变情况，不同龄期动物的脏器指数有一定的规律，如接触外来物质致使动物的某个脏器受到损害，脏器指数将发生变化，脏器指数有经济、有效、灵敏的特点。

由表2可知，翡翠贻贝粗多糖对心、脑、脾指数影响不大，对肝、肾指数影响较大，高脂饲料可导致肝指数升高、肾指数降低，而在灌胃翡翠贻贝粗多糖后可以改善这种变化。和正常对照组相比，模型对照组的肝指数升高(P＜0.05)，肾指数降低(P＜0.01)。和模型对照组相比，中、高剂量组可以显著降低肝指数(P＜0.05)，提高肾指数(P＜0.05)。

2.3 翡翠贻贝粗多糖对小鼠血清和肝脏TC、TG含量的影响

由表3可见，造模后，与正常组比较，小鼠血清和肝脏中的TC和TG含量都有明显的升高(P＜0.01)，显示造模成功。低剂量组血清TC、TG含量显著的低于模型对照组(P＜0.05，P＜0.01)，中、高剂量组血清和肝脏TC、TG含量极显著低于模型对照组(P＜0.01)，说明翡翠贻贝粗多糖能有效降低小鼠血清和肝脏TC、TG含量；翡翠贻贝粗多糖血清和肝脏各剂量组与正常对照组相比，高剂量组无明显差异(P＞0.05)；与阳性对照组相比，血清和肝脏低剂量组有极显著差异(P＜0.01)，高剂量组无差异(P＞0.05)。可见翡翠贻贝粗多糖能有效预防高血脂小鼠血清和肝脏TC、TG含量的升高，降低TC、TG值作用明显，肝脏TC、TG降低说明翡翠贻贝粗多糖能有效调节小鼠肝脏脂质代谢，减少脂质的积累。此结果也说明翡翠贻贝粗多糖对脂肪肝具有一定的疗效。

2.4 翡翠贻贝粗多糖对小鼠血清HDL-C、LDL-C含量和AI的影响

表3 翡翠贻贝粗多糖对小鼠血清和肝脏TC、TG含量的影响(±s，n=12)Table 3 Effect of PCP on TC and TG levels in mouse serum and liver (±s，n=12)

表3 翡翠贻贝粗多糖对小鼠血清和肝脏TC、TG含量的影响(±s，n=12)Table 3 Effect of PCP on TC and TG levels in mouse serum and liver (±s，n=12)

组别 血清TC含量/(mmol/L) 肝脏TC含量/(mmol/mg pro) 血清TG含量/(mmol/L) 肝脏TG含量/(mmol/mg pro)正常对照组 4.14±0.52** 5.51±0.41** 1.50±0.51** 3.09±0.31**模型对照组 6.54±0.59##ΔΔ 10.18±1.54##ΔΔ 2.67±0.33##ΔΔ 7.23±1.23##ΔΔ阳性对照组 4.69±0.69#** 5.92±0.35** 1.63±0.10** 3.48±0.43**低剂量组 5.84±0.44##*△△ 9.33±0.54##ΔΔ 2.21±0.15##**ΔΔ 6.69±0.68##ΔΔ中剂量组 4.95±0.52##** 7.59±0.94##**ΔΔ 1.75±0.10** 4.70±0.58##**ΔΔ高剂量组 4.53±0.39** 5.99±0.64** 1.69±0.15** 3.62±0.33**

表4 翡翠贻贝粗多糖对小鼠血清HDL-C、LDL-C含量和AI的影 响 (x－ ± s，n=12)Table 4 Effect of PCP on serum HDL-C and LDL-C and AI of mice(x－± s，n=12)

由表4可知，高剂量组、阳性对照组与正常对照组比较，血清中HDL-C含量无明显差异(P＞0.05)，翡翠贻贝粗多糖中、高剂量组血清HDL-C含量极显著高于模型对照组(P＜0.01)，说明一定剂量的翡翠贻贝粗多糖能够有效提高小鼠血清中HDL-C含量。模型对照组血清LDL-C含量极显著高于正常对照组(P＜0.01)，说明小鼠食用高脂饲料能显著提高血清LDL-C含量。低、中、高各剂量组血清LDL-C含量极显著低于模型对照组(P＜0.01)，这表明一定剂量翡翠贻贝粗多糖能够有效降低血清LDL-C含量。

由此可见，翡翠贻贝粗多糖对高血脂的小鼠血清中HDL-C含量有明显提高作用，对LDL-C含量有明显降低作用，从而降低动脉粥样硬化的危险指数。

2.5 翡翠贻贝粗多糖对小鼠血清NO含量和LCAT活性的影响

表5 翡翠贻贝粗多糖对小鼠血清NO、LCAT的影响(x－± s，n=12)Table 5 Effect of PCP on serum NO and LCAT of mice(±s，n=12)

表5 翡翠贻贝粗多糖对小鼠血清NO、LCAT的影响(x－± s，n=12)Table 5 Effect of PCP on serum NO and LCAT of mice(±s，n=12)

组别 NO含量/ LCAT活力/(μmol/L) (μmol/(L·min))正常对照组 51.18±4.42** 4.92±1.40**模型对照组 31.14±6.81##ΔΔ 2.91±1.05##ΔΔ阳性对照组 47.02±5.41** 4.50±0.38**低剂量组 43.85±3.40##** 3.44±0.78##Δ中剂量组 46.60±3.40#** 4.01±0.32#*高剂量组 47.60±3.46** 4.62±0.36**

高脂血症小鼠血清TC、TG升高，动脉受损，内皮素合成及释放增加，从而导致NO合成减少。由表5可知，模型对照组与正常对照组比较，NO含量明显降低(P＜0.01)。低、中、高剂量组和阳性对照组都明显升高，与模型对照组之间有极显著性差异(P＜0.01)，高剂量组、阳性对照组与正常对照组之间无差异性(P＞0.05)。

LCAT酶是体内脂蛋白代谢的关键酶之一，此酶活力的下降可导致高脂血症及AS。与正常对照组相比，模型对照组LCAT活力极显著降低(P＜0.01)。与模型对照组比较，中、高剂量组的LCAT活力也有显著差异(P＜0.05，P＜0.01)，且高剂量组与正常对照组无显著差异(P＞0.05)，表明翡翠贻贝粗多糖有提高高脂小鼠LCAT活力作用，且剂量越高效果越明显。

2.6 翡翠贻贝粗多糖对小鼠血清和肝脏LPL、HL活性的影响

表6 翡翠贻贝粗多糖对小鼠血清和肝脏 LPL、HL活性的影响(x－± s，n=12)Table 6 Effect of PCP on the activities of LPL and HL in mouse serum and liver (±s，n=12)

表6 翡翠贻贝粗多糖对小鼠血清和肝脏 LPL、HL活性的影响(x－± s，n=12)Table 6 Effect of PCP on the activities of LPL and HL in mouse serum and liver (±s，n=12)

组别 血清LPL活力/ 肝脏LPL活力/ 血清中HL活力/ 肝脏HL活力/(U/mL) (U/mg pro) (U/mL) (U/mg pro)正常对照组 23.39±3.59** 12.56±1.54** 7.35±0.81** 17.90±0.95**模型对照组 15.56± 1.29##ΔΔ 8.51± 1.89##ΔΔ 5.31± 1.01##ΔΔ 13.73±2.02##ΔΔ阳性对照组 21.60±1.93** 12.01±2.18** 7.12±0.93** 16.04±1.74**低剂量组 18.5±1.60##*Δ 9.89±0.84##Δ 6.35±0.71#* 14.70±0.91##中剂量组 20.25±2.69#** 11.46±2.06** 6.99±1.23** 15.89±1.23#**高剂量组 21.03±2.22** 11.59±2.77** 7.09±0.80** 16.75±1.26**

由表6可见，高脂血症小鼠血清和肝脏LPL、HL酶活力极低于正常小鼠(P＜0.01)；使用翡翠贻贝粗多糖后，中、高剂量组的LPL、HL酶活性明显改善，与模型对照组比较有极显著差(P＜0.01)，高剂量组与正常对照组差异不显著(P＞0.05)。

3 讨 论

高脂血症是中老年常见病，是促进动脉粥样硬化和危及人类健康的冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)的主要危险因素之一，血脂异常的防治已经成为冠心病一级和二级预防的重要手段[6-7]。另外，血脂的降低已被证实可以减慢已形成的粥样硬化斑块的进展，甚至使其消退，并有可能减低冠状动脉粥样硬化性心脏病的病死率[8-9]。

已证实，血清TC和LDL-C水平的升高与动脉粥样硬化的发生成正相关[10]，而肝脏中脂质含量异常升高会导致脂肪肝的产生及肝脏功能的损伤。翡翠贻贝粗多糖能有效改善模型小鼠血脂水平，减少肝脏TC和TG的蓄积，降低动脉粥样硬化指数。

NO由血管内皮细胞产生和分泌的，对小鼠的研究表明，内皮源性NO缺乏是致AS的重要因素[11]，在AS的各个发病阶段中几乎都存在NO生物活性的异常。NO可促进血管平滑肌细胞的凋亡，使血管舒张，并可抗氧化还原反应，减缓动脉硬化进程[12]。可见，调控NO活性已经是对AS进行预防和治疗的必要途径。

LCAT是催化胆固醇与不饱和脂肪酸进行酯化的一种酶，它在HDL-C的代谢和胆固醇的逆向转运中起着重要的作用。当LCAT活性降低时，血脂代谢紊乱，将造成胆固醇积聚，促使动脉粥样硬化的形成和发展。

LPL是调节脂蛋白代谢的一种关键酶，能使TG水解，释出游离脂肪酸(FFA)。通过提高LPL的活性可以抑制动脉粥样硬化的发生发展[13]。

H L是主要在肝细胞中合成，能水解各种脂蛋白中的甘油三酯和磷脂，肝细胞膜上的肝脂酶作为配体能与多种脂蛋白结合表现出抗动脉粥样硬化的作用[14]。

本实验发现翡翠贻贝粗多糖对高脂血症小鼠血清的TC、TG、LDL-C，肝脏TC、TG均有降低作用，而对血清HDL-C、NO有升高作用；血清和肝脏LPL、HL以及血清LCAT活性均较高脂对照组有明显提高，能有效调节高脂小鼠血清和肝脏脂质代谢。由此，不难看出翡翠贻贝粗多糖有显著的降血脂效应，其机理可能是通过提高降酯酶HL、LPL、LCAT的活性，降低血清和肝脏TC、TG，促进血清HDL-C的生成，调节NO的平衡来改善血管内皮功能障碍，进而预防动脉粥样硬化发生、发展。可以预想，翡翠贻贝粗多糖对治疗高脂血症、预防动脉粥样硬化、冠心病等方面是具有广阔的开发前景的，有望成为一种新型调节血脂的保健食品。

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Hypolipidemic Effect of Crude Polysaccharides fromPerna viridis

LI Meng-jie，FAN Xiu-ping，WU Hong-mian*，HU Xue-qiong
(College of Food Science and Technology, Guangdong Ocean University, Zhanjiang 524025, China)

Objective: To investigate the hypolipidemic effect of crude polysaccharides fromPerna viridis(PCP) in hyperlipidemic mice and its mechanisms. Methods: Totally 72 Kunming male mice were arbitrarily divided into normal control group, hyperlipidemia model group, positive control group, PCP low-dose group, PCP medium-dose group, and PCP high-dose group. The normal control group was fed normal diet and other five groups were fed high-dat diet. The normal control group and model control group were administered with the same volume of normal saline and the positive control group with simvastatin tablet at the dosages of 5 mg/kg. The low, medium and high dose groups were administered with crude polysaccharides fromPerna viridisat the dosages of 50, 100 mg/kg and 200 mg/kg, respectively. All the administrations were carried out once a day for 30 days. The contents of serum total cholesterol (TC), triglyceride (TG), low density lipoprotein-cholesterol (LDL-C), high density lipoprotein-cholesterol (HDL-C) and NO, the contents of liver TC and TG, and the activities of serum lecithin cholesterol acyltransferase (LCAT) as well as lipoprotein lipase (LPL) and hepatic lipase (HL) in the serum and liver were determined after the last administration. Results: Crude polysaccharides fromPerna viridiscould decrease the contents of serum TC, TG and LDL-C and AI, increase the contents of serum HDL-C and NO, reduce the contents of liver TC and TG, and enhance the activities of serum LCAT and the activities of HPL and HL in the serum and liver. Conclusion: Crude polysaccharide fromPerna viridiscan significantly decrease blood lipid and the mechanism may be related to the improved activities of LCAT and LPL and increased levels of HDL-C and NO.

crude polysaccharide fromPerna viridis；mice；hyperlipidemia

TS254.1

A

1002-6630(2012)01-0257-05

2011-02-11

广东海洋大学自然科学研究项目(0612258)

李孟婕(1986—)，女，硕士研究生，研究方向为海洋生物活性物质。E-mail：limengjie86@163.com

*通信作者：吴红棉(1953—)，男，教授，硕士，研究方向为海洋生物活性物质。E-mail：hxwz247@163.com