泰和乌骨鸡活性肽对5- 氟尿嘧啶诱导HSF细胞损伤的保护作用

田颖刚，王春艳，黄宇玫，廖春艳，张 盼，朱 胜，乔娟娟

(1.南昌大学食品科学与技术国家重点实验室，江西南昌330047;

2.南昌大学科学技术学院，江西南昌 330029)

泰和乌骨鸡活性肽对5- 氟尿嘧啶诱导HSF细胞损伤的保护作用

田颖刚1，王春艳1，黄宇玫2，廖春艳1，张 盼1，朱 胜1，乔娟娟1

(1.南昌大学食品科学与技术国家重点实验室，江西南昌330047;

2.南昌大学科学技术学院，江西南昌 330029)

目的:用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)研究泰和乌骨鸡活性肽对5－氟尿嘧啶(5－FU)损伤细胞DNA的保护作用。方法:传代培养人皮肤成纤维细胞(HSF)，随机分为正常对照组，5－FU组，5－FU+泰和乌骨鸡活性肽组。应用MTT法检测细胞存活率，单细胞凝胶电泳法(SCGE)检测5－FU引起HSF细胞DNA损伤程度，羟脯氨酸试剂盒检测细胞培养液中羟脯氨酸含量。结果:与正常对照组比较:5－FU组HSF细胞DNA的损伤程度较严重，且尾长、尾距、Olive尾距和尾部DNA百分含量显著增加(p＜0.001)，细胞培养液中羟脯氨酸含量显著性减少(p＜0.05)。与5－FU组比较，泰和乌骨鸡活性肽组细胞的尾长、尾距、Olive尾距和尾部DNA百分含量均显著性减少(p＜0.001)，而细胞培养液上清中羟脯氨酸含量升高(p＜0.01)。结论:泰和乌骨鸡活性肽对HSF细胞DNA损伤具有保护作用，泰和乌骨鸡活性肽可以剂量依赖性地降低5－FU诱导的HSF细胞DNA的断裂损伤。

泰和乌骨鸡，活性肽，5－氟尿嘧啶，DNA损伤，单细胞凝胶电泳

5－氟尿嘧啶(5－fluorouracil，5－FU)为临床常用的抗代谢类肿瘤治疗药物，因其代谢转化为5－氟脱氧尿嘧啶核甘酸(FDUMP)，抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶(TS)，从而抑制肿瘤细胞DNA复制合成，造成DNA损伤，从而发挥抗肿瘤作用［1］，该过程同样会作用于正常细胞，如抑制成纤维细胞的增殖和胶原的合成，延迟伤口愈合［2－5］。因此需要通过改变给药方式、修饰化疗药物结构或者给予适当的解毒剂配伍等方法来提高5－FU选择性且降低其临床毒副作用。研究表明，应用生长激素、谷氨酰胺能提高吻合口愈合强度，促进术后早期腹腔化疗条件下结肠吻合口愈合［6－7］。泰和乌骨鸡是我国特有的药食两用滋补鸡种，传统中医认为乌骨鸡能补虚劳羸弱，滋阴清热，治消渴心腹痛，益产妇，治女人崩中带下、一切虚损诸病，其临床疗效已被广为证实［8］。本课题组研究证明泰和乌骨鸡活性肽具有非酶糖基化抑制作用［9］，良好的抗氧化作用［10］和一定程度的补血作用［11］。本文采用对DNA断裂损伤较敏感的单细胞凝胶电泳技术探讨泰和乌骨鸡活性肽对5－FU诱导人皮肤成纤维细胞DNA损伤的保护作用，以期为乌骨鸡功能活性的研究和临床应用提供一定的理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

泰和乌骨鸡活性肽 由新鲜的泰和乌骨鸡，经脱毛、去内脏、绞成肉泥，然后采用蛋白酶酶解制得(详见专利［12］);人皮肤成纤维细胞 美国标准菌种收藏所(ATCC)编号为842;胎牛血清 杭州四季青生物工程材料有限公司;DMEM培养基 美国Gibco公司;羟脯氨酸试剂盒 南京建成生物公司;四甲基偶氮唑蓝(MTT) sigma公司;5－氟尿嘧啶 上海旭东海普药业有限公司;胰蛋白酶 北京博大泰克生物基因技术有限责任公司;EDTANa2、Hepes 北京索莱宝科技有限公司;正常熔点琼脂糖、低熔点琼脂糖、溴化乙锭、Tris 生工生物工程(上海)有限公司; 96、6和12孔细胞培养板(平底) 美国Costor。

MK3型酶标仪 上海热电仪器有限公司; IDX－35B型高压灭菌锅 上海申安医疗器械厂;BHC－1300ⅡA/B3型生物安全柜 苏净集团安泰公司; BDS200型倒置显微镜 北京福凯仪器有限公司; WJ－80A－111型二氧化碳培养箱 上海新苗医疗器械制造有限公司;Ti－U型荧光倒置显微镜 日本尼康公司;SIMS00000型Milli－Q50超纯水净化系统

美国Millipore公司;DYY－Ⅲ2型稳压稳流电泳仪、DYCP－31B型电泳槽 北京市六一仪器厂;彗星图象分析软件(Casp－1.2.2)。

1.2 实验方法

1.2.1 人成纤维细胞的培养 将HSF细胞按5×105个/mL接种在DMEM高糖培养基中(pH7.4，含10% FBS、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素、10μmol/mL Hepes缓冲液、2μmol/mL L－谷氨酰胺)，二氧化碳培养箱温育(37℃、5%CO2)。细胞为梭型贴壁生长，每2～3d传代1次，取对数生长期细胞用于实验。

1.2.2 5－FU损伤模型建立 取对数生长期HSF细胞以1×105个/孔密度接种于96孔板上，于37℃、5%CO2培养箱中培养24h后，加入5－FU使其终浓度为50、100、200、400、800μg/mL，继续培养24h。培养时间终止后，采用MTT法测定细胞存活率［13］，每孔加入5mg/mL的MTT 20μL，温育4h，去除培养液及MTT，每孔加入150μL二甲基亚砜，用酶标仪测定各孔在波长490nm处吸光度。单细胞凝胶电泳法测定HSF细胞DNA损伤。

细胞存活率(%)=(正常组OD值－5－FU组OD值)/正常组OD值×100

1.2.3 实验分组及给药 实验分为5组，分别为正常对照组、5－FU模型组、泰和乌骨鸡活性肽低、中、高剂量组。泰和乌骨鸡活性肽组加入浓度为10、50、250μg/mL泰和乌骨鸡活性肽。正常对照组、5－FU模型组加入等量培养液;于37℃、5%CO2培养箱中培养24h后，泰和乌骨鸡活性肽组和5－FU模型组加入终浓度为100μg/mL 5－FU，正常对照组加入等量的培养液。

1.2.4 MTT法测定HSF细胞存活率 取同代的对数生长期HSF细胞以1×105个/孔密度接种于96孔板上，于37℃、5%CO2培养箱中培养24h后，按照1.2.3实验分组及给药处理。于37℃、5%CO2培养箱中培养24和48h后采用MTT法测定细胞存活率。

1.2.5 单细胞凝胶电泳法检测细胞DNA损伤

1.2.5.1 细胞处理及细胞悬液的制备 取同代的对数生长期HSF细胞以1×105个/孔接种于6孔板上，按1.2.3实验分组及给药处理。于37℃、5%CO2培养箱中培养24h后，去除培养液，4℃ PBS洗一次，加入0.25%胰蛋白酶和 0.02%乙二胺四乙酸二钠(EDTANa2)消化3min，1000r/min离心5min后收集细胞，用PBS重悬，密度为1×105个/mL。

1.2.5.2 制片 单细胞凝胶电泳方法采用Singh等的方法［14］稍加改进后进行。将加热溶解的0.75%正常熔点琼脂糖冷却至45～60℃时，取120μL铺于载玻片上，4℃凝固10min。取25μL单细胞悬液与37℃3倍体积0.75%的低熔点琼脂糖混匀液，铺于第二层胶上，4℃固定10min。

1.2.5.3 电泳 将胶板浸于4℃裂解液(含2.5mmol/mL NaCl，100μmol/mL EDTANa2，10μmol/mL Tris，pH10.0，临用前加10%的DMSO，1%的TritonX－100)中裂解1.5h。取出载玻片用蒸馏水轻柔漂洗2次，以免琼脂糖脱落，然后将胶板浸于4℃电泳缓冲液(1μmol/mL EDTANa2，300μmol/mL NaOH，pH13.0)解螺旋20min，电泳(25V，200mA)20min。

1.2.5.4 中和及染色 电泳结束后，胶板用中和缓冲液(0.4mmol/mL Tris，pH7.5)中和三次，每次5min，中和完全后用2μg/mL的EB 50μL染色1min，蒸馏水脱色10min。以上操作均在4℃暗处进行。

1.2.5.5 结果观察 荧光显微镜10×目镜，20×物镜下观察结果(激发光波长510～560nm)及拍照。每组随机选择100个细胞计数，使用CASP软件测量照片中尾长、尾矩、Olive尾矩等指标以反映细胞DNA的损伤程度。按照Kamer I的方法［15］利用彗星尾长将DNA损伤分为四级:A型(胞核清楚，尾长不超过10μm)、B型(胞核清楚，尾长在10～30μm之间)、C型(胞核荧光强度低，尾长在30～40μm之间)和D型(胞核和慧尾不能区分，尾长超过40μm)。计算公式如下:

尾长=彗星头的右边界到彗星尾部末端的距离

尾距=尾长×尾部DNA百分比

Olive尾距=从头光密度重心到尾光密度重心的距离×尾部DNA百分比。

1.2.6 羟脯氨酸含量的测定及胶原含量的计算 取处于对数生长期的HSF，制成细胞悬液，以1×10个/孔接种于12孔板。按1.2.3实验分组及给药处理，置于37℃、5%CO2培养箱中培养，作用终止时吸取上清液0.5mL测羟脯氨酸含量。具体操作按羟脯氨酸检测试剂盒说明书进行，测定上清液中羟脯氨酸在550nm处的吸光值(A值)，并根据公式计算羟脯氨酸含量，间接反映HSF细胞胶原含量。计算公式如下:5

表1 5－FU对HSF细胞DNA损伤的作用(±S，n=100)Table 1 Effect of 5－FU on DNA damage in HSF(±S，n=100)

表1 5－FU对HSF细胞DNA损伤的作用(±S，n=100)Table 1 Effect of 5－FU on DNA damage in HSF(±S，n=100)

注:与正常对照组相比，＊＊＊p＜0.001。

组别 药物质量浓度(μg·mL－1) 彗星率(%) 尾部DNA含量(%)尾长(μm) 尾距 Olive 尾距正常对照组 / 4.00 0.77±8.46 3.58±2.20 0.047±0.10 0.17±0.27 5－FU组 50 58.50 6.19±5.76＊＊＊ 12.98±9.74＊＊＊ 1.34±2.02＊＊＊ 1.58±1.61＊＊＊5－FU组 100 98.09 27.13±1.10＊＊＊ 34.78±11.01＊＊＊ 10.11±5.07＊＊＊ 8.31±2.80＊＊＊5－FU组 200 100.00 35.27±14.14＊＊＊ 51.18±15.25＊＊＊ 19.89±12.75＊＊＊ 12.78±6.10＊＊＊

表2 泰和乌骨鸡活性肽对5－FU诱导HSF细胞增殖抑制的影响(±S，n=6)Table 2 Protective effect of bioactive peptides from TBSF on 5－FU－induced inhibition of proliferation in HSF(±S，n=6)

表2 泰和乌骨鸡活性肽对5－FU诱导HSF细胞增殖抑制的影响(±S，n=6)Table 2 Protective effect of bioactive peptides from TBSF on 5－FU－induced inhibition of proliferation in HSF(±S，n=6)

注:与正常对照组相比，*p＜0.05，＊＊＊p＜0.001;与5－FU损伤组相比，ap＜0.05，bp＜0.001;表3～表4同。

组别 药物质量浓度(μg·mL－1) 24h存活率(%) 48h存活率(%) 100±3.73 100±1.49 5－FU损伤组 100 85.46±3.81＊＊＊ 51.18±0.81＊＊＊泰和乌骨鸡活性肽组 10 91.40±2.49b 67.95±2.19c泰和乌骨鸡活性肽组 50 94.06±2.84c 71.95±2.63c泰和乌骨鸡活性肽组 250 99.77±3.74c 74.79±3.82正常对照组/ c

式中:A0为空白管吸光度;A1为标准管吸光度; A2为测定管吸光度。

1.2.7 统计分析 采用SPSS18.0统计软件对数据进行组间t检验。实验数据以平均值±标准差表示。

2 结果与分析

2.1 不同浓度5-FU对HSF细胞存活率的影响

如图1所示，不同浓度的5－FU作用于HSF细胞24h后，随着作用浓度增加细胞存活率与正常对照组相比显著降低。浓度50、100μg/mL作用细胞存活率与正常对照组有显著变化(p＜0.01)，但细胞存活率都在80%以上，浓度为大于等于200μg/mL 5－FU已出现明显的细胞毒性，细胞存活率为小于75%。由于单细胞凝胶电泳要求细胞存活率应在80%以上，因此选用浓度50、100、200μg/mL的5－FU筛选单细胞凝胶电泳最适作用浓度。

2.2 不同浓度5-FU对HSF细胞DNA损伤作用

如表1所示，不同浓度的5－FU作用HSF细胞24h后，与正常组比较，5－FU的各剂量组均可导致HSF细胞DNA出现不同程度的损伤，随着5－FU质量浓度增大，彗星率、尾长、尾距、Olive尾距和尾部DNA含量显著增加(p＜0.001)。50μg/mL实验组对HSF细胞彗星率只有58.50%，属于B型损伤，该损失比较轻微不适合作为单细胞凝胶电泳模型作用浓度。100μg/mL实验组对 HSF细胞彗星率为98.09%，属于C型损伤。200μg/mL实验组对HSF细胞彗星率100%，且为D型损伤，对细胞的损伤非常严重，凋亡细胞比较多。故采用 100μg/mL的5－FU作为HSF细胞损伤模型。

图1 5－FU对HSF细胞存活率的影响(±S，n=6)Fig.1 Effect of 5－FU on HSF survival(±S，n=6)

2.3 泰和乌骨鸡活性肽对5-FU抑制HSF细胞增殖影响

如表2所示，泰和乌骨鸡活性肽对5－FU诱导HSF存活率降低具有保护作用。与对照组比较，5－FU组可显著性抑制HSF细胞的增长(p＜0.001)，与5－FU组比较，泰和乌骨鸡活性肽组细胞存活率具有显著性差异(p＜0.05)，且当5－FU作用48h时泰和乌骨鸡活性肽组与5－FU组相比具有极显著性差异(p＜0.001)，表明泰和乌骨鸡活性肽能抑制5－FU诱导的HSF存活率下降。

2.4 泰和乌骨鸡活性肽对5-FU所致HSF细胞DNA损伤保护作用

如表3所示，不同浓度的泰和乌骨鸡活性肽均能显著降低5－FU对HSF细胞DNA损伤作用，其中在10～250μg/mL浓度范围内，随着泰和乌骨鸡活性肽浓度的增加，抗损伤作用加强，泰和乌骨鸡活性肽组细胞的彗星率、尾长、尾距、Olive尾距和尾部DNA含量与5－FU组相比具有显著性差异(p＜0.001)。与空白对照组相比，250μg/mL泰和乌骨鸡活性肽作用组没有显著性差异，表明该浓度下，泰和乌骨鸡活性肽可完全对抗5－FU诱导的DNA损伤。

表3 泰和乌骨鸡活性肽对5－FU诱导HSF细胞DNA损伤的保护作用(±S，n=100)Table 3 Protective effect of bioactive peptides from TBSF on 5－FU－induced DNA damage in HSF(±S，n=100)

表3 泰和乌骨鸡活性肽对5－FU诱导HSF细胞DNA损伤的保护作用(±S，n=100)Table 3 Protective effect of bioactive peptides from TBSF on 5－FU－induced DNA damage in HSF(±S，n=100)

组别 药物质量浓度(μg·mL－1)彗星率(%)尾部DNA含量(%)尾长(μm) 尾距 Olive 27 5－FU损伤组 100 98.09 27.13±1.11＊＊＊ 34.78±11.01＊＊＊ 10.11±5.07＊＊＊ 8.31±2.80＊＊泰和乌骨鸡活性肽组 10 61.50 9.43±7.76c 18.00±11.50c 2.52±2.91c 2.57±2.26c泰和乌骨鸡活性肽组 50 30.70 4.47±4.63c 9.69±8.96c 0.79±1.37c 1.08±1.22c泰和乌骨鸡活性肽组 250 4.00 0.92±2.09c 3.49±1.70c 0.06±0.21c 0.18±0.43尾距正常对照组 / 4.00 0.77±8.46 3.85±2.20 0.05±0.10 0.17±0.c

表4 泰和乌骨鸡活性肽对5－FU抑制HSF细胞合成羟脯氨酸和胶原含量的保护作用(±S，n=3)Table 4 Protective effect of bioactive peptides from TBSF on 5－FU－induced inhibition of hydroxyproline and collagen synthesis in HSF(±S，n=3)

表4 泰和乌骨鸡活性肽对5－FU抑制HSF细胞合成羟脯氨酸和胶原含量的保护作用(±S，n=3)Table 4 Protective effect of bioactive peptides from TBSF on 5－FU－induced inhibition of hydroxyproline and collagen synthesis in HSF(±S，n=3)

组别 药物质量浓度(μg·mL－1) 羟脯氨酸含量(μg·mL－1) 胶原含量(μg·mL－1) 2.93±0.128 21.89±0.95 5－FU损伤组 100 2.55±0.128* 19.04±0.95*泰和乌骨鸡活性肽 10 3.06±0.128b 22.85±0.95b泰和乌骨鸡活性肽 50 3.57±0.26b 26.65±1.9b泰和乌骨鸡活性肽 250 3.70±0.38b 27.6043±2.86正常对照组/ b

制备好的凝胶片在荧光显微镜下观察时，可见DNA被EB染成红色，未发生DNA断裂的细胞表现为一圆形类核，即彗星头部，荧光强度均匀，边缘整齐(图2(a))，正常组未受5－FU损伤的HSF细胞成圆形亮团;而发生DNA断裂的细胞则表现为断片向阳极方向迁移，形成彗星样的拖尾(图2(b))，5－FU组的HSF细胞在5－FU作用下，DNA分子受损严重，呈明显的彗星样变化。而预先应用250μg/mL泰和乌骨鸡活性肽处理后的高剂量实验组的HSF细胞DNA分子完整，影像与正常对照组相似。应用10、50μg/mL的泰和乌骨鸡活性肽的低、中剂量组的HSF细胞虽仍有彗星样的形态，但其尾迹也较5－FU组短且呈现一定的量效关系。

图2 泰和乌骨鸡活性肽对5－FU诱导HSF细胞DNA损伤保护作用的彗星图形(×200)Fig.2 Comet picture of the protective effect of bioactive peptides from TBSF on 5－FU－induced DNA damage in HSF(×200)

2.5 泰和乌骨鸡活性肽对5-FU诱导HSF细胞合成羟脯氨酸和胶原的影响

如表4所示，与正常组相比，5－FU损伤组可以显著抑制羟脯氨酸的合成(p＜0.05)，不同浓度的泰和乌骨鸡活性肽均能降低5－FU的抑制作用，与5－FU损伤组相比均可显著增加HSF细胞培养液中羟脯氨酸的含量(p＜0.01)。表明泰和乌骨鸡活性肽在10～250μg/mL浓度范围内可以促进HSF细胞分泌羟脯氨酸。

3 讨论

目前直接或间接测定DNA损伤常用技术有单细胞凝胶电泳、环境诱变物短期筛选实验(SOS/umu实验)、微核实验(MN)和姐妹染色体交换实验(SCE)等［16］。单细胞凝胶电泳又称为彗星实验，是近年来发展起来的一种在单细胞水平上检测真核细胞DNA损伤的方法［17］。该方法具有所需样品量少，简便，快速，无需放射性标记等优点，广泛地应用于DNA放射损伤、DNA剪切损伤、DNA交联的检测、药物的毒性评价、细胞凋亡鉴定等工作中［18－20］。

尽管单细胞凝胶电泳已被应用20多年，但其检测单个细胞DNA损伤的确切机理还不清楚，一般认为真核细胞的DNA分子量较大，DNA呈负超螺旋结构附着在核基质上。当各种内源性和外源性DNA损伤因子诱发细胞DNA链断裂时，DNA的超螺旋结构受到破坏，在碱处理和碱性电解质的作用下，DNA发生解螺旋，损伤的DNA断链及片段被释放出来，由于这些DNA的分子量很小，所以在电泳过程中会离开核DNA向阳极移动，因而形成了彗星的尾部，而较大的一些碎段位置则靠近细胞核，因而形成彗星的头部。而未损伤的细胞，其核DNA仍停留在核基质中，经荧光染色后呈现圆形的荧光团，无拖尾现象。在一定条件下，彗星尾长和DNA含量分布与DNA损伤程度呈线性相关，因此尾矩被作为SCGE定量分析的主要依据［21］。本研究以HSF细胞为实验对象，以5－FU作为DNA攻击剂，造成HSF细胞DNA损伤。从表3和图2可以看出，正常对照组细胞成圆形，没有拖尾现象，5－FU组细胞呈现明显的彗星样，而泰和乌骨鸡活性肽预处理组随着药物浓度的增加，出现彗尾的细胞数越来越少，细胞彗尾越来越短，直至没有。提示泰和乌骨鸡活性肽对5－FU造成的HSF细胞损伤有一定的保护作用。

胶原是真皮细胞间质中的主要有形成分，由人皮肤成纤维细胞产生，对维持皮肤厚度、张力、缓冲外界创伤有重要作用。羟脯氨酸在胶原蛋白中具有高度特异性且含量稳定，其含量约为胶原蛋白的13.4%，在弹力纤维中含量甚微，而其它蛋白中不存在，因此羟脯氨酸的含量可大致反映胶原蛋白的含量。本研究发现与正常对照组HSF细胞比较，5－FU组HSF细胞增殖能力明显减退，胶原合成能力降低。泰和乌骨鸡活性肽在10～250μg/mL浓度范围内可促进HSF细胞增殖，增加胶原的合成，且在该剂量范围内呈量效关系。因此推测泰和乌骨鸡活性肽对HSF胶原合成影响的原因为:a.通过改变HSF的数量，促进HSF增殖从而提高胶原的合成。b.泰和乌骨鸡活性肽改变了HSF细胞某些生物学特性，提高了单个HSF细胞的胶原合成能力。

本文研究结果表明5－FU可显著性抑制HSF细胞的增殖，造成HSF细胞DNA的损伤。然而在5－FU作用体系中加入泰和乌骨鸡活性肽后，MTT法对细胞存活率的测定表明泰和乌骨鸡活性肽对5－FU诱导HSF细胞增殖抑制具有显著的保护作用，单细胞凝胶电泳结果显示泰和乌骨鸡活性肽组细胞彗星尾长、尾矩、Olive尾距和尾部DNA百分含量与5－FU组比较明显减少，泰和乌骨鸡活性肽可以有效地减少5－FU引起的HSF细胞DNA的断裂损伤和提高HSF细胞分泌胶原蛋白的能力。综上所述，体外实验表明泰和乌骨鸡活性肽可以有效对抗细胞DNA损伤，其作用机理还有待于进一步的研究。

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Protective effect of bioactive peptides from taihe black－bone silky fowls on human skin fibroblasts injured by 5－fluorouracil

TIAN Ying－gang1，WANG Chun－yan1，HUANG Yu－mei2，LIAO Chun－yan1，ZHANG Pan1，ZHU Sheng1，QIAO Juan－juan1
(1.State Key Laboratory of Food Science and Technology，Nanchang University，Nanchang 330047，China;
2.College of Science and Technology，Nanchang University，Nanchang 330029，China)

Objective:A DNA injury model was established by using 5－fluorouracil(5－FU)in this study.Methods:A series of experiments(MTT assay，single cell gel electrophoresis(SCGE)，and hydroxyproline assay kits)were designed to investigate the effect of bioactive peptides from Taihe Black－Bone Silky Fowl(TBSF)on Human Skin Fibroblasts(HSF)against 5－FU－induced DNA damage.Cultured HSF were randomly divided into three groups:the control group，5－fluorouracil group and 5－fluorouracil+bioactive peptides from TBSF.Cell viability was measured by MTT assay，DNA damage was detected by SCGE assay，and hydroxyproline levels in HSF culture medium were measured by hydroxyproline assay kits.Results:compared with the control group，5－FU group exacerbated the DNA damage，in which the tail length，the tail moment，the Olive tail moment，and the tail DNA content significantly increased(p＜0.001)，whereas the content of hydroxyproline in HSF culture medium significantly decreased(p＜0.05).Compared with 5－FU group，Bioactive peptides from TBSF attenuated 5－FU－induced DNA damage，in which the tail length，the tail moment，the Olive tail moment and the tail DNA content significantly decreased(p＜0.05)，whereas the content of hydroxyproline increased dramatically(p＜0.01).Conclusion:Bioactive peptides from TBSF can protect HSF against 5－FU－induced DNA damage in a dose－dependent manner.

black－bone silky fowl;bioactive peptides;5－fluorouracil;DNA damage;single cell gel electrophoresis

TS201.4

A

1002－0306(2012)21－0356－05

2012－04－23

田颖刚(1972－)，男，博士，副研究员，研究方向:食品化学与营养。

江西省青年科学家培养计划(2010)资助项目(赣科发计字［2010］209号)。