关木通及其炮制品马兜铃酸A含量对比研究

张颖梅 李一珊 孙伟旭 林 吉 倪 晨



关木通及其炮制品马兜铃酸A含量对比研究

张颖梅1李一珊2孙伟旭2林 吉2倪 晨2

（1 广州王老吉药业股份有限公司，广州 510450；2 广州中医药大学，广州 510405）

考察关木通药材及其炮制品中马兜铃酸A的含量变化。采用高效液相色谱法，色谱柱Lichrospher-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相为甲醇-1%冰醋酸溶液（70:30），流速1.0mL•min-1，检测波长为250nm。柱温为35℃。醋炙、碱制及盐炙3种炮制品中马兜铃酸A的含量均较生品有所降低，并且碱制后的炮制品降低率最高。这3种炮制方法能够降低关木通中马兜铃酸A的含量，达到降低毒性的目的。对关木通毒性成分应予以足够的重视，可通过科学炮制降低毒性。

关木通；炮制；马兜铃酸A；高效液相色谱法

关木通为马兜铃科植物东北马兜铃（Aristolochia manshuriensis kom.）的干燥藤茎，具有泻热、降火作用，用于治疗口舌生疮、小便短赤[1]证，为临床常用的利尿通淋中药。近年来，因国内外连续发生多起服用马兜铃属植物（其特征成分均为马兜铃酸）引起肾脏毒害事件[2-6]，许多国家禁止此类药材及药剂的应用，2005年版《中国药典》亦取消了关木通这个品种。但正如毒理学实验的奠基人Paracelsus（1493～1541）所说：物质本质并非毒物[7]，只有在一定剂量下才变成毒物。本研究通过醋炙、碱制及盐炙3种炮制方法处理关木通，采用HPLC法进行马兜铃酸A的含量测定[8]，旨在研究不同炮制方法对关木通中马兜铃酸含量的影响[9]，探索降低关木通中马兜铃酸类成分的制剂方法[10]。

1 仪器与试验药品

岛津高效液相色谱仪（配有SPD-M 20A 230V检测器、CTO-20A柱温箱、DGU-20A5泵、SIL-20A自动进样器、LC-solution色谱工作站），实验室专用超纯水机（重庆利迪现代水技术设备有限公司）、万分之一电子天平（Sartorius BP110s），高速中药粉碎机，超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

关木通饮片（Aristolochia manshuriensis kom.）（批号：100402）经广州中医药大学中药鉴定学教研室黄海波老师鉴定结果为马兜铃科植物东北马兜铃（Aristolochia manshuriensis kom.）。马兜铃酸A对照品，液相用水为超纯水，试剂为分析纯。

2 炮制品制备

2.1 醋制品 称取关木通药材150g，取20mL陈醋喷淋于药材表面闷润至醋被药材吸尽，置砂锅内用文火炒至嗅得药材固有香味。冷却、干燥，再次称重，即为醋制品。

2.2 碱制品 称取关木通药材150g加0.01mol•L-1小苏打水没过药面，武火煮沸后改用文火煮至小苏打水干，用水洗净后干燥。

2.3 盐制品 称取关木通药材150g加3g食盐，用适量清水（能够完全浸泡药材）溶化，与药物拌匀，闷润至盐水吸尽，置砂锅内用文火炒至颜色加深有焦斑，取出冷却干燥，再次称重，即为盐制品。对炮制品及原药材打粉，编号，备用。

3 方法与结果

3.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18 5μm（250mm×4.6mm）；流动相：甲醇-1%冰醋酸；检测波长：250nm；流速：1mL•min-1；柱温：35℃。

3.2 供试品溶液的制备 精密称取原药材粉末1g及炮制品粉末，炮制品粉末相对于原药材量1g，各3份，分别置于25mL锥形瓶中，加入25ml甲醇，使用封口膜封口，称定重量，静置1h后，置于超声波清洗器中超声1h，取出后用电子称进行称定并用甲醇补足重量。摇匀，使用过滤装置过滤。各取滤液2ml，稀释定容至10ml，过微孔滤膜，弃去初滤液，收集续滤液，即得。

3.3 马兜铃酸A标准品溶液的制备 称取马兜铃酸A对照品5mg精密称定（5.01g），加甲醇超声溶解于10ml容量瓶中，配制成每1mL含马兜铃酸0.50mg的溶液，作为500μg•mL-1的对照品溶液，仔细量取5ml溶液到25mL容量瓶中，加甲醇定容至25ml，混匀，即为100μg•mL-1对照品溶液。依此法分别配成100、50、20、10、4、2、0.8、0.4μg•mL-1的对照品溶液。

3.4 关木通及其炮制品含量测定 将上述3.2制作的供试品溶液利用液相高效色谱仪，用波长250nm、流动相为甲醇-1%冰醋酸进行洗脱，甲醇在15min内由60%至100%，将峰面积值代入标准曲线得出浓度值，计算其含量。结果见表1和图1～5。

表1 关木通及其炮制品液相色谱图结果

图1 马兜铃酸A

图2 关木通原药材

图3 盐制关木通

图4 小苏打制关木通

图5 醋制关木通

3.5 线性范围考察 分别吸取“3.3”项下100、50、20、10、4、2、0.8、0.4μg•mL-1的马兜铃酸A标准品溶液10μL。注入高效液相色谱仪，按拟定的色谱条件分别测定峰面积，以进样量（μg）对峰面积绘制标准曲线为= 4062994.3903x +6172.1668，R²= 0.9999。结果表明，在上述色谱条件下，马兜铃酸A在0～1.0μg的范围内与峰面积呈良好的线性关系。

3.6 精密度考察 精密吸取4μg•mL-1的马兜铃酸A对照品溶液10μl连续进样5次，测定马兜铃酸A的峰面积，测得平均峰面积为165675，RSD＝1.1%，表明仪器精密度良好。

3.7 稳定性考察 精密吸取同一药材供试液10μL，分别于0、3、6、9、12、15h进样，测定马兜铃酸A的峰面积，测得平均峰面积为386044，RSD＝1.0%，表明供试品稳定。

3.8 重复性考察 取“3.2”制备的药材供试液，同一浓度取溶液1ml 6份，置于6个10ml容量瓶中，加乙醇定容后，摇匀，微孔滤膜过滤，每份进样10μL，测定马兜铃酸A峰面积。测得平均峰面积为799739，含测平均值为0.1953，相对标准偏差（RSD）为0.572%。表明本方法重复性良好。

3.9 加样回收率试验 按“3.2”方法制备关木通供试品溶液，并测定其含量。取该药材供试品溶液6份，分别精密加入马兜铃酸A标准品适量，测定并计算马兜铃酸A的回收率。结果见表2，马兜铃酸A平均回收率0.9992，RSD＝2.239%，表明该方法具有良好的回收率。

表2 加样回收率试验结果（n＝6） （%）

4 讨论

通过醋炙、碱制及盐炙3种炮制方法处理关木通，与原药材比较其马兜铃酸A含量明显降低，说明通过科学炮制可达到降毒作用。

通过此次对比研究，从一个侧面反映对于关木通等有毒中药材，我们不应因噎废食，采取一刀切的方式，取消此类中药的临床使用，而应更加深入研究，全面分析如何通过科学炮制，从而降低中药的毒性成分、保留中药的有效作用，实现中药合理用药。

[1] 江苏新医学院.中药大辞典[M].上海:上海科学技术出版社,1986:121.

[2] LORD G M. Nephropathy caused by Chinese hems in the UK [J]. Lancet, 1999(354):481-482.

[3] VANHERWEGHM J L. Rapidly progressive interstitial renal fibrosis in young women:Association widl slimm ing regimen including Chinese herbs[J]. Lancet,1993,13(341):387-391.

[4] 吴松寒.木通所致急性肾功能衰竭二例报告[J].江苏中医,1964(10):12-14.

[5] 洪用森,黄元林,王永钧.应用大剂量木通能肾功能衰竭致死[J].浙江中医杂志,1965(12):32.

[6] 黄朝兴.邵志平,许菲菲.木通中毒致肾损害的临床特点及与马兜铃酸肾病的联系[J].浙江中西医结合杂志,2000,(10):588-591.

[7] 张桥.卫生毒理学[M]. 3版.北京:人民卫生出版社,2001:72.

[8] 路金才,韩娜,杜晓曦.马兜铃酸的测定方法现状分析[J].中草药,2006, 37(7):1112-1114.

[9] 梁生旺.中药制剂分析[M].北京:中国中医药出版社,2003:38.

[10] 刘养清,赵慧辉,侯娜.反相高效液相法测定关木通及配伍中药中马兜铃酸A[J].分析化学,2006(特刊):5161-5164.

（本文校对：王治华 收稿日期：2012-02-15）

Content Changes of Aristolochic Acid-A from Caulis Aristolochiae Manshuriensis and Its Processed Products

Zhang Yingmei1Li Yishan2Shun Weixu2Lin Ji2Ni Chen2

(Guangzhou Wanglaoji Pharmaceutical Company Limited ,Guangzhou 510450, China)

To research the content changes of Aristolochic Acid-A from Caulis Aristolochiae Manshuriensis and its processed products.Chromatographic assay was performed on Lichrospher-C18 column (4.6mm×250mm, 5μm) with methanol-0.1%glacial a cetic acid solution (70:30) as mobile phase, the flow rate was 1.0mL/min and the detection wave length was set at 250nm, the column temperature was 35℃.The content of Aristolochic Acid-A was lower in Vinegar alkali and salt processed products than in crude drugs, and the reduction rate of the alkali processed products was the highest. The three processed method can reduce the content of Aristolochic Acid-A, and achieve the aim of reducing the toxicity. We should attach great importance to the renal toxicity Caulis Aristolochiae Manshuriensis; however, the toxicity can be reduced through scientific processed.

Caulis Aristolochiae Manshuriensis; Processed; Aristolochic Acid-A; HPLC

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.06.101

1672-2779（2012）-06-0154-03