HPLC法测定神痛灵胶囊中青藤碱的含量

2012-10-25王海龙赵庆华王宝全刘善奎

药学研究 2012年1期

王海龙，赵庆华，王宝全，刘善奎

（1.济南大学医学与生命科学学院，山东济南250022；2.济南军区联勤部药品仪器检验所，山东济南250022）

神痛灵胶囊是济南军区某医疗机构自制制剂，由青风藤、制川乌、制草乌、木瓜等8味中药组成.用于治疗各种神经性、风湿性疼痛等疾患，具有扶正固本、补血益气、祛风止痛、舒经活络等功效，临床疗效显著.为了有效地控制该制剂的质量，我们参照有关文献［1～3］，采用高效液相色谱法建立了制剂中青藤碱的含量测定方法.

1 仪器与试药

Agilent 1100高效液相色谱系统（安捷伦科技有限公司，配四元泵、自动进样器、可变波长检测器）.青藤碱对照品（中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用）；神痛灵胶囊（济南军区某医疗机构提供）；甲醇为色谱纯，其余为分析纯，水为重蒸馏水.

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：日本Sil C18色谱柱（4.6mm×250 mm，5μm）；流动相：甲醇－磷酸盐缓冲液（0.005mol·L－1磷酸氢二钠溶液，以0.005mol·L－1的磷酸二氢钠调节pH值至8.0，再以1% 三乙胺调节pH 值至9.0）（55∶45）；检测波长：262nm；流速：1mL·min－1；柱温：35 ℃ ；进样量：10 μL.

2.2 样品溶液制备取神痛灵胶囊内容物约3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇20mL，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得.

2.3 系统适应性试验取样品溶液10μL，注入高效液相色谱仪测试，青藤碱的保留时间为8.5min左右，理论塔板数以青藤碱计不低于6 000，青藤碱与相邻未知色谱峰的分离度大于2.5.色谱图见图1.

图1 对照品、样品和阴性样品的HPLC图谱

2.4 线性关系考察精密称取经五氧化二磷减压干燥24h的青藤碱对照品24.3mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液.分别精密吸取青藤碱对照品贮备液0.5mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液.分别精密吸取上述不同浓度的对照品溶液各10μL，进样测定.以进样量X（μg）对峰面积Y作图，进行回归分析.回归方程为：Y＝2 120.2X－23.562，r＝0.999 6（n＝6）.结果表明青藤碱进样量在0.243～2.43μg范围内线性关系良好.

2.5 阴性干扰试验按处方配制不含青风藤的样品，然后按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液并进行测定，结果表明阴性样品不含青藤碱峰，对测定结果无干扰，结果见图1.

2.6 精密度试验精密吸取2.4中对照品溶液（每1mL含青藤碱0.048 6mg）10μL，连续进样6次，记录峰面积，结果青藤碱平均峰面积为1 017.2，RSD＝0.45%（n＝6）.

2.7 重复性试验取同一批号样品5份，按样品测定方法测定，结果样品中青藤碱的平均含量为0.21mg·g－1，RSD＝1.2%（n＝5）.

2.8 稳定性试验对同一样品溶液，在5h内每隔1h进样10μL进行测定，共测5次，记录青藤碱色谱峰面积.5次测定中青藤碱的平均峰面积为712.1，RSD＝0.93%（n＝5）.表明样品溶液在5h内稳定.

2.9 加样回收率试验精密称取已知青藤碱含量（0.21mg·g－1）的神痛灵胶囊内容物约3g共9份，3份为一组分别精密加入青藤碱对照品贮备液0.5mL、1mL、1.5mL，按2.2制备样品溶液（精密加入70%乙醇分别调整为19.5mL、19.0mL、18.5mL），分别进样10μL测定，计算回收率，3组的平均回收率为100.3% ，RSD＝0.42%，结果见表1.

2.10 样品测定取神痛灵胶囊3批，按2.2制备样品溶液，进样10μL测定，结果见表2.