HPLC法测定子花洁肤搽剂中苦参碱的含量

2012-10-25张立庆

药学研究 2012年1期

张立庆，张娜

（1.山东大学药学院，山东济南250012；2.山东药品食品职业学院，山东威海264210）

子花洁肤搽剂是山东省淄博市张店区中医院的自制制剂，由蛇床子、苦参、黄柏等中药制成，具有清热解毒、祛风除湿、杀虫止痒之功效，临床上用于真菌感染、过敏性疾病、皮肤瘙痒症、尖锐湿疣、滴虫性疾病等.苦参为该制剂的主要成分之一，含有苦参碱等有效成分.原标准中未收载含量测定项［1］，为更好地控制产品质量，笔者参考有关文献［2，3］，采用高效液相色谱法对该制剂中的苦参碱含量进行研究，为该制剂建立完善的质量标准提供了科学依据.本方法操作简单，结果准确.

1 仪器与试药

SHIMADZU高效液相色谱仪（SHIMADZU LC－20AT泵，SHIMADZU SPD－20A紫外检测器，SHIMADZU柱温箱CTO－20A，自动进样器SHIMADZU SIL－20A，LC－solution色谱工作站）.苦参碱对照品（批号：200508，供含量测定用，购于中国药品生物制品检定所）；子花洁肤搽剂（淄博市张店区中医院提供）；阴性样品（按处方比例，称取除苦参以外的中药材适量，模拟制剂的制备工艺制备）.实验所用甲醇、乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯.

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：GL Sciences lnc.ODS－SP色谱柱（150mm×4.6mm，5μm）；流动相：0.02mol·L－1磷酸二氢钾溶液－乙腈－三乙胺－磷酸（95∶5∶0.2∶0.2）；流速：1.0 mL·min－1；检测波长：220nm；柱温：40 ℃ ；进样量：10μL；理论板数按苦参碱峰计算应不低于2 000.

2.2 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥至恒重的苦参碱对照品10.59mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得苦参碱对照品溶液（浓度为0.105 9mg·mL－1），备用.

2.3 供试品溶液的制备取子花洁肤搽剂，摇匀，精密量取1mL，加水25mL，浓氨溶液1mL，摇匀，置分液漏斗中，用三氯甲烷提取4次（30mL、30mL、20mL、20mL），合并三氯甲烷提取液，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得.

2.4 阴性对照试验取阴性样品适量，按“2.3”项下方法制成阴性对照溶液.

照上述色谱条件，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μL，注入色谱仪中，记录色谱图.结果表明，在与苦参碱对照品色谱相应的位置上无干扰峰出现，方中其他组分对测定结果无影响.色谱图见图1.

图1 苦参碱对照品（A）、供试品（B）、阴性对照（C）液相色谱图

2.5 线性关系考察分别精密吸取对照品溶液4μL、8μL、12μL、16μL、20μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件，测定峰面积.通过对测定结果进行回归分析，以苦参碱对照品微克数（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：Y＝671 500X－2 538.8（r＝0.999 7）.结果表明，苦参碱进样量在0.423 6～2.118 0μg范围内呈良好的线性关系.

2.6 精密度试验取同一供试品溶液，按上述色谱条件，连续进样6次，测定苦参碱的峰面积，结果RSD为0.36%.表明仪器精密度良好.

2.7 稳定性试验取同一供试品溶液，按上述色谱条件，分别于0、2、4、6、8、10h注入液相色谱仪，分别测定峰面积.结果苦参碱峰面积RSD＝0.42%，表明供试品溶液在10h内稳定.

2.8 重复性试验取同一批供试品6份，按“2.3”项下方法制得供试品溶液，在相同色谱条件下测定并计算苦参碱的含量，结果RSD为1.08%.

2.9 加样回收试验采用加样回收法，精密量取已知含量的供试品（批号：201007141，苦参碱含量0.102 0mg·mL－1）0.5mL，加入苦参碱对照品0.5mL（0.105 9mg·mL－1），按供试品溶液制备方法制备并测定，计算回收率.结果见表1.