速效心痛气雾剂中牡丹皮的提取工艺研究

周长征

（山东中医药大学，山东 济南250355）

牡丹皮为毛茛科植物牡丹 （PaeoniasuffuticosaAndr.）的干燥根皮.味苦、辛、微寒.归心、肝、肾经，具有清热凉血，活血化瘀的作用.根皮主要含芍药苷（Paeoniflorin）、羟基芍药苷、丹皮酚等.芍药苷是牡丹皮中主要活性成分之一，稳定性好，醇溶性优于水溶性［1］.芍药苷具有多种生物活性，对免疫、心血管、中枢神经系统以及平滑肌等方面均有肯定的药理作用［2］.

速效心痛气雾剂由牡丹皮、川芎和冰片组成，具有清热凉血，活血止痛的作用.牡丹皮的提取方法是用90%乙醇冷浸提取2次，芍药苷为牡丹皮的重要成分之一，并对药材及其制剂的质量控制有着决定性的作用.因此，如何通过提取工艺的优化来提高牡丹皮中有效成分的提取率是提高药效的关键因素.为此，本研究探讨了牡丹皮的提取工艺，为牡丹皮的工业生产提供可行的方法.

1 实验材料

1.1 仪器 CS－930型薄层扫描仪（岛津）；BS110十万分之一电子分析天平（北京赛多利斯天平公司）；电热恒温水浴锅（北京长源试验设备厂）；电动搅拌器（广州纸行第三五金工场制造）；微量进样器（上海高颌工贸有限公司）.

1.2 材料与试剂 牡丹皮购于济南药材站，经山东中医药大学中药鉴定教研室周凤琴教授鉴定为毛茛科植物牡丹（PaeoniasuffuticosaAndr.）的干燥根皮其质量均符合《中国药典》2005年版（一部）［3］牡丹皮项下的有关规定.

芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110736－200320）；硅胶G（青岛海洋化工厂）；试剂均为分析纯.

2 牡丹皮提取工艺研究

牡丹皮中主要成分为丹皮酚与芍药苷.因为丹皮酚挥发性很强不能准确测其含量［4］.故选用芍药苷作为确定牡丹皮提取工艺的优选指标.本实验对渗漉法与冷浸法提取牡丹皮作了优选.考虑到提取效率以及适于工业化大生产，故对此两种提取方法进行了系统比较.

2.1 冷浸法

2.1.1 提取方法 取牡丹皮120g，粉碎成粗粉，用90%乙醇冷浸提取两次，第1次加90%乙醇2 600mL，搅拌6h，静置12h；第2次加90%乙醇2 000mL，搅拌4h，静置12h，吸取上清液，滤过，回收乙醇至体积约250mL，溶液恒温水浴上加热浓缩，然后真空干燥.取干浸膏2g，粉碎成细粉，精密称重，加95%乙醇80mL置量瓶中超声处理30min，放置，冷却，再用95%乙醇定容至100mL，摇匀，滤过，即得供试液.

2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷标准品10mg，置10mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得浓度为1mg·mL－1的芍药苷对照液.

2.1.3 薄层板的制备 硅胶G用0.5%CMC－Na溶液作黏合剂，板厚0.3mm，使用前105℃活化30min.

2.1.4 展开与显色 展开剂：三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸（20∶2.5∶10∶0.1），预饱和15min，上行展开至13cm，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液显色，105℃烘至斑点清晰.

2.1.5 波长的选择 取对照品溶液和供试品溶液，在400～800nm波长范围内进行扫描，由扫描图可知，在600nm处对照品溶液和供试品溶液均有最大吸收，在700nm处均有最小吸收.

2.1.6 仪器条件与扫描方式 双波长反射式锯齿扫描，测定波长600nm，参比波长700nm，直线参数为3，灵敏度为1，狭缝：1.2mm×1.2mm.

2.1.7 标准曲线的绘制及线性关系的考察 分别精密吸取2.1.2项下的对照液2、4、6、8、10μL点于同一硅胶 G薄层板上，展开，显色，扫描，得回归方程Y＝4 705.3X＋2 483.7，r＝0.999 0，表明点样量在2～10μg之间有较好的线性关系.

2.1.8 稳定性考察 取样品溶液和对照品溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以上述条件展开，扫描，每1h扫描1次，结果在0～6h内稳定，结果见表1.

表1 不同时间测的峰面积值（n＝3）

2.1.9 样品的测定 分别吸取2.2.1项下的供试液10μL、10μL与2.1.2项下的对照品溶液5μL、10μL交叉点于同一硅胶G薄层板上，按2.1.4项下的展开剂展开，取出，晾干，显色，再按2.1.6项下的条件进行扫描，记录峰面积积分值，采用外标两点法计算.

2.2 渗漉法

2.2.1 提取方法 取牡丹皮480g，粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法（《中国药典》2005年版一部附录I O）用90%的乙醇作溶剂，浸渍24h，以1mL·min－1速度进行渗漉，收集渗滤液约为2 200mL，回收乙醇，真空干燥.称取2g，粉碎成细粉，精密称定，加95%乙醇80mL置量瓶中超声处理30min，放置，冷却，再用95%乙醇定容至100mL，摇匀，滤过，即得供试液.

2.2.2 样品的测定 分别吸取2.1.1项下的供试液20μL、20μL与2.1.2项下的对照液5μL、10μL交叉点于同一硅胶G薄层板上，按2.1.4项下的展开剂展开，取出，晾干，显色，再按照2.1.6项下的条件进行扫描，记录峰面积积分值，运用外标两点法计算.

表2 两种提取方法的比较（n＝3）

由表2可知，牡丹皮中芍药苷的提取率冷浸法和渗漉法分别为0.25g／100g和0.10g／100g，可以看出，冷浸法较渗漉法显著，更有利于有效成分芍药苷的溶出，这与速效心痛气雾剂质量标准的制法一致［5］，并且，冷浸法较渗漉法方便，可大量提取，更适于工业大生产.

3 讨论

双波长薄层扫描法测定芍药苷的提取率，要求展开剂配制要准确，否则对斑点形状变化有影响.

芍药苷含量测定方法较多，本实验采用了醇提，并用三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸（20∶2.5∶10∶0.1）展开，获得分离较好的芍药苷斑点，展开剂中甲酸可以防止斑点拖尾.

［1］季宇彬.中药有效成分药理与应用［M］.哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，1994：78－79.

［2］胡南，许惠玉，陈志伟，等.芍药苷的药理学研究进展［J］.齐齐哈尔医学院学报，2007，28（9）：1093－1095.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典2005年版（一部）［S］.北京：化学工业出版社，2005：160.

［4］杨云，张晶，陈玉婷.天然药物化学成分提取分离手册［M］.北京：中国中医药出版社，2003：73－74.

［5］中华人民共和国卫生部药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂第十一册［S］.北京：中华人民共和国卫生部，1996：150.