参麦注射液中5－羟甲基糠醛的含量测定

吴 毅，许 妍，赵 雯，吴铁荣

（江西省食品药品检验所，江西 南昌330029）

参麦注射液收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十八册，制剂由红参和麦冬两味药材及辅料吐温80组成，具有益气固脱、养阴生津、生脉之功效.临床用于治疗气阴两虚型导致的休克、冠心病、病毒性心肌炎、慢性肺心病、粒细胞减少症.

由于在参麦注射液中含有大量的糖类成分，主要有果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖等.而葡萄糖等糖类经过灭菌过程容易脱水反应生成5－羟甲基糠醛（5－Hydroxymethyl furfural，简称5－HMF）.一方面，药理研究表明：5－HMF对人体横纹肌和内脏有损害；另一方面，虽然5－HMF本身无色，但由于5－HMF发生聚合而由聚合物导致变色，且其产生量与葡萄糖颜色的深浅成正相关性，因此5－HMF的量可显示产品中葡萄糖的分解程度.在含葡萄糖或其他单糖的制剂中5－HMF常作为一个重要的有关物质加以控制，如《中国药典》2005版、BP2000版、USP27版和日本药局方中收载的葡萄糖注射液均采用UV法控制5－HMF的含量，根据该方法，一般要求5－HMF含量＜2.5μg·mL－1.基于以上原因，我们建立了HPLC法测定参麦注射液中5－HMF的含量，对抽验的6个生产企业，190批次样品进行检测.

参考《中国药典》2005年版葡萄糖注射液项下UV法对5－HMF含量测定的要求，按照5－HMF含量＜2.5μg·mL－1作为参麦注射液中HPLC法测定的限度，共检测190批次样品，检出5－HMF含量＞2.5μg·mL－1的批次169批，超出率：88.95%.

1 仪器与试药

SHIMADZU LC－2010AHT型高效液相色谱仪（岛津科技有限公司，日本）.5－羟甲基糠醛（含量＞99%，批号：1415620，Aldrich公司 ）、甲醇 （色谱纯，Sigma－aldrich公司）、去离子水（自制），其他试剂均为分析纯.

2 色谱条件

色谱柱：Venusil MP C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇－水（93∶7），流速：1.0mL·min－1；柱温：30 ℃ ；检测波长：284nm.

3 方法学考察

3.1 专属性试验 按照处方的制备工艺，添加相应的辅料，制备缺少红参和麦冬的样品，即制备缺少5－HMF的参麦注射液样品，取样品原液作为供试品溶液，按照上述色谱条件分析，结果显示：阴性无干扰，该方法专属性强.结果见图1～3.

图1 5－羟甲基糠醛对照品a.5－羟甲基糠醛

图2 参麦注射液样品a.5－羟甲基糠醛

图3 5－羟甲基糠醛阴性样品

3.2 线性关系及最低检出限 精密称取5－HMF对照品0.514 8g置100mL量瓶中，加甲醇至刻度，作为贮备液，精密量取1.0mL置100mL量瓶，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液.精密吸取上述对照品溶液1、2、4、8、10、20、30、50、100μL，注入液相色谱仪，以峰面积积分值为纵坐标，5－HMF质量数（μg）为横坐标进行线性回归，回归方程为：Y＝5 871.92X－2 874.96，r＝0.999 8.

结果表明：5－HMF在5.148～514.800ng范围内呈良好的线性关系.信噪比（S／N）为3时，5－HMF的最低检出限为0.193 0ng；信噪比为10时，5－HMF的最小定量限为0.386 1ng.

3.3 精密度试验 取5－HMF对照品10μL，依法连续测定6次，5－HMF的RSD为0.98%，表明其精密度良好.

3.4 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12h测定，5－HMF峰面积的RSD为0.35%，表明该供试品溶液在12h内稳定.

3.5 重复性试验 取同一参麦注射液样品溶液5份，按照确定的色谱条件测定峰面积，外标一点法计算5－HMF含量，求得RSD为0.95%.结果表明本方法重复性好，所得试验结果准确可靠.

3.6 回收率试验 精密量取含量为10.367 1μg·mL－1的同一本品5.0mL 6份分别置10mL量瓶中，各加入5－HMF含量为12.972μg·mL－1的对照品溶液4.0mL，加水至刻度，摇匀，按拟定的方法测定峰面积，外标一点法计算5－HMF含量.平均回收率为101.31%，RSD为1.3%.

4 样品测定

分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，用外标一点法计算，即得.各企业生产参麦注射液含量测定结果见表1.

表1 参麦注射液中5－HMF的含量

5－HMF的平均含量不同生产企业间高低二者间相差7倍；同企业不同批次间最大相差13.4倍.说明：由于缺少对5－HMF含量的控制，工艺的不稳定，造成各个企业之间存在较大的差异，并且同企业产品间的差异也很大.

5 讨论

各国药典中一般要求含葡萄糖等糖类的注射液中5－HMF含量＜2.5μg·mL－1，经拟定的非标方法检测，参麦注射液中5－HMF含量远高于化药所定标准，超出率超过80%.5－HMF是葡萄糖等单糖化合物在高温或弱酸等条件下脱水产生的一个醛类化合物，该化合物稳定性不好，容易分解成乙酰丙酸和甲酸，或发生聚合反应.影响5－HMF产生量的因素有溶液的pH值、灭菌的温度及时间等.葡萄糖在酸性溶液中相对稳定，碱性增加易脱水分解；含葡萄糖的注射液在高温加热灭菌时易产生5－HMF，其量的增加与灭菌稳定、时间呈正比.参麦注射液在提取时由于工艺的不同、含醇量的波动，将导致提取液中糖类成分的差异.另一方面，在中药提取后的放置过程中，皂苷类成分受热后苷键断裂，导致糖类成分的增加都将使注射液中含有的单糖含量显著增大，提供了5－HMF产生的“温床”.另外还有一个重要原因，某些生产企业利用添加葡萄糖来调节注射液的渗透压导致参麦注射液中葡萄糖含量的大大提高，也为5－HMF的产生提供了可能.