一种更年期肾阴虚证病证结合模型大鼠的探索

王 剑，徐志伟

(广州中医药大学，广州 510006)

肾阴虚证是更年期综合征各证型中较重要的一个证型，中医药具有良好的临床治疗效果［1］。但目前尚无一种更年期肾阴虚病证结合大鼠模型，影响了其机理及疗效的深入研究。本研究通过给予大鼠去卵巢诱发肾虚，结合灌服消耗阴液的药物诱导阴虚病变，观察该模型的病理生理改变。

1 材料与方法

1.1 材料

3月龄雌性大鼠，体重300g～320g。

1.2 实验方法

1.2.1 动物分组 大鼠按体重分为3组，分别为正常组、去卵巢模型组、阴虚模型组，每组6只。除正常组外其他各组予去卵巢手术，阴虚模型组同时灌服耗阴中药复方。

1.2.2 去卵巢造模方法 雌性大鼠腹腔注射1%戊巴比妥钠麻醉，切开皮肤和背肌约1.5cm～2cm，将卵巢下输卵管(包括脂肪)用丝线结扎，摘除卵巢。术后连续3d做阴道涂片检查，以涂片中未见到成熟脱落上皮细胞作为卵巢切除成功的指标，用于后续实验。

1.2.3 阴虚证造模用药 按照中医学辛热伤阴、利水伤阴、温燥伤阴的认识，给予大鼠灌服耗阴中药复方:熟附片 10g，干姜 10g，桂枝 10g，猪苓10g，泽泻10g，草豆蔻10g，均以成人公斤体重10倍用药量给药，每日1次，共12周。

1.2.4 血液 E2、FSH、LH、COR、T3、T4检测灌胃给药12周后，大鼠瞬间断头取血静置4h，离心分离血清，－20℃保存，用放免法检测。

1.2.5 子宫指数 动物处死后完整分离子宫，用1/10000电子天平称重。子宫指数=子宫湿重/体重。

1.2.6 大鼠垂体、肾上腺、子宫病理学检查大鼠瞬间断头后，迅速在颅底垂体窝周围用手术刀片割划，取出垂体，摘除一侧肾上腺取出大鼠子宫。常规石蜡切片、HE染色、光镜观察。

2 结果

2.1 各组大鼠体重、子宫重、子宫指数变化

表1 各组大鼠体重、子宫重量变化

表1显示，雌性大鼠在切除卵巢后，体重较同期正常组明显增加(P＜0.01)，而子宫重量、子宫系数明显减轻(P＜0.01);阴虚模型组体重与去卵巢模型组相比体重无差异，但子宫重量明显降低(P＜0.01)。

表2 各组大鼠 E2、FSH、LH变化值

表2显示，与正常组比较，去卵巢组血清中 E2明显降低(P＜0.01)，FSH有升高趋势，但无统计学意义，LH明显降低(P＜0.01);阴虚组 FSH、LH、E2均较去卵巢组明显升高(P＜0.05)。

2.2 各组大鼠 COR、T3、T4变化

表3 各组大鼠 COR、T3、T4变化值

表3显示，与正常组比较，去卵巢组血清中COR、T3明显降低(P＜0.05);阴虚组血清中 COR明显高于除正常组外其他各组(P＜0.05)，T3、T4亦呈升高趋势，但无统计学意义。

2.3 各组大鼠子宫、垂体、肾上腺病理检查

与正常组比较，去卵巢组大鼠子宫内膜及肌层均显著变薄，内膜层明显萎缩;内膜固有层内腺体数量明显减少，腺体腔明显减小且近于闭合，腺上皮亦明显萎缩，间质细胞体积减小，间质相对紧密。阴虚组大鼠子宫内膜上皮、腺上皮、间质细胞均有萎缩病变，但与去卵巢组相比萎缩程度较轻。

腺垂体分嗜酸性细胞、嗜碱性细胞、嫌色细胞3种，其中嗜酸性细胞根据其颗粒大小及免疫组化的反应，分为生长激素细胞和催乳激素细胞;嗜碱性细胞分为促甲状腺激素细胞、促性腺激素细胞、促肾上腺皮质激素细胞;嫌色细胞为贮备性细胞或分泌后细胞。与正常组相比，去卵巢组大鼠腺垂体所有腺细胞胞体明显萎缩，毛细血管窦分布亦减少。阴虚组大鼠腺垂体无萎缩现象，存在弥漫性的内分泌细胞呈肿胀、肥大现象，但究竟是何种细胞，尚待进一步的免疫组化判定。

正常大鼠肾上腺，球状带、束状带、网状带组织结构清晰、无萎缩和增生现象，去卵巢组束状带较正常组明显变薄，阴虚组球状带、束状带、网状带组织结构清晰，有增生现象。

3 讨论

文献报道，在雌性大鼠去卵巢3个月后出现骨质疏松［2，3］，本研究认为按照中医学肾主骨的理论，出现骨质疏松时大鼠整体肾虚状态明显，在此基础上加用灌服耗阴中药复方造成阴虚内热病变状态，从而可复合成肾阴虚证动物模型。联系各组大鼠内分泌激素检测结果，与垂体、子宫、肾上腺病理检测结果分析，大鼠在切除卵巢3个月后，血液中雌激素、卵泡刺激素、黄体生成素、皮质酮含量明显下降，其子宫内膜、垂体出现明显萎缩现象，肾上腺出现轻度萎缩，说明此时模型的下丘脑-垂体-卵巢轴功能低下，处于相当于人类的绝经后期阶段。

在阴虚模型组，血液中雌激素和卵泡刺激素含量均明显高于去卵巢模型组，其垂体中各内分泌细胞肿胀肥大最为明显。本文推测阴虚模型大鼠垂体中各分泌细胞在病理形态异常上伴有功能代偿性升高，分泌增多的卵泡刺激素促进脂肪、肝脏以及脑等组织中芳香化酶表达升高，使经肾上腺产生的雄激素转化为雌二醇增多并作用于子宫，使子宫内膜萎缩程度较去卵巢模型组有所改善。阴虚模型组血液中皮质酮含量明显高于去卵巢模型组，接近正常组，与以往阴虚内热证临床研究所发现的肾上腺皮质功能升高相似［4］。肾上腺皮质病理检查发现，有轻微增生和垂体各分泌细胞肥大肿胀现象，提示在灌服耗阴中药后，模型下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴功能相对于单纯去卵巢组明显升高。综合上述2个轴的功能变化，与中医学中的“阴虚内热”现象有类似之处。

［1］刘杰.益坤饮治疗肾阴虚型更年期综合征的临床研究以及对血清5-HT影响的探讨［D］.南京:南京中医药大学2010硕士论文.

［2］刘仕杰，莫新民，李劲平，等.淫羊霍苷对去卵巢骨质疏松症雌鼠的疗效及机理初步研究［J］.中国中医基础医学杂志，2012，18(3)，271-272.

［3］鞠大宏，张春英，王安民，等.左归丸对去卵巢所致大鼠骨质疏松症的治疗作用［J］.中国中医基础医学杂志，2001，7(3):17-19.

［4］上海中医学院生化教研组.阴虚火旺与肾上腺皮质、髓质激素关系的初步探讨［J］.上海中医药杂志，1979，(5)，8-11.