不同炮制方法对木瓜中总皂苷溶出的影响

陈秋兰，廖华卫，苏晓纯，王光宁

木瓜为蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomeles speciosa(Sweet) Nakai的干燥近成熟果实，习称“皱皮木瓜”，味酸、温，入肝、脾经，有舒筋活络、和胃化湿的功效，用于湿痹拘挛、腰膝关节酸重疼痛、暑湿吐泻、转筋挛痛、脚气水肿等。化学成分主要有黄酮类、萜类、有机酸类、多糖、鞣质、果胶等[1]，研究表明皂苷类成分是木瓜保肝、抗炎的有效部位之一[2~3]，炮制对木瓜中皂苷类成分的影响尚未见报道，因此本文对木瓜不同炮制品中总皂苷的含量进行比较，分析炮制因素对总皂苷成分溶出的影响，从而为揭示木瓜炮制机理做出有益的探索。

1 仪器与试药

1.1 仪器

紫外分光光度计2450（日本岛津公司）、十万分之一电子天平BP211D、HH-6恒温水浴锅、DS-8510型超声波清洗器、旋转蒸发仪。

1.2 试药

1.2.1 试剂 甲醇、乙酸乙酯、石油醚、高氯酸、正丁醇、冰醋酸、香草醛、无水乙醇均为分析纯，黄酒（四川巨龙食品有限公司）为食品级。

1.2.2 药材与对照品 木瓜药材（购于广州柏盛堂中药有限公司，由广东药学院中药学院中药资源系马鸿雁博士鉴定为蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomeles speciosa（Sweet）Nakai干燥近成熟果实）；齐墩果酸对照品（供含量测定用，批号：110713-200910，中国药品生物制品检定所）。

2 方法与结果

2.1 炮制品的制备

通过查阅相关文献[4]及各省市炮制规范整理出常用的五种木瓜饮片。

①生品

取木瓜片，置60 ℃烘箱中干燥1 h，取出，待凉后置干燥器中保存。

②炒黄品

取干燥木瓜片20 g，置炒制容器中，文火加热，炒至表面微黄，取出放凉，筛去碎屑，待凉后置干燥器中保存。

③炒焦品

取干燥木瓜片20 g，置炒制容器中，文火加热，炒至表面微焦，取出放凉，筛去碎屑，待凉后置干燥器中保存。

④盐炙品

取干燥木瓜片20 g，照2010版《中国药典》附录炮制通则[5]，加盐水拌匀（食盐用量2%），闷透，置炒制容器内，文火加热，炒至规定的程度时，取出，放入60 ℃烘箱烘干，取出，待凉后置干燥器中保存。

⑤酒炙品

取干燥木瓜片20 g，照2010版《中国药典》附录炮制通则[5]，加黄酒（10～20%）拌匀，闷透，置炒制容器内，文火加热，炒至规定的程度时，取出，放入60 ℃烘箱烘干，取出，待凉后置干燥器中保存。

2.2 供试品溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 取105 ℃干燥至恒重的齐墩果酸标准品，精密称定，置10 mL的容量瓶中用无水乙醇溶解、定容，摇匀，浓度为0.226 mg﹒mL-1，备用。

2.2.2 样品溶液 取生品及炮制品粉末各10 g，按1∶10石油醚回流脱脂2次，每次1 h。取1 g脱脂后的干燥粉末，精密称重，置具塞锥形瓶中，加入20 mL75%的乙醇，超声提取两次，每次1 h，过滤，75%乙醇洗涤滤纸和滤渣，合并滤液及洗涤液并减压浓缩至8 mL左右，加入水饱和的正丁醇萃取至正丁醇相无色（5×10 mL），合并正丁醇层，用少量水洗涤2次，合并水层并用少量水饱和的正丁醇洗涤1次。将所有的正丁醇萃取液和洗涤液合并，减压浓缩至干，用甲醇溶解并定容至50 mL，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 测定波长的确定 分别吸取0.2 mL齐墩果酸标准溶液和样品溶液置具塞试管中，挥干溶剂，精密加入新配制的5%香草醛-冰乙酸0.2 mL，再加入高氯酸溶液0.8 mL，振摇，在70 ℃水浴中加热15 min，取出，流水浴中冷却10 min，加乙酸乙酯4.00 mL，摇匀。以相应试剂做空白对照，在400～600 nm波长范围内扫描(见图1，图2)。

图1 齐墩果酸对照品图

图2 样品溶液图

由图分析可知齐墩果酸标准溶液和样品溶液均在545 nm处有最大吸收，因此测定波长选为545 nm。

2.3.2 标准曲线 分别精密吸取齐墩果酸标准溶液0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 mL，置具塞试管中，挥干溶剂，按照2.3.1加入显色剂，在545 nm处测定吸光度。以吸光度（A）为纵坐标，齐墩果酸的浓度（C）为横坐标，求得回归方程为y=0.0513x－0.0015，R2=0.9996，表明在2～22 µg﹒mL-1范围内线性关系良好。

2.3.3 稳定性试验 精密吸取样品溶液0.2mL，置具塞试管内，挥干溶剂，按照2.3.1加入显色剂，在545nm处每隔5min测定一次吸光度。结果表明，1h内的吸光度RSD为1.27%，表明样品溶液在1h内稳定性良好。

2.3.4 精密度试验 精密吸取样品溶液0.2 mL，置具塞试管内，挥干溶剂，按照“2.3.1”加入显色剂，在545 nm连续测定六次，记录吸光度。结果表明：RSD为0.117%，表明仪器精密度较好。

2.3.5 重复性试验 取6份1 g经石油醚脱脂后的干燥木瓜粉，精密称重，置具塞锥形瓶中，按照样品溶液制备方法提取精制。按照“2.3.1”加入显色剂在545 nm处测定吸光度，结果总皂苷平均含量为0.817%，RSD为1.98%，表明该方法重复性良好。

2.3.6 加样回收率试验 取已知含量样品粉末1 g，平行6份，精密称定，置具塞锥形瓶中，按照样品溶液制备方法提取精制。精密吸取六份样品溶液各0.1 mL，置具塞试管内，分别准确加入0.0226 mg﹒mL-1的齐墩果酸标准溶液1.5 mL（含齐墩果酸33.9 μg），挥干溶剂，按照“2.3.1”加入显色剂，在545 nm处测定吸光度，计算回收率，结果见下表。

表1 加样回收率实验

2.4 样品含量测定

取各炮制品粉末1 g，平行3份，按照样品溶液制备方法提取精制，再分别精密量取各样品溶液0.2 mL，加入具塞试管中，挥干溶剂，按照“2.3.1”加入显色剂，在545 nm处测定吸光度，计算各样品中总皂苷的含量，结果见下表。

表2 木瓜各炮制品中总皂苷含量

3 讨论

3.1 显色条件考察

香草醛-高氯酸是常用的三萜皂苷显色剂，显色灵敏度高，本实验对其显色反应的加热温度、加热时间、加入的显色剂比例等考察确定5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL、高氯酸0.8 mL、反应温度70 ℃、反应时间15 min作为木瓜总皂苷比色法测定的显色条件。

3.2 含量比较

从实验结果来看，酒炙品、炒黄品和炒焦品中总皂苷的含量均高于生品，且以酒炙品为最高，依次为炒焦品、炒黄品；而盐炙品中总皂苷的含量明显低于生品。在本实验中影响皂苷类成分溶出的炮制影响因素主要有温度、时间和辅料，根据结果进行分析，温度和时间会有利于皂苷类成分的溶出，辅料酒是良好的溶媒，也有利于皂苷类成分的溶出，因此酒炙品中总皂苷含量最高。关于盐炙品中皂苷含量为何较低，辅料食盐在溶出过程是否有影响还有待于进一步研究。

[1] 吴虹,魏伟,吴成义.木瓜的化学成分及药理活性的研究[J].安徽中医学院学报,2004,23(2):62.

[2] 戴敏,魏伟,汪倪萍.木瓜苷对大鼠佐剂性关节炎的治疗作用[J].中国药理学通报,2003,19(3):340.

[3] 吴虹,戴敏,魏伟,等.木瓜中不同提取物的药效学研究[J].中国中医药科技,2004,11(2):98.

[4] 胡居杰,汪电雷.木瓜炮制历史沿革[J].安徽中医学院学报,2000,19(6):42.

[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2010:402.