咳喘顺丸治疗慢性支气管炎的实验研究

甘海宁、黄萍、吴清和 、操红缨、郭起岳

慢性支气管炎是气管、支气管粘膜及其周围组织的慢性非特异性炎症。临床上以咳嗽、咳痰或伴有喘息以及反复发作的慢性过程为特征，其本质是气道的炎症。有资料表明，老年人慢性支气管炎的发病率可高达15%以上，是一种严重危害人民健康的常见病。其发病机制极为复杂，气道炎症及多种细胞、体液因子综合作用下发生的小气道平滑肌细胞增殖、纤维组织沉积等气道重构可能为其发病机制之一[1]。咳喘顺丸具有健脾燥湿、宣肺平喘、化痰止咳的功效，可用于慢性支气管炎、支气管哮喘、肺气肿所致的气喘胸闷、咳嗽痰多等症。本研究主要观察咳喘顺丸对慢性支气管炎模型小鼠的气管和肺组织的保护作用和抗炎作用。

1 材料

1.1 受试药物

咳喘顺丸，由广州陈李济药厂提供，批号:08136；麻杏止咳片，吉林本草堂制药有限公司产品，批号：20080202；地塞米松片，广东华南药业集团有限公司产品，批号：070803；阿司匹林肠溶片， Bayer Vital GmbH产品，批号：BTA7X22。

1.2 主要试剂、仪器

氯化钠注射液，太极集团西南药业有限公司生产，批号：08060010；二甲苯，天津市富宇精细化工有限公司，批号：080823；甲醛，天津市科盟化工工贸有限公司，批号：20080423；JA1203N型电子天平，上海精密仪器有限公司产品。

1.3 实验动物

SD系大鼠，SPF级，雄性，体重180～200g，由广东省医学实验动物中心提供（许可证号SCXK（粤）2003-0002粤监证字2008A020）；NIH系小鼠，SPF级，体重18～22g，分别由广东省医学实验动物中心、广州中医药大学实验动物中心提供（许可证号SCXK（粤）2003-0002粤监证字2008A022、SCXK（粤）2003-0020粤监证字2008A003）。

2 实验方法

2.1 对小鼠慢性支气管炎模型的作用

取健康NIH小鼠，雌雄各半，随机分为正常对照组、模型对照组、咳喘顺丸低、中、高剂量及麻杏止咳片组，每组10只。造模方法：烟熏法复制小鼠慢支模型，采用特制塑料箱，容积0.1 m3，塑料箱顶部留有直径1.5 cm通气孔，以塑料管连接一圆锥形玻璃罩，将烟丝置于玻璃罩内点燃，烟雾沿连接管进入塑料箱内，每个塑料箱放置小鼠10只。除正常对照组外，各组动物每天均以烟熏造模，前10天每天上、下午各烟熏1次，后10天每天烟熏1次，每次30 min，烟丝用量为5 g/次，连续烟熏30次。从造模开始各组动物灌胃给药（0.2 mL/10g），每天1次，对照组给予等容积蒸馏水，造模结束后继续给药7天。末次给药后24 h处死动物，取气管及肺，用10%福尔马林固定，石蜡包埋切片，HE常规染色，光镜观察。

2.2 抗炎作用实验

2.2.1 对大鼠棉球肉芽肿的影响 取雄性SD大鼠60只，随机分为正常对照组、麻杏止咳片组、地塞米松组、咳喘顺丸低、中、高剂量组，每组10只。试验时，10%水合氯醛麻醉，剪除大鼠胸部毛，碘酒消毒，切开胸部皮肤，从切口向两前肢腋下分别塞入25 mg无菌棉球各一个（棉球经高压灭菌，并以青霉素和链霉素混合液浸泡后植入），缝合皮肤。术后第2天开始灌胃给药（10 mL﹒kg-1），1次/天，对照组给予等容积蒸馏水，连续7天，末次给药后24 h，颈椎脱臼处死大鼠，剥离棉球肉芽组织，90℃烘箱中干燥1 h，于电子天平精密称重（1/1000g），将称得的肉芽组织重量减去棉球原重即得肉芽肿净重量，计算肉芽肿系数。肉芽肿系数=肉芽肿净重（mg）/大鼠体重（g）×100%。

2.2.2 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响 取小鼠NIH 60只，随机分为正常对照组、咳喘顺丸低、中、高剂量组、麻杏止咳片组、阿司匹林组，每组10只。灌胃给药（0.2 mL/10g），每天1次，连续3天，对照组给予等量蒸馏水。末次给药后1 h，将二甲苯50 μL均匀涂于小鼠右耳两面，1 h后将小鼠颈椎脱臼处死，用8 mm打孔器分别在左、右耳同一部位打下圆耳片，称重，以左、右耳重量之差作为耳肿胀度，比较各组差异。

2.2.3 对大鼠蛋清性足肿胀的影响 取SD大鼠60只，雄性，随机分为对照组、咳喘顺丸低、中、高剂量组、麻杏止咳片组、阿司匹林组，每组10只。每天灌胃给药（1mL/100g）1次，连续3天，对照组给予等容积蒸馏水。试验前每鼠左后足踝关节处用记号笔作一清晰横线，排水法测鼠足正常体积作为基础值，末次给药1 h后每鼠左后足跖皮下注射鲜鸡蛋清0.05 mL，测量致炎后1、2、3、4 h的足肿容积，减去基础值，作为足肿胀度，比较各组间差异。

2.3 统计方法

所有实验数据采用统计软件SPSS13.0进行统计处理。

3 实验结果

3.1 对小鼠慢性支气管炎模型的作用

3.1.1 对小鼠慢性支气管炎模型气管的作用 正常对照组：气管粘膜表面为假复层纤毛柱状上皮，上皮完整，细胞表面可见纤毛，杯状细胞较少。粘膜下层为疏松结缔组织，偶见散在淋巴细胞。（图1-A、B）

模型对照组：气管表面粘膜出现细胞脱落，部分细胞表面纤毛倒伏或脱落，粘膜下层较多淋巴细胞浸润。（图1-C、D）

低剂量组、中剂量组、高剂量组、阳性组（麻杏止咳片）：镜下所见相似，气管粘膜上皮基本完整，为假复层纤毛柱状上皮，细胞表面可见纤毛，偶见杯状细胞，粘膜下层偶见散在淋巴细胞。（图2-A、B、C、D）

实测距离采用商用精度为1 mm的激光测距仪定标，图7(a)为实际采样到的波形，前一个为激光发射波形，后一个为接收回波波形，饱和度为500%.图7 (b)中传统形心算法、窗宽自适应形心修正算法的误差频率分布分别为-3.3～-2.4 ns、0～0.7 ns，窗宽自适应形心修正算法精度有较大提升，但由于实测波形的微变形导致误差范围偏移.在饱和度50%～1 000%下计算窗宽自适应形心修正算法误差平均值Ec，并基于实测波形对偏移进行修正，即

3.1.2 对小鼠慢性支气管炎模型肺脏的作用 正常对照组：肺组织结构正常，肺泡壁未见血管扩张充血，肺泡壁及肺泡腔内未见渗出液及炎细胞浸润。支气管上皮粘膜完整，细胞排列整齐，管腔内未见渗出物，管壁周围未见炎细胞浸润。（图3-A、B）

模型对照组：肺泡壁血管扩张充血，肺泡腔内未见渗出液及炎细胞浸润。支气管粘膜上皮完整，周围可见血管充血及淋巴细胞为主的炎细胞浸润。（图3-C、D）

低剂量组、中剂量组、高剂量组、阳性组（麻杏止咳片）：镜下所见相似，肺泡壁薄未见充血，肺泡腔清亮，无渗出物，支气管粘膜上皮完整，无细胞脱落及炎细胞浸润现象。（图4-A、B、C、D）

综上所述，咳喘顺丸对小鼠慢性支气管炎模型有治疗效果，对肺组织及支气管炎症性改变有改善作用，其疗效与实验所用阳性药物相似。

3.2 抗炎作用实验结果

3.2.1 对大鼠棉球肉芽肿的影响

表1 咳喘顺丸对大鼠棉球肉芽肿的影响（x±S ）

表1结果显示，与对照组比较，咳喘顺丸各剂量和麻杏止咳片对大鼠棉球肉芽肿均无明显影响（p＞0.05）；地塞米松可明显降低肉芽肿系数（p＜0.01）。

3.2.2 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响

表2 咳喘顺丸对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响（x±S ）

表2结果显示，咳喘顺丸中、高剂量均能够显著减轻二甲苯所致小鼠耳廓肿胀（p＜0.05～0.01）；麻杏止咳片和阿司匹林亦显著减轻二甲苯所致小鼠耳廓肿胀（p＜0.01）。

3.2.3 对大鼠蛋清性足肿胀的影响

表3 咳喘顺丸对大鼠蛋清性足肿胀的影响（x±S）

表3结果显示，与空白组比较，咳喘顺丸中、高剂量能够抑制大鼠致炎后第2 h的足肿胀（p＜0.05）；阿司匹林可抑制大鼠致炎后1、2、3h的足肿胀（p＜0.05～0.01）。

4 讨论

在传统中医的体系中并没有支气管炎的病名，根据其临床的表现主要属于“咳嗽”、“痰饮”、“气喘”等。中医认为，其病因病机主要为六淫之邪侵袭人体，卫表受扰、肺失肃降、气机失调、痰浊滋生，或嗜好烟酒、饮食肥甘、情志不遂等所致。有研究指出，慢性支气管炎急性发作期主要病机为痰浊/痰火阻肺，肺失宣发肃降，肺气上逆则咳嗽、喘促[2]。

慢性支气管炎是气管、支气管粘膜及其周围组织的慢性非特异性炎症，其病理特点为支气管腺体增生和粘膜分泌增多。采用烟熏法造模成功后绝大多数实验小鼠的气管以及各级支气管镜下可见不同程度的慢性炎细胞（包括淋巴细胞、浆细胞、单核细胞）和少数中性粒细胞浸润。粘膜上皮可见纤毛倒伏、粘连或脱落，杯状细胞明显增多，胞体增大。管腔内有较多的分泌物以及巨噬细胞，伴行各级气管的小血管周围亦可见明显的炎细胞浸润。肺泡间隔增宽，内有炎细胞浸润及毛细血管扩张、充血,肺边缘可见支气管扩张以及肺气肿[3]。由图1-C、D和图3-C、D显示，模型组小鼠的气管和肺部病理改变与文献报道相符，说明动物模型成功；与模型组相比，咳喘顺丸能有效地改善气管和肺部的病变，明显改善肺泡壁充血和渗出，减少炎细胞浸润。

研究表明，不少的炎症介质、炎症因子参与慢性支气管炎的的进程，如IL-8、IL-6、IL-4、TNF-α、SIgA、ICAM-1等[4～9]，引发炎症反应。咳喘顺丸能够显著减轻二甲苯所致小鼠耳廓肿胀和抑制大鼠蛋清致炎后的足肿胀，说明咳喘顺丸具有一定的抗炎作用。

咳喘顺丸由鱼腥草、茯苓、瓜蒌仁、苏子、半夏、陈皮、紫菀、冬花、杏仁等药物组成，主治痰湿蕴肺引起的咳嗽，喘息等病症，具有健脾燥湿，宣肺平喘，化痰止咳之功。本次实验从咳喘顺丸对慢性支气管炎小鼠模型的保护作用和对炎症的影响这两方面，初步探讨了咳喘顺丸治疗支气管炎的药理学基础。

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