五味草水提物与醇提物预处理对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用

王向军

郑州大学第二附属医院药剂科郑州450014

(2011-05-18收稿 责任编辑 徐春燕)

五味草(Corydalis taliensis Franch.)别名地锦苗(《救荒本草》)、金钩如意草(《滇南本草》)、水金钩如意(《昆明民间常用草药》)、断肠草(《贵州中草药名录》)、水黄连、大理紫堇(《全国中草药汇编》)和水如意(云南)等，为彝医习用药材，主要分布于四川、贵州和云南等地。五味草味苦，性寒，归肺、肝经，具有祛风、清热、止痛和清肝明目等作用［1］。《全国中草药汇编》中记载，其可治肝炎、痢疾、肠炎、风湿骨痛、肺热咳嗽、牙痛及急性结膜炎等。作者观察了五味草的醇提物和水提物预处理对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝损伤的保护作用，报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验药材的来源及处理 五味草购于昆明市金碧路圣爱中医馆。取全草粉碎，过80目筛，用10倍量、体积分数95%乙醇回流提取3 h，再加8倍量、体积分数95%乙醇回流提取3 h，重复1次，合并3次滤液回收，得醇提物;另取五味草全草粉碎，过80目筛，用10倍量的蒸馏水同上法提取得水提物。

1.2 实验动物、试剂与仪器 雄性昆明种小鼠，体质量(20±2)g，SPF级，许可证号:SYXK(豫)2007-0009，由郑州大学实验动物中心提供。适应性饲养1周后实验。CCl4(天津市光复科技发展有限公司，分析纯)，复方益肝灵片(吉林省博威药业有限公司，批号:20091004)，谷丙转氨酶(alanine aminotransferase，ALT)测定试剂盒、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase，AST)测定试剂盒、丙二醛(malondialdehyde，MDA)测定试剂盒、还原性谷胱甘肽(reduced glutathione hormone，GSH)测定试剂盒及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，山梨醇脱氢酶(sorbitol dehydrogenase，SDH)酶联免疫试剂盒购自上海逸峰生物科技有限公司。Sartorius BP 211 D型电子分析天平(北京赛多利斯仪器有限公司)，TG16-WS高速离心机(湖南赛特湘仪离心机仪器有限公司)，UV-2409型紫外分光光度计(日本岛津公司)，Olympus BX-50型显微镜，DQP-9010石蜡冷冻切片机(上海华岩仪器设备有限公司)，ZN17-2102A型全自动酶标仪(北京中诺远东科技有限公司)。

1.3 动物分组及处理 昆明种小鼠108只，采用随机数字表法分成9组，每组12只，分别为正常组(灌胃生理盐水)，模型组(灌胃生理盐水)，益肝灵组(益肝灵200 mg/kg)，五味草醇提物低、中、高剂量组(分别相当于生药1、2、4 g/kg)，五味草水提物低、中、高剂量组(分别相当于生药 1、2、4 g/kg)，均灌胃给药7 d，末次给药1 h后除正常组以外，各组小鼠按文献［2］方法腹腔注射体积分数 0.2%的CCl4橄榄油溶液10 mL/kg，禁食不禁水。20 h后眼静脉采血，常规离心后分离血清备用。同时迅速剖取肝脏，取小鼠肝左叶，－4℃下制备肝组织匀浆，备用。另取肝右叶行病理组织学检查。

1.4 病理组织学检查 将体积分数5%甲醛溶液固定的肝组织石蜡包埋、切片，HE染色，光镜下观察病理组织学改变。

1.5 血清ALT、AST和SDH活性及肝组织匀浆中MDA、GSH和SOD水平测定 按所购试剂盒说明进行操作。

1.6 统计学处理 采用SPSS 13.0进行分析，应用单因素方差分析和LSD-t检验比较各组血清ALT、AST和 SDH活性及肝组织匀浆中 GSH、MDA和SOD水平的差异，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 各组小鼠肝组织病理观察 光镜下可见，正常组肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列，细胞核明显，结构正常;模型组小鼠肝窦及中央静脉明显扩张，肝细胞明显坏死，胞质连成一片，几乎看不到细胞膜，周围肝细胞发生不同程度的气球样变及嗜酸性变，大量炎性细胞浸润;五味草醇提物高剂量组相对模型组肝细胞稍有改善，而五味草水提物高剂量组坏死细胞已部分修复，中央静脉周围只有少量的炎性细胞(图1)。

图1 各组小鼠肝组织病理变化(HE，×200)A:正常组;B:模型组;C:益肝灵组;D、E、F:分别为五味草醇提物低、中、高剂量组;G、H、I:分别为五味草水提物低、中、高剂量组。

2.2 各组小鼠血清ALT、AST和SDH活性比较见表1。

2.3 各组小鼠肝组织匀浆中GSH、MDA和SOD水平比较 见表2。

表1 各组小鼠血清ALT、AST和SDH活性比较(n=12) IU/L

表2 各组小鼠肝组织匀浆中GSH、MDA和SOD水平比较(n=12)

3 讨论

肝脏氧化损伤是一种非常常见和严重的损伤，可加重机体的衰老和病变。目前，市场上有许多抗肝脏氧化损伤的产品，但是大多数都有不易提取获得、纯度不高、有效成分不明确、价格高等缺点，给应用带来了很大的困难。开发一种来源广、纯度高、成分明确、效果好、安全的抗肝脏氧化损伤的产品非常迫切且具有重大的意义。

现有研究表明，在肝细胞的病变过程中，自由基、酶以及脂质过氧化反应等均发挥重要的作用。CCl4致小鼠肝损伤的机制［3］为:CCl4在肝内经微粒体细胞色素分解活化，形成三氯甲基自由基和氯自由基，导致肝微粒体的脂质过氧化。三氯甲基自由基通过破坏肝细胞及其内膜机构，损坏或杀死肝细胞，致使胞质中的酶如ALT、AST等溢至血中。因此，血清中ALT和AST活性可敏感地反映肝脏损害的程度。另有文献［4］报道，血清SDH的活性增高与肝病发病的特异性高，可作为肝功能检测的特异性指标。

该研究结果显示，中、高剂量五味草水提物及高剂量五味草醇提物预处理可减轻CCl4所致的小鼠肝损伤，显著降低 CCl4引起的血清 ALT、AST和SDH升高，降低损伤肝组织中MDA水平，升高GSH和SOD水平，显著改善肝组织病理损伤，且以高剂量五味草水提物为佳。据此推测，五味草抗急性肝损伤作用可能与其清除自由基相关，具体作用机制有待于进一步研究。目前对五味草的研究还很少，应对其做进一步研究，以找到其明确的活性部位和单体。

［1］中华本草编委会.中华本草·第三卷［M］.上海:上海科学技术出版社，1999:641

［2］娄猛猛，李国玉，王航宇，等.四氯化碳致小鼠急性肝损伤模型的研究［J］.农垦医学，2010，32(3):196

［3］戴志强，俞月桂，袁幸菊，等.氧代赖氨酸抗四氯化碳所致小鼠肝细胞损坏的超微结构观察［J］.中国药理学和毒理学杂志，1994，8(2):139

［4］黄伏生，周自刚，彭剑虹，等.一种特异性肝功能检测指标的研究［J］.中国实验诊断学，2004，8(4):379