p53、C-erbB-2、VEGF-C和 nm23在乳腺癌中的表达及临床意义

刘 健，陶雅君，陈英杰，杨茹虹

(大连大学医学院病理学教研室，辽宁大连 116622)

p53、C-erbB-2、VEGF-C和 nm23在乳腺癌中的表达及临床意义

刘 健，陶雅君，陈英杰，杨茹虹

(大连大学医学院病理学教研室，辽宁大连 116622)

［目的］探讨p53、C-erbB-2、VEGF-C和 nm23在乳腺癌中的表达及临床意义。［方法］应用免疫组化SP法检测100例乳腺癌组织及其癌旁正常乳腺组织活性标本中p53、C-erbB-2、VEGF-C和 nm23蛋白表达情况。［结果］乳腺癌组织和癌旁正常组织中p53、C-erbB-2、VEGF-C和 nm23蛋白阳性表达率分别为86.0%和30.0%、76.7%和25.0%、80.0%和20.0%，30.0%和90.0%;p53和 C -erbB -2蛋白阳性表达在有无淋巴结转移、不同临床分期和癌分化程度上差异有显著性意义(P＜0.05);VEGF-C蛋白阳性表达在有无淋巴结转移、肿瘤大小和癌分化程度上差异有显著性意义(P＜0.05);nm23蛋白阳性表达在有无淋巴结转移上差异有显著性意义(P＜0.05)。［结论］p53、C-erbB-2和VEGF-C阳性表达是乳腺癌患者预后差的指标，nm23表达则提示乳腺癌患者预后较好，联合检测p53、C-erbB-2、VEGF-C和nm23有助于乳腺癌患者的治疗和预后判断。

乳腺癌;p53;C-erbB-2;VEGF-C;nm23

乳腺癌是妇女最常见的恶性肿瘤，占女性全部恶性肿瘤的22%［1］，且发病率和病死率呈逐年上升趋势，其死亡率与肿瘤侵袭和淋巴结转移密切相关［2］。目前主要采用手术、放疗和化疗及内分泌治疗，近年来靶向治疗成为研究热点。本研究采用免疫组化方法检测 p53，C-erbB-2，VEGF-C和nm23在乳腺癌中的表达及其与各临床病理学参数之间的关系，为乳腺癌患者预后判断及临床治疗提供依据和新的参考指标，也将为乳腺癌治疗提供新的靶点和生物标记物。

1 材料和方法

1.1 组织标本

100例经有经验的病理医师确诊为乳腺癌的活性标本取自大连大学附属医院，病人年龄中位数50岁，术前均未做任何放疗、化疗、内分泌和靶向治疗，诊断明确，临床资料完整，所有患者均行乳腺癌改良根治术，分别取癌组织和癌旁正常组织及相应淋巴结组织以备实验所需。按WHO乳腺癌临床TNM分期标准［2］:Ⅰ期25例，Ⅱ期35例，Ⅲ期40例;肿瘤直径＜2 cm者21例，≥2 cm者79例;有无腋窝淋巴结转移分别为53例和47例。所有标本经10%中性福尔马林固定后，石蜡包埋，4 μm厚连续切片，然后免疫组化染色。

1.2 免疫组织化学

单克隆抗体购于Cell Signaling公司，SP试剂盒与DAB显色液购于福州迈新公司。常规SP法按试剂盒说明书进行，一抗工作浓度为1∶50，用PBS代替一抗为阴性对照，用已知阳性切片做阳性对照。二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水，3%双氧水灭火内源性过氧化物酶，PBS缓冲液冲洗，微波炉进行抗原修复，正常山羊血清封闭，一抗4℃过夜，二抗、三抗各1 h，DAB显色7～10 min，复染核脱水透明，中性树胶封片，镜下观察。

1.3 结果判定

光学显微镜下，以细胞核或胞浆内出现棕色或黄色颗粒为阳性判断标准，免疫组化结果参考下面标准判定:随机选择10个高倍视野，选定1000个细胞，计数阳性细胞百分比，无细胞核阳性信号，0分;阳性细胞数1% ～25%，1分;阳性细胞数26% ～50%，2分;阳性细胞数51% ～75%，3分;阳性细胞数＞75%，4分。按着色细胞的染色强度分:浅黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分。两次评分乘积为每张切片最后得分:0～1分为阴性(–)，2分为弱阳性(±)，3～4分为阳性(+)，5～6分为中度阳性(++)，6分以上为强阳性(+++)。

1.4 统计学方法

运用SSPS 12.0统计软件数据包，采用χ2检验、Spearman秩相关分析进行统计学分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 p53和C-erbB-2蛋白表达与临床病理的关系

p53蛋白表达于乳腺癌细胞核，C-erbB-2蛋白表达于乳腺癌细胞膜或胞浆内。p53和C-erbB-2在乳腺癌细胞中的表达在患者年龄、肿瘤大小方面差异无显著性意义(P＞0.05)，但在有无腋窝淋巴结转移、不同临床分期和癌分化程度方面差异均有显著性意义(P ＜0.05)(表 1、2、5)。

表1 p53蛋白在乳腺癌组织、癌旁正常组织、有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中的表达Tab 1 The expressions of p53 protein in breast cancer tissues，adjacent normal breast tissues as well as breast cancer tissues with and without lymph node metastases

2.2 VEGF-C蛋白表达与临床病理的关系

VEGF-C阳性细胞为弥漫性细胞浆着色。其在乳腺癌细胞中的表达在患者年龄、不同临床分期方面差异无显著性意义(P＞0.05)，但在有无腋窝淋巴结转移、肿瘤大小和癌分化程度方面差异均有显著性意义(P ＜0.05)(表3、5)。

2.3 nm23蛋白表达与临床病理的关系

nm23表达于细胞质内，少数为细胞膜。其在乳腺癌细胞中的表达在患者年龄、肿瘤大小、不同临床分期和癌分化程度方面差异无显著性意义(P＞0.05)，但在有无腋窝淋巴结转移方面差异均有显著性意义(P ＜0.05)(表4、5)。

表2 C-erbB-2蛋白在乳腺癌组织、癌旁正常组织、有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中的表达Tab 2 The expressions of C-erbB-2 protein in breast cancer tissues，adjacent normal breast tissues as well as breast cancer tissues with and without lymph node metastases

表3 VEGF-C蛋白在乳腺癌组织、癌旁正常组织、有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中的表达Tab 3 The expressions of VEGF-C in breast cancer tissues，adjacent normal breast tissues as well as breast cancer tissues with and without lymph node metastases

表4 nm23蛋白在乳腺癌组织、癌旁正常组织、有淋巴结转移组和无淋巴结转移组中的表达Tab 4 The expressions of nm23 protein in breast cancer tissues，adjacent normal breast tissues as well as breast cancer tissues with and without lymph node metastases

3 讨 论

乳腺癌是来自乳腺导管或终末导管小叶单元上皮的一种雌激素依赖的恶性肿瘤，其发生、发展和转移是以多个原癌基因激活和抑癌基因失活为基础的、多步骤、多阶段的复杂过程［3］。传统判断乳腺癌预后的指标包括肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移等，将传统预测指标与分子预测指标相结合预测乳腺癌患者的生存率为国内学者所关注。

p53基因是一种重要的抑癌基因，编码53 kDa核磷酸蛋白，分野生型(Wtp53)和突变型(Mtp5)［4］。Wtp53 含量低、半衰期短，30 ～60 min，免疫组化无法检测其抗原成分。Mtp53在组织内半衰期长，含量高，为免疫组化检测提供了条件。Mtp53蛋白是目前研究最多的抑癌基因之一，它不仅失去了正常的抑癌作用，而且具有促进正常细胞恶性转化的作用，导致其它基因激活［4］。当Mtp53蛋白在细胞内积聚，则促进细胞转化和增殖，导致肿瘤发生。许多研究结果显示，p53蛋白表达与浸润型增生、肿瘤细胞的分化程度和淋巴结转移密切相关，浸润范围越广，分化越低的乳腺肿瘤，其p53基因水平越高，提示p53基因蛋白阳性乳腺癌患者预后不良，生存期短［5］。本研究结果显示，p53蛋白的差异表达与乳腺癌淋巴结转移、临床分期和癌分化程度相关，检测p53蛋白在乳腺癌中的表达对肿瘤恶性程度、肿瘤增殖能力以及预后判断具有重要指导意义和临床价值。

表5 p53，C-erbB-2，VEGF-C和nm23蛋白表达与临床病理的关系Tab 5 The associations of protein expression levels of p53，C-erbB-2，VEGF-C and nm23 with clinical pathology of breast cancer n(%)

C-erbB-2是生长因子受体类癌基因，编码分子量为185 kDa的跨膜糖蛋白，该蛋白具有酪氨酸激酶活性［6］。正常情况下，C-erbB-2处于非激活状态，参与细胞生长、分化调节，当受到某些致癌因素作用后，其结构或表达调控失常，以基因扩增的形式被激活，从而具有肿瘤转化的活性。研究表明，细胞凋亡是由C-erbB-2分子C-末端介导的，其通过抑制细胞凋亡而促进生瘤。C-erbB-2过表达不仅是乳腺癌发生的早期事件，且在进展、转移中也起重要作用，与肿瘤恶性程度高、生长快、预后差相关，目前它已被认为是与乳腺癌发生发展密切相关的基因［7］。本研究结果表明，C-erbB-2阳性表达在临床Ⅱ、Ⅲ期阳性表达率明显高于Ⅰ期，有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组。故C-erbB-2阳性表达往往提示患者复发率高，死亡率高，预后不良，可作为判断预后指标。

VEGF-C是血管内皮生长因子受体3(VEGFR-3)的配体，具有调节淋巴管生成以及脉管渗透性的作用［8］，与肿瘤淋巴结转移密切相关。VEGF-C与VEGFR-3结合后使VEGFR-3二聚体化，并激活酪氨酸激酶活性导致其自身磷酸化，进而激活下游MAPK信号转导通路，刺激淋巴管内皮细胞增殖，导致淋巴管密度增高，使肿瘤内和肿瘤周围形成新生淋巴管［9］。VEGF-C与VEGFR-3结合后同时也改变了原有淋巴管免疫防御功能和原有表达于淋巴管内皮细胞的粘附分子，使得淋巴管内皮细胞粘附因子更易于与肿瘤细胞发生作用，便于肿瘤细胞从淋巴管侵入和播散，而发生淋巴转移［9］。VEGF-C能够提高血管渗漏性，造成肿瘤组织间质液压增大，使连接淋巴管内皮细胞和周围结缔组织的开放连接增多、间隙增大，为肿瘤细胞进入淋巴管中转移起到关键作用［9］。乳腺癌细胞中VEGF-C过表达与淋巴管生成程度及淋巴结转移程度显著相关，其表达水平与预后密切相关，VEGF-C高表达患者的无复发生存期及总生存期较短［10］。本研究结果表明VEGF-C与淋巴结转移密切相关，且具有促进肿瘤细胞增殖作用。

nm23是典型的转移抑制基因，编码17 kDa的核内及胞浆蛋白，其基因产物NDPK参与通过影响微管聚合而调节细胞运动，并通过影响G蛋白的信号传递而发挥负向调节作用，从而抑制肿瘤转移。一般认为nm23在肿瘤细胞中的表达与转移潜能呈负相关，而与各临床病理学的关系报道不一，大部分研究表明该基因产物有预后价值，nm23蛋白高表达与预后好有关，而低表达往往预后差。本研究与之报道结果一致。

p53、C-erbB-2、VEGF-C及 nm23表达与乳腺癌转移相关，联合检测p53、C-erbB-2、VEGFC和nm23有助于乳腺癌患者的治疗和预后判断。

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［1］男润玲，尚培中，王铁山.乳腺癌易感基因BRCA1的研究进展［J］.实用医学杂志，2011，27(12):2284-2286.

［2］张银华，赵峰，杨丽丽.BRCA1和BRCA2在基底细胞样乳腺癌中的表达及意义［J］.实用医学杂志，2011，27(3):375-377.

［3］许立生，王水，黄中晶，等.CD44+/CD24-/low/ABCG2-乳腺癌干细胞与临床治疗及预后的关系［J］.实用医学杂志，2011，27(21):3877-3879.

［4］Lamb P，Grawford L.Characterization of the p53 gene［J］.Mol cell Biol，1986，6(5):1379 -1385.

［5］Bidard FC，Matthieu MC，Chollet P，et al.P53 status and efficacy of primary anthracyclines/alkylating agent-based regimen according to breast cancer molecular classes［J］.Ann Oncol，2008，19(7):1261 -1265.

［6］Chambers AF，Matrisian LM.Changing views of the roles of matrix metalloproteinase in matastasis［J］.J Nafi Cancer Znst，1997，89:1260 -1270.

［7］李宝江，朱志华，王军业，等.Ki67、p53、VEGF和cerbB-2在乳腺癌组织中表达的相关性研究及其临床意义［J］.癌症，2004，23(10):1176-1179.

［8］Kozlowski M，Naumnik W，Niklinski J，et al.Vascular endothelial growth factor C and D expression correlates with lymph node metastasis and poor prognosis in patients with reseccted esophageal cancer［J］.Neoplasma，2011，58(4):311-319.

［9］Takahashi S，Shinya T，Sugiyama A.Angiostatin inhibition of vascular endothelial cells［J］.Pharmacol Sci，2010，112(4):432-437.

［10］Nakamura Y，Yasuoka H，Tsujimoto M，et al.Clinicopathological significance of vascular endothelial growth factor C in breast carcinoma with long term follow up［J］.Mod Pathol，2003，16(4):309 -314.

Expression and clinical significance of p53，C-erbB-2，VEGF-C and nm23 in breast cancer

LIU Jian，TAO Ya-jun，CHEN Ying-jie，YANG Ru -hong
(Department of Pathology，Medical College of Dalian University，Dalian116622，China)

Abstract:［Objective］To study the expression and clinical significance of p53，C-erbB-2，VEGF-C and nm23 in breast cancer.［Methods］The expression of p53，C -erbB -2，VEGF -C and nm23 were examined in 100 cases of breast cancer and adjacent normal breast tissue without chemotherapy by using SP immunohistochemical technique.［Results］In 100 cases of breast cancer and adjacent normal breast tissue，the positive rate of p53，C-erbB-2，VEGF-C and nm23 were 86.0%and 30.0%，76.7%and 25.0%，80.0%and 20.0%，30.0%and 90.0%，respectively.There were significant difference in the positive rates of p53 and C-erbB-2 in different lymphatic metastasis，clinical stages and histological grade(P＜0.05);The expression of VEGF -C was significantly related with lymphatic metastasis，tumor sizes and histological grade(P＜0.05);It showed significant correlations of the positive rate of nm23 in lymphatic metastasis(P＜0.05).［Conclusion］The expression of p53，C -erbB -2，VEGF-C and nm23 were positively related to the metastasis and prognosis of breast cancer，the combined detection of p53，C-erbB-2，VEGF-C and nm23 is valuable to predicting prognosis and guiding therapy of breast cancer.

Key words:breast cancer;p53;C-erbB-2;VEGF-C;nm23

Q956

A

1671-7295(2012)05-0450-05

2012-05-20;

2012-09-22

刘 健(1973-)，女，辽宁大连人，讲师，博士。E-mail:jianliu0607@163.com