罗汉果叶不同溶剂提取物对DPPH自由基的清除作用研究Δ

杨艳芳，朱艳平，肖梦媛，陈清杰，吴和珍1，#（1.湖北中医药大学中药资源与中药复方教育部重点实验室，武汉 430065；.湖北中医药大学药学院，武汉 430065）

罗汉果Siraitia grosvenorii.为葫芦科多年生宿根草质藤本植物，盛产于广西，为药食两用植物。药用果实收载于2010年版《中国药典》（一部），具有清热润肺、利咽开音、润肠通便的功能，临床用于肺热燥咳，咽痛失音，肠燥便秘的治疗[1]。最近研究表明，罗汉果具有抗氧化、抗糖尿病和抗癌的功效[2，3]。为了挖掘罗汉果潜在的药用价值，探讨罗汉果发挥治疗作用的物质基础，本课题组前期已研究了罗汉果植株的茎、叶和果实的抗氧化活性，其中叶的抗氧化活性最佳[4]，因此继续对罗汉果叶抗氧化的物质基础进行了深入研究，采用二苯基苦基苯肼（DPPH）自由基体系法，测定罗汉果叶不同溶剂提取物对DPPH自由基的清除率。

1 仪器与材料

1.1 仪器

UV-2401型紫外-可见分光光度计（日本Madzu公司）；HH-2型显恒温水浴锅（常州澳华仪器有限公司）；RE-2000型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；SY-1000型超声提取机（北京弘祥隆生物技术有限公司）；BP211D型电子天平（德国赛多利斯公司）。

1.2 试药

罗汉果2010年6月采自广西龙胜县和平乡，经湖北中医药大学生药学教研室吴和珍教授鉴定为真品。DPPH（美国Sigma公司，批号：STBB 0510）；没食子酸（天津市科密欧化学试剂开发中心，批号：20100110）；抗坏血酸（湖南省娄底市湘大化工试剂有限公司，批号：20100422）；乙醇（上海振兴化工一厂，批号：200908304）；石油醚（批号：20090815）、乙酸乙酯（批号：20100607）均购自天津市永大化学试剂开发中心；正丁醇（国药集团化学试剂有限公司，批号：T20091124）；水为双蒸水。

2 方法与结果

2.1 提取物的制备

[4]，精密称取罗汉果叶粉末（过60目筛）10g，置于100mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，超声提取（功率：150W，频率：40KHz）30min，放冷，滤过。滤液减压回收乙醇至无醇味，加水混悬，得罗汉果叶提取物溶液。该溶液依次以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水4种提取物，挥干溶剂，称定浸膏重量，以乙醇为溶剂，依次配成不同浓度的罗汉果叶不同溶剂提取物溶液，贮藏，备用。配制DPPH溶液置于4℃冰箱贮藏，备用。并以乙醇为溶剂，将没食子酸和抗坏血酸配成不同浓度的溶液，测定其抗氧化能力。

2.2 DPPH溶液稳定性试验

在DPPH溶剂中加入罗汉果叶提取物溶液后，测定吸光度（A）与时间（t）关系。A值在最初20min内下降较快；在20～40min内，反应体系的A值变化缓慢；50min后A值基本保持不变。故测定时选择DPPH与罗汉果叶提取物反应时间为50min。样品与自由基DPPH反应时间曲线见图1。

图1 样品与自由基DPPH反应时间曲线Fig 1 Response time curves of sample with free radical DPPH

2.3 罗汉果叶不同溶剂提取物清除DPPH自由基能力的测定

采用DPPH自由基体系法对罗汉果叶不同溶剂提取物进行了测定，结果各溶剂提取物都具有一定的抗氧化作用。罗汉果叶不同溶剂提取物浓度与DPPH自由基的清除关系见图2。

图2 罗汉果叶不同溶剂提取物浓度与DPPH自由基的清除关系Fig 2Relation of the extracts of the leaf of S.grosvenorii with free radical DPPH scavenging

测定罗汉果叶石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水提取物的半数抑制浓度（IC50）值分别为 16.250、0.554、0.596、0.267mg·mL－1。可见，罗汉果叶不同溶剂提取物清除DPPH自由基能力的大小顺序为：水提取物＞乙酸乙酯提取物＞正丁醇提取物＞石油醚提取物。

2.4 抗氧化剂清除DPPH自由基能力的测定

抗坏血酸、没食子酸是常见的抗氧化剂，采用DPPH自由基体系法测定其抗氧化能力。抗坏血酸、没食子酸的IC50值分别为0.00223、0.00084mg（生药）·mL－1，没食子酸清除DPPH自由基能力大于抗坏血酸。抗氧化剂浓度与DPPH自由基的清除关系见图3。

2.5 罗汉果叶不同溶剂提取物与抗氧化剂对DPPH自由基清除作用的比较

罗汉果叶不同溶剂提取物清除DPPH自由基的能力与抗坏血酸、没食子酸比较，当水提取物浓度达到2mg·mL－1时，其清除自由基能力与抗坏血酸、没食子酸相当。罗汉果叶不同溶剂提取物与抗氧化剂对DPPH自由基的清除率见表1。

3 讨论

本研究测定了罗汉果叶不同溶剂提取物清除DPPH自由基的能力。结果表明，罗汉果叶石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水提取物的IC50值分别为16.250、0.554、0.596、0.267mg（生药）·mL－1，各提取物均具有抗氧化活性，其中水提取物的抗氧化活性最强；与没食子酸、抗坏血酸对DPPH自由基清除率比较，当罗汉果叶水提取物浓度达到2mg·mL－1时，其清除DPPH自由基能力与二者相当。本研究结果可为罗汉果的综合开发利用奠定理论基础。

参考文献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：197.

[2] 王 勤，覃洪含，王 巍，等.罗汉果药理研究进展[J].广西中医学院学报，2010，13（3）：75.

[3] 肖 刚，王 勤.罗汉果甜苷对小鼠实验性肝损伤保护作用的研究[J].中国药房，2008，19（3）：163.

[4] 吴和珍，朱艳平，杨艳芳，等.罗汉果植株不同器官的抗氧化活性[J].中国实验方剂学杂志，2011，17（4）：176.