冻疮药酒的药理作用研究

孙静，徐富培（1.成都市妇女儿童中心医院，成都610091；2.重庆医科大学附属第一医院，重庆400016）

冻疮在我国西北和西南地区比较常见，在冬季潮湿寒冷的环境下，防寒不够则易发生。常见于肢体末端和面部暴露的局部皮肤，常表现为局部红肿、溃疡、遇热痒痛难忍，一旦发生，常难治愈；随气温升高发生痒感，严重者伤及皮肤、肌肉，给工作和生活带来不便。笔者根据民间验方制备冻疮药酒，3年来，单用冻疮药酒共治愈188例不同部位的冻疮患者，取得满意疗效。为探明冻疮药酒药理作用，本研究选用高、低浓度进行药理学实验，为其临床应用提供理论依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

721型分光光度计（天津市光学仪器厂）。

1.2 试药

冻疮药酒（笔者自制）；吲哚美辛搽剂（黑龙江省佳木斯晨星制药厂，批号：20110530）；磷酸组胺（分析纯，中国科学院上海生物化学研究所，批号：8112104）；洁尔阴洗液（中外合资成都恩威世亨制药有限公司，批号：1109045）；阿司匹林（南京白敬宇制药有限公司，批号：110908）。

1.3 动物

昆明种小鼠120只，♀♂兼用，体重18～22g；Wistar大鼠40只，♀♂兼用，体重200～250g；豚鼠40只，♀♂兼用，体重200～280g，均由重庆医科大学实验动物中心提供（动物使用许可证号：SCXK（渝）2002-0001）。

2 方法与结果

2.1 冻疮药酒的制备

按处方中的药物比例，取适量红花、制川乌、制草乌、紫草4味中药置于适宜容器中，加适量白酒（含乙醇55%～60%），常温下密闭浸渍，期间每天搅拌数次，约10d后滤过，滤液加适量冰片，溶解，搅匀，分装，即得冻疮药酒。该制剂仅供局部敷患处使用，严禁口服。笔者分别制备了高、低浓度冻疮药酒，每1mL含原药材分别为0.3（30%）、0.15g（15%）。

2.2 抗炎作用（二甲苯小鼠耳廓肿胀法）

[1，2]，取小鼠40只，随机分为模型（生理盐水）、吲哚美辛（1.5%）和冻疮药酒高、低浓度（30%、15%）组。将二甲苯0.05mL涂于各组小鼠左耳前后两面，右耳不涂药作为对照。致炎后30min在致炎耳处连续2次分别涂相应药物，每次间隔30min。于4h后将小鼠颈椎脱臼处死，剪下左右耳，用打孔器取双耳同等部位耳片，称重。左右耳重量之差为肿胀度，分组统计，组间行t检验，按下列公式计算受试药肿胀抑制率：肿胀抑制率＝（模型组平均肿胀度－给药组平均肿胀度）/模型组平均肿胀度×100%。

与模型组比较，冻疮药酒高、低浓度组肿胀抑制率显著增高（P＜0.01），且呈剂量依赖性。结果表明，冻疮药酒能显降低小鼠耳廓肿胀度。冻疮药酒的抗炎作用见表1。

表1 冻疮药酒的抗炎作用（±s）Tab 1 Anti-inflammation effects of Chilblain medicinal liquo（r±s）

表1 冻疮药酒的抗炎作用（±s）Tab 1 Anti-inflammation effects of Chilblain medicinal liquo（r±s）

与模型组比较：＊P＜0.01vs.model group：＊P＜0.01

n组别模型组吲哚美辛组冻疮药酒高浓度组冻疮药酒低浓度组药物浓度/%-1.5301510101010肿胀度/mg 12.9±2.27.7±1.6＊7.9±3.2＊8.8±2.8＊肿胀抑制率/%-40.3＊38.8＊31.8＊

2.3 消肿作用

参考文献[3]，取大鼠40只，分组与药物浓度同“2.1”项。各组大鼠于实验前按毛细血管放大测量法测定大鼠左后脚趾正常体积（cm3）。实验当天，各组大鼠分别于左后脚两面涂相应药物0.1mL/只脚，涂药2次，间隔1h；末次给药后往左后脚注射蛋清0.1mL/只脚。各组大鼠分别于注射蛋清后1、2、4、6h测定左后脚体积，各大鼠注射蛋清前后脚趾体积差值为肿胀度，分组统计，组间行t检验。与模型组比较，冻疮药酒高、低浓度组肿胀度显著减少（P＜0.01）。结果表明，冻疮药酒有明显的消肿作用。冻疮药酒的消肿作用见表2。

表2 冻疮药酒的消肿作用（±s）Tab 2Effects of Chilblain medicinal liquo（r±s）

表2 冻疮药酒的消肿作用（±s）Tab 2Effects of Chilblain medicinal liquo（r±s）

与模型组比较：＊P＜0.01vs.model group：＊P＜0.01

组别模型组吲哚美辛组冻疮药酒高浓度组冻疮药酒低浓度组浓度/%-1.53015 n 致炎前脚趾体积/cm3致炎后不同时间脚趾肿胀度/cm3 101010101.59±0.401.43±0.121.64±0.141.62±0.181h 0.76±0.190.39±0.22＊0.38±0.22＊0.39±0.19＊2h 0.61±0.110.31±0.24＊0.29±0.18＊0.31±0.26＊4h 0.45±0.160.27±0.19＊0.22±0.13＊0.25±0.10＊6h 0.34±0.130.18±0.14＊0.14±0.11＊0.15±0.09＊

2.4 止痒作用

取豚鼠40只，随机分为模型（生理盐水）、洁尔阴（100%）和冻疮药酒高、低浓度（30%、15%）组。实验前24h将各组豚鼠左后脚背剃毛，然后涂药1次，0.2mL/只脚。实验当天用砂纸磨擦脚背剃毛处，直至脚背皮肤有轻度渗血，再涂药2次，每次间隔1h。于末次给药后15min将0.01%磷酸组胺涂于擦伤的脚背表面，容量50µL/只脚，以后每3min依次涂0.02%、0.03%......递增浓度，每次容量均为50µL/只脚，直至豚鼠回头舔右脚为止，此时累加所给磷酸组胺总量为致痒阈。分组统计，组间行t检验。与模型组比较，冻疮药酒高、低浓度组止痒阈显著上升（P＜0.01）。结果表明，冻疮药酒有明显的止痒作用。冻疮药酒的止痒作用见表3。

表3 冻疮药酒的止痒作用（±s）Tab 3 Relieving itching effects of Chilblain medicinal liquor（±s）

表3 冻疮药酒的止痒作用（±s）Tab 3 Relieving itching effects of Chilblain medicinal liquor（±s）

与模型组比较：＊P＜0.01vs.model group：＊P＜0.01

n 组别模型组洁尔阴组冻疮药酒高浓度组冻疮药酒低浓度组0.910030151010101031.2±26.3178.3±81.4＊235.5±27.4＊90.8±37.6＊药物浓度/%止痒阈/μg

2.5 镇痛作用（热板法）

参考文献[1]，取♀小鼠置于金属热板（55℃），以舔后脚为疼痛反应指标，共测2次，每次不超过30s舔脚者为入选实验动物，小鼠舔脚平均时间为给药前痛阈值。选取合格小鼠40只，随机分为4组，即模型（生理盐水）、阿司匹林（1.1%，30mL·kg－1）和冻疮药酒高、低浓度（30%、15%）组。其中阿司匹林为阳性药物对照，按人体动物等效剂量推算[3]，应为1.1%浓度，30mL·kg－1。阿司匹林ig给药，而冻疮药酒组仍按后脚涂药，共给药3次，每次给药间隔1h，末次给药0.5h后开始测定痛阈值，分组进行统计，与给药前痛阈值比较，行t检验。与模型组比较，冻疮药酒高、低浓度组给药前后痛阈值差显著增加（P＜0.01）。结果表明，冻疮药酒有明显的镇痛作用。冻疮药酒的镇痛作用见表4。

表4 冻疮药酒的镇痛作用（±s）Tab 4 Analgesic effect of Chilblain medicinal liquor on mice（±s）

表4 冻疮药酒的镇痛作用（±s）Tab 4 Analgesic effect of Chilblain medicinal liquor on mice（±s）

与模型组比较：＊P＜0.01vs.model group：＊P＜0.01

给药前后痛阈值差/s 1.26±0.2637.40±3.88＊8.68±2.32＊5.47±2.26＊组别模型组阿司匹林组冻疮药酒高浓度组冻疮药酒低浓度组n药物浓度/%0.91.1301510101010

2.6 抑制毛细血管通透性作用

取小鼠40只，分组与给药浓度同“2.4”项，各组给予相应药物涂于小鼠腹部皮肤，0.5mL/只，共3次，给药时间间隔1h。于末次给药15min后经尾iv 1%伊文思蓝生理盐水0.05mL·10g－1，给药后30min处死小鼠，用生理盐水反复冲洗腹腔至6mL，收集于烧杯，加0.1moL·L－1的NaOH 0.2mL，混匀，离心300r·min－1，590nm波长处比色测定各组小鼠吸光度（A）值。与模型组比较，冻疮药酒高、低浓度组A值显著下降（P＜0.01）。结果表明，冻疮药酒能明显抑制血管的通透性。冻疮药酒抑制小鼠腹腔毛细血管通透性作用见表5。

3 讨论

冻疮的发病机制不明，可能与皮肤血管对寒冷过敏有关。冻疮患者出现较粗的皮肤小动脉持久性痉挛收缩，较小的表浅血管持久性扩张产生血瘀，局部组织缺血缺氧，导致组织细胞受损[3]。目前对冻疮多采用扩血管药物、抗组胺药物或活血化瘀等药物治疗，局部外用，以改善微循环，待气温回升而愈。

表5 冻疮药酒抑制小鼠腹腔毛细血管通透性作用（±s）Tab 5 Inhibition effects of Chilblain medicinal liquor on permeability of abdominal capillary in mic（e±s）

表5 冻疮药酒抑制小鼠腹腔毛细血管通透性作用（±s）Tab 5 Inhibition effects of Chilblain medicinal liquor on permeability of abdominal capillary in mic（e±s）

与模型组比较：＊P＜0.01vs.model group：＊P＜0.01

n组别模型组洁尔阴组冻疮药酒高浓度组冻疮药酒低浓度组0.91003015101010100.24±0.030.15±0.06＊0.12±0.02＊0.14±0.04＊药物浓度/%A值

冻疮药酒具有活血、止痛、化瘀、消炎作用，按西医的说法是具有改善局部循环和组织缺血缺氧。方中紫草活血化瘀；冰片防腐生肌；红花中的红花苷和红花素有活血通经、祛瘀止痛，消散疮疡之效；制川乌、制草乌止痛消炎。本研究结果表明，高、低浓度冻疮药酒可消除模型小鼠耳廓肿胀度，消除大鼠脚趾肿胀度，提高磷酸组胺止痒阈，提高模型小鼠给药前后痛阈值差，抗炎消肿、改善血管通透性作用明显。

综上所述，冻疮药酒配制简单，价格低廉，能抗炎止痛、活血化瘀，值得试用。

参考文献

[1] 徐叔云，卞如谦，陈 修，等.药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，2002：916、885.

[2] 周远大，江 舟，何海霞，等.野马追对大、小鼠实验性高脂血症的防治作用[J].中国药房，2007，18（3）：178.

[3] 赵 辨.临床皮肤病学[M].第2版.南京：江苏科学技术出版社，1990：479.