HPLC法测定厄贝沙坦胶囊中厄贝沙坦的含量

益 磊 施志顺 周志美 李 军 史学礼 王雨艨

安徽省亳州市食品药品检验所，安徽亳州 236800

厄贝沙坦为血管紧张素Ⅱ（AngiotensinⅡ，AngⅡ）受体抑制剂，能抑制AngI转化为AngⅡ，能特异性地拮抗血管紧张素转换酶受体（AT1），对AT1的拮抗作用大于AT28 500倍，通过选择性地阻断AngⅡ与AT1受体的结合，抑制血管收缩和醛固酮的释放，产生降压作用。

厄贝沙坦胶囊为已有国家药品标准的药品，其标准收载于国家药品标准《新药转正标准》第62册，标准号为WS1-（X-026）-2005Z。为了使本产品质量达到可控，参照国家药品标准WS1-（X-026）-2005Z，对本品的含量进行了研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪（苏州岛津公司）；岛津SPD-10Avp紫外检测器（苏州岛津公司）；AB135-S电子天平（d=0.01 mg）（METTLER TOLEDO公 司）；Kromasil C18柱（150 mm×4.6 mm， 5μm，日本岛津公司）。

1.2 试药

厄贝沙坦对照品 （批号：100607-200301），由中国药品生物制品检定所提供；厄贝沙坦胶囊（批号：110901、110902、110903）；乙腈HPLC（美国TEDIA公司）；磷酸 （汕头西陇化工厂）；三乙胺（海金山亭新化工试剂厂）

2 方法与结果

色谱条件：色谱柱shimpack VP-ODS（150 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：磷酸溶液（取85%磷酸5.5 mL，加水至950 mL，以三乙胺调节pH至3.2）-乙腈（62∶38）；检测波长： 245 nm；进样量：20 μL ；流速：1.0 mL/min。

2.1 阴性干扰试验

取处方量的辅料，按制备工艺操作制成模拟胶囊。精密称取上述空白辅料适量，按含量测定方法配制供测液。精密量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，阴性不干扰本法的测定。见图1 ～ 3。

2.2 系统适用性试验

取供试品溶液，连续注样10次，分别记录每次主峰面积、保留时间、拖尾因子、理论板数。由系统适用性图谱可看出,本品理论板数按厄贝沙坦计算为7 371.236，拖尾因子为1.027。符合中国药典2010年版二部附录V D的要求，系统评价图谱见图4。

图1 辅料干扰性试验—阴性图谱

图2 辅料干扰性—样品图谱

图3 辅料干扰性—对照图谱

图4 系统适应性—系统评价图谱

2.3 标准曲线线性范围的考察

精密称得厄贝沙坦工作对照品25.05 mg（标定纯度为100.6%），置50 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，精密量取上述溶液 1、2、3、4、5、6、7 mL，分别置 10 mL 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，取此溶液，照正文含量测定项下色谱条件与方法注样，各浓度注样2针，取峰面积平均值。以峰面积为纵坐标，浓度（mg/mL）为横坐标，分别进行线性回归。计算回归方程、相关系数（R）、截距与标示浓度响应值百分比（B/Y%）结果见表1，线性结果见图5。

回归方程为A=259 675 62.358C-42853.143 （R=0.999 96，n=7）。且截距与限度浓度响应值的比值为-0.83%，曲线通过原点。结果表明，在0.050 4～0.352 8 mg/mL浓度范围内，本法的线性良好。

2.4 回收率

图5 厄贝沙坦含量测定线性图

表1 厄贝沙坦含量测定线性试验结果

取厄贝沙坦对照品8、10、12 mg，各3份，精密称定，分别置50 mL量瓶中，加入处方比例的阴性样品，加流动相适量，振摇使厄贝沙坦溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取厄贝沙坦对照品10 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。同法测定。按外标法以峰面积计算本法的回收率。结果表明，本法测定厄贝沙坦含量的回收率高，9份样品平均回收率均值在98.0～102.0%，RSD＜2.0%。见表2。

表2 厄贝沙坦含量测定方法回收率试验结果

2.5 重复性

取同批均质样品（批号：110903）装量差异项下的内容物，研细，精密称取适量（约相当于厄贝沙坦10 mg），共10份，分别置50 mL量瓶中，加流动相适量，振摇使厄贝沙坦溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取厄贝沙坦对照品10 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。同法测定。按外标法以峰面积计算供试品中厄贝沙坦的含量。以含量计算相对标准偏差RSD。结果表明，本品测定厄贝沙坦胶囊含量方法的重复性较好。见表3。

表3 厄贝沙坦含量测定重复性试验

2.6 中间精密度

取同批均质样品10份，在另一色谱系统上测定其含量，考察本法的中间精密度。结果表明，本法测定厄贝沙坦含量中间精密度良好。见表4。

表4 含量测定方法验证—中间精密度数据

2.7 溶液稳定性试验

取重复性项下的同一对照溶液与供试品溶液分别于2、4、6、24、48、72、96 h 各注样 20μL，计算 RSD 值，考察日内与日间溶液的稳定性。结果表明，本法测定厄贝沙坦含量，对照溶液与供试品溶液的日内与日间均较稳定。见表5。

表5 含量测定方法验证—溶液稳定性

3 含量测定

3.1 色谱条件

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以磷酸溶液（取85%磷酸5.5 mL，加水至950 mL，以三乙胺调节pH至3.2）-乙腈（62∶38）为流动相，检测波长为245 nm。理论板数按厄贝沙坦峰计算应不低于2 000。

3.2 测定法

取装量差异项下的内容物，研细，精密称取适量（约相当于厄贝沙坦10 mg），置50 mL量瓶中，加流动相适量，振摇使厄贝沙坦溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取厄贝沙坦对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

取本品3批样品，照上述方法进行试验。结果表明，110901、110902及110903三批样品的含量符合要求，分别为99.5%、99.7%和100.1%。

4 讨论

该项参照国家药品标准WS1-（X-026）-2005Z厄贝沙坦胶囊[含量测定]项制定。并进行了方法学验证，结果表明：本法专属性良好，阴性不干扰检测，系统适用性良好，厄贝沙坦在0.050 4～0.352 8 mg/mL的浓度范围内的线性相关系数大于0.999，且截距与限度浓度响应值的比值小于2.0%，曲线通过原点，可使用外标一点法进行计算。回归方程如下：A=25 967 562.358C-42 853.143 （r=0.999 96，n=7）。回收率为99.7%，重复性、中间精密度良好。供试品与对照品溶液在日内与日间均较稳定。故本法可用于本品的厄贝沙坦的含量测定。

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