自家苗治疗连城白鸭浆膜炎的效果研究

罗小华

（福建省连城县畜牧兽医水产局，福建 连成 366200）

本文用当地鸭场分离的鸭疫里默氏菌株制备自家苗，对防治鸭传染性浆膜炎的效果进行了探讨和研究，旨在为实际生产作指导。

1 细菌分离与鉴定

1.1 分离培养 选择刚死亡且具有典型鸭传染性浆膜炎病变的病死鸭，无菌采集肝组织，将采集的病料剁碎，除去结缔组织和筋膜后称重，加适量生理盐水，用消毒好的组织匀浆机绞3～5min至匀浆状。由于捣碎机高速运转，温度上升很快，尤其是夏天温度高时，容器中的病料很容易变质而破坏病原的免疫原性，故夏天制苗时，在捣碎机中加入病料和生理盐水时要用冷却水冷却。对于新采取的病料需反复冻融三次，将解冻的病料与生理盐水按1kg：3500～4000mL的比例进行稀释，再用双层无菌医用纱布过滤，然后将滤液先后过一次八层和十二层的纱布。再取样分别接种于普通培养基、马丁肉汤、麦康凯琼脂平板、巧克力琼脂平板，分别作纯培养。

1.2 形态观察 将分离的10株细菌在马丁肉汤中（37℃）作、24h纯培养，再分别用革兰氏染色和瑞氏染色进行鉴定。

1.3 生化试验 分离菌经纯化后，用其48h马丁肉汤培养物进行生化反应测定，置37℃烛缸中观察15 d。

1.4 血清学鉴定 将分离细菌接种在葡萄糖淀粉琼脂平皿上培养24h，然后将每个平皿上的细菌悬浮于8.5%氯化钠（质量百分比）、0.02mol/L磷酸盐、0.3%福尔马林（体积百分比）溶液中（pH=7.0，1mL），再在100℃水浴锅上加热1 h，然后1 500 r/min离心30min，取上清液，与1型鸭疫里默氏杆菌标准阳性血清进行平板凝集试验和琼脂扩散试验。

1.5 药敏试验 在巧克力琼脂平板上采用药敏片扩散法进行。在含5%～10%CO2的环境中37℃下培养24 h观察，然后对照标准判断结果。

1.6 动物发病实验 取10只健康雏鸭作动物实验，皮下注射培养菌液后观察雏鸭有无发病症状。

2 分离鉴定结果

2.1 分离培养 将病料接种于巧克力琼脂平板上，经37℃厌氧培养48h后，长出了灰白色、半透明、微凸起的圆形菌落；在马丁肉汤中呈现均匀混浊状态；置于烛缸中的麦康凯琼脂平板上未见有细菌生长；在37℃恒温培养的麦康凯平板上培养3d后，亦无细菌生长；普通琼脂平板上同样无细菌生长。

2.2 形态观察 分离的10株细菌经革兰氏染色镜检，均为革兰氏阴性小杆菌；经瑞氏染色法染色镜检，可见7株细菌呈两极浓染，符合鸭疫里默氏杆菌的染色特性。

2.3 生化试验 糖发酵试验：对甘露醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、乳糖均不发酵；不还原硝酸盐，MR试验、VP试验均为阴性；过氧化氢酶试验呈阳性。以上反应均符合鸭疫里默氏杆菌的生化特性。

2.4 血清学鉴定 凝集试验和琼脂扩散试验证实，与1型鸭疫里默氏杆菌标准阳性血清发生阳性反应，说明7株瑞氏染色阳性细菌株均为鸭疫里默氏杆菌血清1型。

2.5 药敏试验 分离菌对氟甲砜霉素、甲哌利福霉素、氨苄青霉素、先锋霉素、林可霉素高度敏感；对青霉素、呋喃唑酮和氯霉素中高度敏感；对庆大霉素、新霉素、链霉素、卡那霉素、红霉素不敏感。

2.6 动物发病实验 试验鸭接种病料后48h，雏鸭相继发病，眼、鼻流出浆液性分泌物。粪便稀薄呈绿色，嗜眠、缩颈或嘴抵地面，腿软弱，不愿走动；濒死前出现神经症状，如痉挛、摇头、点头，背脖和两腿伸张呈角弓反张。剖检病死鸭，最明显的病变是心包腔内及肝表面有一层纤维素性渗出物；心外膜、气囊壁混浊增厚，腹腔积水，有的脾脏肿大，表面有灰白色斑点。取典型病死鸭病料用瑞氏法染色，发现菌体两端浓染，呈两极染色特性。

通过以上分离鉴定，确定从可疑鸭疫里默氏杆菌病鸭中分离的菌株为鸭疫里默氏杆菌。

3 自家苗的制备与检测

3.1 增菌培养 将纯培养物接种于马丁肉汤培养液，37℃振摇培养24h，取少量菌液作细菌计数，使浓度达1010个/mL。

3.2 甲醛灭活 加入体积百分比为0.4%的甲醛溶液，置37℃下灭活48h，灭活期间，每4～6h摇动一次，摇动时间约为半小时。灭活完毕后，按1500 IU/mL比例加入双抗（青霉素和链霉素），还要加一定量的黄芪多糖，以增加抗体的生成。摇匀后进行无菌分装，置4℃下保存待用。

3.3 无菌检验 取灭活后的菌液接种于普通营养琼脂平板上，37℃培养24h，如果无任何细菌生长说明甲醛灭活完全，无菌检验合格；反之则自家苗制备失败。

3.4 安全性检验 取10只健康雏鸭，颈部皮下注射1mL菌液，连续观察14 d，如果雏鸭无外观症状，也无病理变化，则表示自家苗安全。

3.5 效力检验 取20只健康雏鸭，其中只对10只雏鸭注射疫苗：将疫苗回温且彻底摇匀后于颈部皮下或肌肉注射（0.2mL/只），另外10只作为对照组。注射前要对注射针具彻底消毒，注射时要勤换针头。注射完疫苗后，有的鸭群略显安静，采食饮水略有下降，这均属正常的机体反应，一般1～2d即可完全恢复。14d后对两组雏鸭分别注射未灭活的鸭疫里默氏杆菌，然后进行细致观察。分开饲养，以免交叉感染。共分4个批次进行效力检验试验，每次均分为试验组和对照组两组，免疫程序和剂量均相同。

4 自家苗的制备与检测结果

4.1 纯培养物作增菌培养 在马丁肉汤培养液中经37℃振摇培养24 h后，取少量菌液作细菌计数，结果细菌浓度达了3.2×1010个/mL。

4.2 无菌检验 经普通营养琼脂平板37℃培养24 h后，无任何细菌生长，说明甲醛灭活完全，无菌检验合格。

4.3 安全性检验 连续观察14d后，雏鸭无外观症状，剖检也未发现病理变化，说明粗制疫苗菌液是安全的。

4.4 效力检验 经观察，对照组雏鸭过夜后即有发病者出现，病初表现为眼流浆液性或黏性分泌物，常使眼周围羽毛粘连或脱落；鼻孔流出浆液或黏液性分泌物，有时分泌物干涸，堵塞鼻孔；有轻度咳嗽和打喷嚏；粪便稀薄呈绿色或黄绿色；嗜睡，缩颈或嘴抵地面，腿软，不愿走动、步态蹒跚；濒死前出现神经系统症状，如痉挛、背脖和两腿伸直呈角弓反张状，尾部摇摆等，不久抽搐而死，病程一般2～3d。经剖检证实为注射的鸭疫里默氏杆菌所引起，而试验组（接种疫苗组）连续观察14 d后，无病例出现。说明所制自家疫苗对鸭疫里默氏杆菌病有保护作用。

经过对4批共计80只雏鸭的防治试验表明：使用以上方法制备的自家苗对鸭传染性浆膜炎有明显的防治效果。在鸭群发病时，使用疫苗1周后发病明显减少，10～15 d病症状完全消除，未见复发情况。同时，用自家苗对未发病鸭群免疫接种也能起到良好的预防效果，未见该病发生。

5 结论

笔者用自制的疫苗对发生鸭浆膜炎的鸭群进行紧急注射能很快控制疫情；对未发病的鸭群提前注射又 起到了有效预防控制的作用。因此该自家苗是防治鸭传染性浆膜炎的一种有效疫苗。

虽然自家苗具有免疫防治作用，但由于它属于生物性产品，所以要绝对注意其生物安全性。首先，目前没有什么办法去测定自定苗中具体的病原含量，这是一种运用实践来检验效果与质量的治疗方法。其次，自家苗本身就是灭活苗，无论细菌还是病毒等大多已经被杀死，而且采集的有可能是几种病混合感染的病料，所以病料成分及结构更加复杂，产生抗原的蛋白质种类也多。最后，虽然自家苗可以用，但是前提是发病比较厉害的情况下采用，不要动辄就用自家苗，那样风险会很大。

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