2010年河南信阳中小型猪场大肠杆菌病血清型调查报告

刘 涛，王 瑞，曲哲会，连慧香，魏爱枝

（信阳农业高等专科学校，河南 信阳 464000）

猪大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的仔猪的一组肠道传染性疾病，常见的有仔猪黄痢、仔猪白痢和仔猪水肿3种。以发生肠炎、肠毒血症为特征.主要发生在0～70日龄的仔猪。大肠杆菌病属于条件性致病菌，当环境因素恶劣或机体抵抗力下降时，容易引发该病的发生，尤其是冬季，天气寒冷，气温剧变，保温不良，空气流通不畅，更易引发此病，造成新生仔猪大批死亡或生长发育不良，严重影响养猪业的发展，给养猪户造成巨大的经济损失。2010年2月到11月期间，我们对信阳地区存栏母猪在100头以下的中小型养猪场开展了猪大肠杆菌病血清型流行病学调查工作。

1 材料与方法

1.1 病料 采自2010年以来河南省信阳地区平桥区、浉河区、罗山县、光山县、固始县、潢川县、新县156个发生猪大肠杆菌病的中小型养猪场；其中，肛门拭子120份，病猪空肠和小肠内容物100份，共计220份。

1.2 诊断试剂 大肠杆菌标准抗O型血清，中国兽医药品监察所提供。培养基 营养琼脂、麦康凯培养基、S.S.琼脂，青岛海博生物技术有限公司提供。微量生化反应管，青岛海博生物技术有限公司提供。

1.3 试验动物 试验小鼠（清净级），信阳职业技术学院实验动物房提供。

1.4 主要仪器 THZ-92C型台式恒温振荡器，E-200型数码摄影显微镜，PHS25型数显式酸度计，DHG-9241A型电热恒温干燥箱，WGP-300隔水式电热恒温培养箱，7230型紫外分光光度计，LDZX-50KBS型不锈钢全自动数显立式高压蒸汽灭菌器，SW-CJ-ZF型超净工作台，DW-L 中科美菱超低温冰箱。

1.5 分离培养 病料分别接种普通营养琼脂平板、鲜血琼脂平板、麦康凯平板，置37℃培养24h；涂片，革兰染色镜检，挑取培养基上的典型单个菌落，依次接种于麦康凯琼脂平板、肉汤，进行纯培养。

1.6 生化试验 取纯培养菌落接种生化反应管，于37℃培养，按说明书进行生化反应试验。

1.7 血清型鉴定 将经生理生化试验鉴定为大肠杆菌的纯培养菌株于普通琼脂培养，用2mL0.5%石碳酸生理盐水洗下以后，以2000r／min离心5 min；取其上清液，8000r／min离心10min；取其沉淀物配成菌悬液，再经121℃处理2h，破坏K抗原，即为O抗原；4℃保存，备用。按照大肠杆菌标准抗O血清凝集试验使用说明书操作。鉴定发病场猪大肠杆菌致病菌株血清型。

1.8 致病性试验 将鉴定的大肠埃希氏菌分别接种于营养肉汤培养基，37℃振荡培养，4000r／min离心20min，用等量灭菌生理盐水配制悬浮液作攻毒用。将27只小鼠，分为9组，每组3只。8个组为试验组，1个组作为对照，试验组腹腔注射悬浮液0.2mL／只。注射后每6h观察1次，连续观察72 h，剖检死亡小鼠，取肝脏，抹片，革兰染色镜检。

2 结果

2.1 流行病学调查 对2010年以来河南省信阳地区156个发生猪大肠杆菌病的养猪场进行了流行病学调查、临床检查、病理学和实验室诊断。结果发生疫情的猪群总存栏数为20656头，总发病猪4738头，病死943头，平均发病率为22.93% ，平均病死率为19.90%。其中，仔猪黄痢93次，发病猪3190头，病死542头，平均发病率为15.44%，平均病死率为16.99%；仔猪白痢43次，发病猪934头，病死128头，平均发病率为4.52%，平均病死率为13.7%；仔猪水肿20次，发病猪614头，病死72头，平均发病率为2.97%，平均病死率为11.72%（见表1）。

表1 信阳地区养猪场猪大肠杆菌病流行情况

2.2 分离培养 共分离获得70株大肠杆菌（见表2）。其在普通营养琼脂上形成为中等大小、圆形微凸、表面光滑湿润、浅灰色半透明菌落；在血液琼脂上出现菌落较大，有黏性边缘整齐，并有隆起的灰白色菌落，不溶血或β溶血；在麦康凯平板上，形成周边粉红中心深红色菌落；分离菌接种普通肉汤呈均匀混浊，管底有淡白色黏稠沉淀，轻摇呈云雾状散开，并有粪臭味。

表2 大肠杆菌分离结果

2.3 生化试验 分离到的细菌能发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖，能使麦芽糖、甘露醇产酸产气，不能发酵肌糖、木糖，不能利用枸橼酸，V-P试验（一），M.R.试验（+）。

2.4 血清型鉴定 仔猪黄痢病料分离菌株血清型分别为 O8（4株）、O9（4株）、O60（2株）、O64（2株）、O115（1株）、O149（9株）、O157（18株），仔猪白痢病料分离菌株血清型分别为 O8（6株）、O9（2株）、O139（1株）、O157（11株），仔猪水肿病料分离菌株血清型分别为 O2（1株）、O8（1株）、O139（3株）、O157（5株）。

2.5 致病性试验 接种后6h，接种O8，O9，O157的9只小鼠全部发病；24h后，接种O149的3只小鼠全部发病，接种O60，O64的6只小鼠中各有2只发病；72h后，除接种O115的3只小鼠未发病外，接种试验组小鼠全部发病。发病小鼠出现稀便，沉郁，呼吸加快，肛门周围被毛玷污；其中，接种 O8，O9，O60，O157，O139，O64菌株小鼠全部死亡，对照组和接种O115组小鼠未出现死亡。死亡小鼠肝涂片，革兰染色、镜检，结果与分离菌株镜检结果相同（见表3）。

表3 各血清型大肠杆菌致病性试验结果

3 小结与讨论

3.1 对2010年以来河南省信阳地区156个发生猪大肠杆菌病的养猪场进行了血清型流行病学调查、临床检查、病理学和实验室诊断。结果发生疫情的猪群总存栏数为20656头，总发病猪4738头，病死943头，平均发病率为22.93% ，平均病死率为19.90%。其中，仔猪黄痢93次，发病猪3190头，病死542头，平均发病率为15.44%，平均病死率为16.99%；仔猪白痢43次，发病猪934头，病死128头，平均发病率为4.52%，平均病死率为13.7%；仔猪水肿20次，发病猪614头，病死72头，平均发病率为2.97%，平均病死率为11.72%。表明致病性大肠杆菌引起的仔猪黄痢和仔猪白痢为河南省信阳地区养猪场仔猪腹泻性疾病和死亡的重要原因。

3.2 血清型鉴定共检出8种O抗原血清型，动物试验 O8，O9，O60，O64，O149，O157，O139血清型接种小鼠全部发病和致死。这一结果表明，信阳地区流行的猪大肠杆菌病血清型复杂，在防治本病时应充分注意，选择疫苗应与本地流行血清型相对应，有条件的猪场应进行血清型的诊断，或采用本地（场）菌株制造灭活疫苗进行预防接种。

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