气相色谱-电子捕获检测器法测定异氟烷的含量

褚素霞，宋更申，郭毅(河北省食品药品检验院，石家庄050011)

异氟烷(Isoflurane)是国内、外临床上广泛使用的高效、安全、稳定、低毒的吸入性全身麻醉剂[1]。现有文献[2-4]报道中，均采用氢火焰离子化检测器(FID)测定异氟烷的含量，但由于所选用溶剂在FID检测器上均有较强响应，易对含量测定产生干扰。为此，笔者根据异氟烷分子结构中含有电负性的氟原子，参考相关文献[5，6]，采用气相色谱-电子捕获检测器(GC-ECD)法测定异氟烷的含量，所选溶剂环己烷在ECD检测器上无响应，可有效避免溶剂对含量测定的干扰，同时灵敏度也有较大提高。

1 仪器与试药

6890型气相色谱仪、B.02.01-SR1工作站(美国Agilent公司)；BP 211 D型电子天平(德国Sartorius公司)。

异氟烷对照品(本院标定，批号:080011，含量:100.0%)；异氟烷(河北九派制药有限公司，批号:080308、080101、080102)；环己烷(国药集团化学试剂有限公司，色谱纯)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:HP-INNOWax毛细管柱(60 m×0.53 mm，1 μm)；柱温:75℃；检测器:ECD检测器；检测器温度:250℃；进样方式:分流进样，分流比1∶1；进样口温度:150℃；载气:氮气；流速:5 mL·min－1；进样量:1µL。

2.2 溶液的制备

对照品溶液:称取异氟烷对照品约100 mg，精密称定，置于100 mL量瓶中，加环己烷稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

供试品溶液:称取样品约100 mg，精密称定，置于100 mL量瓶中，加环己烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

阴性对照溶液:取环己烷适量，作为阴性对照溶液。

2.3 系统适用性试验

精密量取“2.2”项下的对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液适量，按“2.1”项下的色谱条件进样分析，记录色谱，见图1。

结果表明，理论板数以异氟烷峰计为18029，溶剂在此色谱条件下没有吸收峰，不干扰异氟烷的测定。

2.4 线性关系考察

取异氟烷对照品适量，分别加环己烷溶解并稀释制成每1 mL中含0.1002、0.2501、0.5006、1.008、1.201 mg的溶液，按“2.1”项下的色谱条件进样分析。以异氟烷浓度(mg·mL－1，C)为横坐标，异氟烷的峰面积为纵坐标(A)，绘制标准曲线，得回归方程A＝291008.18C+403.22(r＝0.9999)。结果表明，异氟烷检测浓度在0.1002～1.201 mg·mL－1范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.5 重复性试验

取批号为080308的样品适量，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，另取异氟烷对照品适量，按“2.2”项下方法制备对照品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进样分析，重复测定样品6次。结果，平均含量为99.9%，RSD＝0.5%，表明该方法重复性良好。

2.6 中间精密度试验

取批号为080308的样品适量，由3名不同试验者在不同时间、以不同仪器、采用不同色谱柱测定其含量。结果，RSD＝0.3%，表明本方法中间精密度良好。

2.7 稳定性试验

取批号为080308的样品适量，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12、24 h进样测定峰面积。结果，平均峰面积为29101.3，RSD＝0.5%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.8 检测限和定量限试验

用逐步稀释法进行测定，以信噪比约为3时计算检出限，以信噪比约为10时计算定量限。结果，本品检测限为0.10 pg，定量限为0.33 pg。

2.9 回收率试验

精密称取异氟烷对照品适量，分别置于100 mL量瓶中，用环己烷配制成测定浓度的80%、100%、120%的溶液，按“2.1”项下色谱条件进样分析，计算回收率。结果，平均回收率为99.90%～100.00%，RSD＝0.10%(n＝9)，表明该方法回收率良好，详见表1。

2.10 样品含量测定

取3批样品各适量，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，另取异氟烷对照品适量，按“2.2”项下方法制备对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样分析，并按外标法以峰面积计算异氟烷的含量，结果见表2。

表1 回收率试验结果(n＝9)Tab 1Results of recovery tests(n＝9)

表2 样品含量测定结果(n＝3)Tab 2 Results of content determination of sample(n＝3)

3 讨论

3.1 色谱柱的选择

HP-INNOWax是强极性毛细管柱，适用于酚、碳氢化合物、药物及醇等，比较适合用于残留溶剂分析。在该研究条件下异氟烷与溶解介质可达到有效分离，且峰形好，灵敏度高，重复性好，结果准确、可靠。

3.2 溶剂的选择

本试验采用环己烷作溶剂，环己烷在ECD检测器上无响应，可有效避免溶剂及溶剂中的杂质对含量测定的干扰。

3.3 检测器的选择

由于异氟烷中含有氟原子，采用ECD检测器测定含量，较文献[2-4]采用的FID检测器灵敏度有较大提高，可有效降低进样量，提高分离度，避免超载。该方法也适合于测定异氟烷的有关物质。

3.4 该方法具有的优势

异氟烷在本文建立的色谱条件下保留时间只有3 min，大大节约了分析时间，同时也降低了分析成本。

[1]宋更申，张毅，姜建国，等.毛细管气相色谱法测定异氟烷中的有机溶剂残留量[J].中国药房，2010，21(17):1595.

[2]李宝林.气相色谱法测定异氟烷含量[J].色谱，1994，12(6):453.

[3]刘明洁，胡德福，钱利民，等.气相色谱法测定异氟烷的含量[J].药物分析杂志，1998，18(3):196.

[4]张勇，钱广生，刘三康，等.大口径毛细管气相色谱法测定异氟烷注射液含量及有关物质[J].四川大学学报(医学版)，2006，37(1):153.

[5]宋更申，郭毅，付焱，等.毛细管气相色谱法测定盐酸美金刚原料药中三氯甲烷的残留量[J].中国药房，2010，21(37):3536.

[6]宋更申，姜建国，刘红莉，等.顶空气相色谱法测定美罗培南中有机溶剂的残留量[J].中国药房，2010，21(5):447.