高效液相色谱法测定胃痛舒片中甘草苷含量

靳茂礼，赵艳普，王润彪，郭 毅

(1.河北省石家庄市食品药品检验所，河北 石家庄 050031;2.河北省药品检验所，河北 石家庄 050011)

胃痛舒片收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂》(第十四册)，由猪胃黏膜、厚朴、海螵蛸、颠茄浸膏、甘草等5味药组方，具有健脾和胃、理气止痛的功效，用于脾胃虚弱引起的胃脘胀痛、嘈杂吞酸、消化性溃疡和慢性胃炎等症[1]。现行质量标准中只有海螵蛸的理化鉴别，不能有效控制产品质量，笔者经试验研究，建立了胃痛舒片中甘草、厚朴的薄层色谱鉴别及甘草酸的高效液相色谱(HPLC)含量测定方法[2]。现继续以甘草中黄酮类成分甘草苷作为定量指标，研究建立了测定甘草苷含量的高效液相色谱法，报道如下。

1 仪器与试药

Aglient 1200型高效液相色谱仪(四元泵、紫外检测器、自动进样器);胃痛舒片由河北金兴制药厂提供;甘草苷对照品(购自中国药品生物制品检定所，批号为111610－200604);阴性样品自制;乙腈为色谱纯，水为去离子水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Shimadzu VP －ODS柱(150 mm ×6.0 mm，5 μm);流动相:乙腈－0.5%冰醋酸(18∶82);检测波长:276 nm;流速:1 mL/min;柱温为室温;进样量:10 μL。在此条件下，样品中甘草苷与其他成分分离良好，保留时间适中，见图1。

2.2 溶液制备

图1 高效液相色谱图

取甘草苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，即得对照品溶液。取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取0.3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇溶液25 mL，密塞，称定质量，超声处理30 min，放冷，再称定质量，用70%甲醇溶液补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取不含甘草的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验:精密吸取2.2项下3种溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定。结果阴性对照品溶液色谱中，在与甘草苷对照品色谱峰保留时间相应位置无干扰，见图1。

线性关系考察:精密吸取不同量的对照品溶液，注入液相色谱仪，测定峰面积。以进样量(μg)为横坐标、峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程 Y=4.4496+1781.6 X，r=0.9999。结果表明，甘草苷进样量在0.0375－3.748 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于 0，1，4，8，14，24 h时进样1次，测定峰面积。结果的 RSD=0.59%(n=6)，表明供试品溶液至少在24 h内稳定。

重复性试验:取同一批样品，分别精密称取0.3 g，共取6份，依法制备供试品溶液，分别测定含量。结果的 RSD=1.1%(n=6)，表明方法重复性良好。

加样回收试验:精密称取已知含量的胃痛舒片样品(甘草苷含量5.06 mg/g)0.15 g，分别精密加入一定质量浓度的对照品溶液，依法测定，计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定

取8批样品，按上述方法测定，含甘草苷最低为0.65 mg/片，最高为2.48 mg/片，含量差异较大，结果见表2。

表1 甘草苷加样回收试验结果(n=6)

表2 样品含量测定结果(mg/片)

3 讨论

以流动相作溶剂，在200～350 nm波长范围内测定了甘草苷对照品的紫外光谱图，结果在217，276，311 nm波长处有最大吸收，参照2005年版《中国药典(一部)》甘草项下的测定方法，确定276 nm为测定波长。

参照文献[3－4]，以乙腈－0.5%冰醋酸(18∶82)作流动相，供试品溶液色谱分离良好，流动相配制简单，保留时间适中。曾尝试用甲醇－0.5%冰醋酸(18∶82)作流动相，结果未有效分离。

取本品，分别以甲醇、乙醇、70%甲醇、50%甲醇、30%甲醇作为提取溶剂，依法测定，结果以70%甲醇和以50%甲醇做提取溶剂结果相近，考虑到50%甲醇过滤速度较慢，选定70%甲醇作为提取溶剂。取本品，以70%甲醇溶液作为提取溶剂，分别超声提取 20，30，40 min，测得含量分别为 2.41，2.58，2.47 mg/片，确定超声时间为30 min。

分别采用不同牌号的色谱柱，如 Shimadzu VP－ODS柱(150 mm ×6.0 mm，5 μm)、Capcell PAK C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm)、Waters C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm)对同一批样品进行测定，结果都能分离完全，含量测定结果基本一致，表明该方法有良好的耐用性。

不同批号样品的含量结果差异较大，表明所投原料甘草的质量不一，2005年版《中国药典(一部)》甘草项下已收载了甘草苷的含量测定，但该品种现行标准并无相应控制手段，从一定程度上降低了对原料甘草的质量控制。该方法的建立可对胃痛舒片的质量控制提供有效技术支持。

[1]WS3－B－2741－97.中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂(第十四册)[S].

[2]赵艳普，李冬梅，袁 浩，等.胃痛舒片质量标准研究[J].中国现代应用药学，2008，25(5):431 －434.

[3]犹 卫，王 敏，马天俊.HPLC法测定复方甘草合剂中甘草苷的含量[J].资源开发与市场，2005，21(6):491－492.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:59－60.