市售不同批次西洛他唑片药物代谢动力学参数比较

汪华蓉，付珊珊，何海霞

(1.重庆三峡中心医院药学部，重庆 404000; 2.重庆医科大学附属第一医院药学部，重庆 400016)

西洛他唑是临床上用于治疗稳定性、间歇性跛行的药物[1]，疗效肯定，近年来仿制厂家较多。鉴于在重庆医科大学附属第一医院药理实验室完成的西洛他唑生物等效性试验研究中，均以中国大冢制药有限公司生产的西洛他唑片为参比制剂，故从动力学角度对其不同批次产品的血药浓度及动力学参数进行了考察和比较，现报道如下。

1 仪器与试药

日本岛津高效液相色谱仪，LC－10AT泵系统，SPD－10A型可调波长紫外检测器和C－R7Ae plus积分仪。试验药品为西洛他唑片(商品名培达片，中国大冢制药有限公司，简称CLTZT)，50 mg/片，批准文号为 H10960014，批号为 2F75P，3G93P，3J83P，050309P，050807P。西洛他唑标准对照品(简称CLTZ，山东诚创医药技术开发有限公司，批号为010604，纯度为99.83%)，精密称取21.8 mg，用适量甲醇溶解，置50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，即为436 μg/mL的CLTZ标准贮备液，使用时用甲醇稀释为43.6 μg/mL的工作质量浓度。内标物为安定(简称DZP，湖北制药厂)，精密称取DZP 40.5 mg，用适量甲醇溶解，置50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，即为810 μg/mL的DZP标准贮备液，使用时用甲醇稀释为8.1 μg/mL的工作质量浓度。

2 方法和结果

2.1 研究对象选择

选择 18～22名男性健康志愿者，汉族，平均年龄(21.8±1.37)岁，平均体重(60.2 ±5.92)kg，平均身高(169.5 ±4.90)cm。试验前所有受试者经肝功能、肾功能、血压、心电图检查均正常，于充分了解试验内容后自愿签署知情同意书。实施方案经医院伦理委员会批准。

2.2 给药方法及血样采集

试验前禁食12 h后，于次日8:00空腹吞服100 mg不同批次CLTZT(200 mL温开水送服)，服药当日统一进标准餐。受试期间禁止大量活动、吸烟、饮酒以及饮用含酒精、咖啡因类饮料，禁止服用一切非试验药物。于给药前及给药后 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，8.0，12.0，24.0，36.0，48.0 h，抽取前臂静脉血 3.0 mL，分离血浆，低温(－20℃)保存，待测。本品达峰时间(Tmax)为3～4 h左右，消除半衰期(t1/2)为 11～18 h左右[2－3]，根据 2005年版《中华人民共和国药典》中药物制剂生物利用度和生物等效性试验指导原则的要求，在达峰时间前取样3～4个点，在达峰时间后取样8～10个点，取样持续到5个半衰期以上。

2.3 血浆样品检测

2.3.1 色谱条件[2]

色谱柱:HYPERSIL C18柱(200 mm ×5.0 mm，5 μm)，预柱;流动相:磷酸盐缓冲液(0.01 moL/L KH2PO4，用 H3PO4调 pH 至4.0)－乙腈(V/V，50 ∶50);流速:1.0 mL/min;紫外检测波长:257 nm;柱温:32 ℃;内标:DZP;固定进样量:50 μL。

2.3.2 样品处理[2]

取受试者血浆 0.5 mL，加内标 40 μL(8.1 g/mL)，加乙醚4 mL，旋摇1 min，静置，取有机层置40℃水浴中用氮气吹干，100 μL流动相复溶，进样 50 μL。

2.3.3 方法学考察

线性关系考察:在空白血浆中分别添加CLTZ，使血药浓度相当于 3.0840，1.5420，0.7710，0.3855，0.1928，0.0964，0.0482，0.0241 μg/mL，按血浆样品的处理与测定方法进行处理和测定，以CLTZ峰面积/DZP峰面积比(Y)与CLTZ质量浓度(X)进行线性回归，得标准曲线方程 Y=1.2314X－0.005726，r=0.9999(n=8)。

回收率及精密度试验:按照标准曲线制作方法，采用高、中、低3个质量浓度，评价本法测定血浆中CLTZ含量的回收率，日内、日间 RSD，结果见表1。最低定量质量浓度为 0.024 μg/mL(n=5，RSD=8.12%)[3]。

稳定性试验:将CLTZ和DZP混合溶液室温放置，于0，12，24，48，60 h 时进行测定，测得 CLTZ 质量浓度分别为 0.91，1.03，1.06，0.93，0.97 μg/mL。结果表明，室温放置 60 h 内稳定性良好[(0.98 ± 0.064)μg/mL，RSD=6.53%]。

表1 回收率与精密度试验结果(n=5)

冻融试验:将含药血浆反复冷冻(－20℃)、融化，按样品处理后测定，2 d内测定5次，测得CLTZ质量浓度分别为0.50、0.50，0.51，0.50，0.47 μg/mL。结果表明，血浆样品 4 d 内反复冻融测定稳定性良好[(0.50 ±0.015)μg/mL，RSD=3.00%]。

2.3.4 样品色谱行为

在拟订的色谱条件下，CLTZ与内标DZP及血浆中内源性杂峰分离良好，见图1。

图1 高效液相色谱图

2.4 血药浓度与药代谢动力学参数

18～22名受试者单剂口服不同批次CLTZT 100 mg后，平均血药浓度见表2。采用3p97计算机软件(中国数学药理学会)，计算各个体的药物代谢动力学参数，峰浓度(Cmax)和达峰时间(tmax)以实测值计算，药时曲线下面积(AUC)按梯形面积法计算，取值范围0～48 h。有关药物代谢动力学参数见表3。

表2 受试者单剂口服CLTZT 100 mg后不同时间的血药浓度(μg/mL，n=18或 n=22，)

表2 受试者单剂口服CLTZT 100 mg后不同时间的血药浓度(μg/mL，n=18或 n=22，)

批号时间(h)2F75P 3G93P 3J83P 050309P 050807P 1.00.42 ±0.310.38 ±0.150.44 ±0.220.42 ±0.180.49 ±0.302.00.69 ±0.400.66 ±0.350.63 ±0.260.66 ±0.290.86 ±0.433.00.85 ±0.380.80 ±0.380.70 ±0.280.74 ±0.300.96 ±0.434.00.89 ±0.360.75 ±0.380.70 ±0.260.82 ±0.290.84 ±0.305.00.83 ± 0.290.59 ± 0.230.64 ± 0.230.66 ± 0.270.73 ± 0.346.00.74 ±0.300.51 ±0.200.56 ±0.220.56 ±0.260.63 ±0.308.00.58 ± 0.230.41 ± 0.150.40 ± 0.170.39 ± 0.160.41 ± 0.1912.00.35 ±0.130.25 ±0.090.30 ±0.130.24 ±0.070.26 ±0.1024.00.19 ± 0.080.16 ± 0.050.17 ± 0.060.15 ± 0.070.16 ± 0.0936.00.10 ± 0.050.10 ± 0.060.097 ± 0.060.10 ± 0.040.08 ± 0.0448.00.035 ± 0.040.06 ±0.040.043 ± 0.050.07 ±0.020.03 ±0.02

表3 不同批次CLTZT在人体内的药物代谢动力学参数比较(n=18或 n=22，)

表3 不同批次CLTZT在人体内的药物代谢动力学参数比较(n=18或 n=22，)

批号2F75P 3G93P 3J83P 050309P 050807P lag time(h)0.49 ± 0.250.53 ± 0.270.47 ± 0.310.42 ± 0.440.57 ± 0.28 t1/2α(h)3.02 ± 1.042.41 ± 0.872.27 ± 1.092.77 ± 0.602.32 ± 1.23 t1/2β(h)17.40 ±11.5814.99 ±5.0820.00 ±11.9416.10 ±4.5615.35 ±8.65 tmax(h)3.88 ± 1.193.22 ± 1.263.33 ± 1.503.28 ± 0.963.05 ± 1.05 Cmax(μg/mL)0.99 ± 0.370.87 ± 0.380.81 ± 0.270.92 ± 0.301.09 ± 0.46 AUC0－∞ [μg/(h·mL)]14.38 ± 4.4413.22 ± 5.1212.92 ± 4.4412.88 ± 2.4412.21 ± 4.49 AUC0－T[μg/(h·mL)]12.84 ± 4.1011.07 ± 3.7210.77 ± 3.3910.65 ± 2.4411.09 ± 4.09

3 讨论

[2]，在现有试验室条件下，采用高效液相色谱－紫外分光光度(HPLC－UV)法，建立了以磷酸盐缓冲液(0.01 mmol/L KH2PO4，用 H3PO4调 pH 至 4.0)－乙腈(V/V，50 ∶50)的流动相体系，并以DZP为内标，结果表明，所建立的方法峰形好，且与血浆内源性物质分离好，经方法学考察证实其回收率高、专属性强，完全能满足药代动力学研究要求。由表2和表3可见，不同批次样品每个时间点的平均血药浓度基本一致，在人体内吸收、分布、消除过程中的主要代谢动力学参数较为接近，与文献[4－5]报道较一致，表明同一厂家生产的不同批次的CLTZT在人体内的动力学过程亦较一致。在进行仿制药品的临床生物等效性试验时，不同厂家的药品剂型、生产工艺看似相同，但体外试验诸如溶出度、含量均一性、崩解度以及药物进入生物体内所发挥的作用，表现为其吸收、分布、消除的整个过程，均会影响药物的有效性。因此，故选择一个优良的参比制剂是确保仿制药品质量的关键。

本研究结果表明，中国大冢制药有限公司生产的不同批次的CLTZT在人体内的动力学过程较一致，质量稳定，是对其仿制品进行临床试验的良好参比制剂。

参考文献:

[1]陈新谦，金有豫，汤 光.新编药物学[M].第15版.北京:人民卫生出版社，2003:545.

[2]Tata PN，Fu CH，Browder，et al.The quantitative determination of cilostazol and its four metabolites in human liver minrosomal incubation mixtures by high－performance liquid chromatography[J].J pharm Biomed anal，1998，2002，18(3):441－451.

[3]曾经泽.生物药物分析[M].北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1998:214.

[4]W00 SK，Kang WK，Kwon KI.Pharmacokinetic modeling of the antiplatelet and cardiovascular effects of cilostazol in healthet humans[J].Clin Pharmacol Ther，2002，71(4):246－252.

[5]乔海灵，胡玉荣，贾琳静，等.西洛他唑片在健康人体的药物代谢动力学和生物等效性[J].中国临床药理学杂志，2004，20(6):426－429.