舒肝和胃胶囊治疗胆汁反流性胃炎实验研究

鱼 涛 赵林涛 马明弦 陕西省中医医院（西安710003）

胆汁反流性胃炎（Bile Reflux Gastritis，BRG）是一种临床上常见的胃部疾病，约占胃炎的24.2%。现在已有大量研究显示胆汁反流性胃炎与萎缩性胃炎、胃癌、Barrett食管及食管腺癌等癌前疾病和癌症密切相关。中药以其多靶点作用的特点治疗胆汁反流性胃炎显示了广阔前景，马明弦主任医师总结多年临床经验自拟并研制疏肝和胃胶囊治疗该病效果满意。笔者本实验旨在观察疏肝和胃胶囊对BRG大鼠胃排空与胃粘膜病理改变的影响，以探讨疏肝和胃胶囊治疗胆汁反流性胃炎的机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 ：SD大鼠由西安交通大学医学院实验动物中心提供，许可证号：SCXK（陕）2007－001，合格证号：0003124。

1.1.3 试剂与仪器：图像分析系统：BI－2000型，成都泰盟科技有限公司。722N型可见分光光度计：上海元板仪器有限公司生产。试剂：牛磺胆酸钠 OX BILE，胰蛋白酶 OX BILE，卵磷脂 OX BILE。

1.2 方法

1.2.1 药物配制与剂量设置：药物配制：疏肝和胃组胶囊内容物用蒸馏水溶解，达喜和吗丁啉先用研钵研细再用蒸馏水溶解。剂量设置：参考临床用量，疏肝和胃大、中、小剂量为1.12g/kg、0.56g/kg、0.28g/kg，约分别相当临床人用量的16倍、8倍、4倍，给药浓度分别为11.2%、5.6%、2.8%。阳性组灌胃吗丁啉和达喜混合液，吗丁啉剂量为4mg/kg，相当于临床人用量的8倍，浓度为0.04%；达喜剂量为0.025g/kg，相当于临床人用量的8倍，给药浓度为2%。空白组与模型组灌胃蒸馏水。各组均用蒸馏水稀释，给药体积均为10mL/kg。计算方式：如大剂量，1.12g/kg＝10mL/kg×11.2%。

1.2.2 实验原理、动物分组及给药方法 实验原理：以牛磺胆酸钠、胰酶、卵磷脂溶于水中配制成模拟胆汁反流液（胆汁反流液的制备：牛磺胆酸钠2.5g，胰酶1.5g，卵磷脂0.25g，溶于100mL蒸馏水中），反流液①可改变胃粘液特性、破坏胃粘膜屏障、刺激肥大细胞释放组胺、炎性渗出物增多、血流量减少；②使胃窦分泌胃泌素增加、胆汁激活卵磷脂酶A、胰酶引起粘膜损伤、导致炎症的存在。动物分组及给药方法：参考文献方法：取健康大鼠60只，♂♀各半，体重120～160g，根据体重均衡原则随机分为空白组、模型组、阳性组、疏肝和胃大、中、小剂量组6组，每组10只。①空白组灌胃蒸馏水，体积10mL/kg，每日1次。②模型组灌胃反流剂，体积10mL/kg，每日1次。③大剂量组灌胃11.2%疏肝和胃胶囊，体积10mL/kg，1h后灌胃反流剂，体积10mL/kg，每日1次。④中剂量组灌胃5.6%疏肝和胃胶囊，体积10mL/kg，1h后灌胃反流剂，体积10mL/kg，每日1次。⑤小剂量组灌胃2.8%疏肝和胃胶囊，体积10mL/kg，1h后灌胃反流剂，体积10mL/kg，每日1次。⑥阳性组灌胃达喜吗丁啉混合液，达喜浓度为2%，吗丁啉浓度为0.04%，体积10mL/kg，1h后灌胃反流剂，体积10mL/kg，每日1次。以上6组均给药30d。

1.2.3 样本处理：甲基橙胃残留率检测：于末次给药后禁食12h后，灌胃0.1%甲基橙溶液2mL/只，30min后①用10%的乌拉坦麻醉，备皮，开腹，迅速结扎贲门和幽门。②切除胃囊，清洗收集胃残留液，定容至10mL。③以2000转/分离心，取上清液于分光光度计在420nm处测定吸光度值，以0.1%甲基橙2mL加入10mL蒸馏水摇匀后测量其吸光度值，作为基数甲基橙光密度，按下列公式计算甲基橙胃残留率：

甲基橙胃残留率（%）＝胃甲基橙吸光度值/基数甲基橙光密度×100%

甲基橙胃残留率的高低可反映胃排空的快慢（实验过程中模型、阳性、大、中、小剂量组均死亡2只）胃黏膜病理形态变化检测：于末次给药后禁食12h后，在实验1基础上测定完甲基橙残留率后将胃部延大弯剪开胃壁，并使胃黏膜面外翻，生理盐水漂洗3遍后浸泡于4%甲醛溶液固定，石蜡包埋，做厚4μm切片用于HE染色，观察胃黏膜病理形态变化。根据评分标准评分后用T检验进统计结果（实验过程中模型、阳性、大、中、小剂量组均死亡2只）。评分标准：①炎细胞浸润轻度：炎细胞浸及黏膜表层，数量较少，计1分；中度：炎细胞浸入黏膜上2/3层，数量较多，计2分；重度：大量炎细胞浸入黏膜全层或肌层，计3分。②肠上皮化生轻度：占切片腺体1/3以下，计1分；中度：占切片腺体1/3～2/3，计2分；重度：几乎整个腺体被肠化上皮所代替，计3分。③腺体增生：根据腺管组织结构的异型性、上皮细胞的异型性及分化不成熟性，也相应分为轻、中、重3级，分别计1、2、3分。无症状者计0分。

1.3 数据统计 统计学处理采用SPSS16.0for windows统计软件分析实验结果，计量资料的数据以均数±标准差（±s）表示，用配对资料均数的t检验来检验其统计学意义，用P值来表示其差异性。

2 结 果

夕阳的余晖渐渐散去，祷过山下师生四人升起了一堆篝火。奇巧生搭了一顶简易帐篷，轩辕明从口袋里掏出几个大果子递给大家：“吃吧，这是刚才在树上摘的，暂时果腹。”

2.1 对胃排空的影响 见表1。

表1 舒肝和胃胶囊对大鼠胆汁反流性胃炎模型胃排空的影响±s）

表1 舒肝和胃胶囊对大鼠胆汁反流性胃炎模型胃排空的影响±s）

与模型组比较，△P ＜0.05，▲P ＜0.01

组别 n 剂量 甲基橙胃残留率（%空白组 10 —— 31.9±3.0▲38.7±5.4模型组 8 —— 42.4±4.6阳性组 8 达喜0.025g/kg吗丁啉4mg/kg 29.0±4.1▲疏肝和胃大剂量组 8 1.12g/kg 33.9±6.2▲疏肝和胃中剂量组 8 0.56g/kg 35.5±4.8▲疏肝和胃小剂量组 8 0.28g/kg

由表1可见，模型组甲基橙胃残留率明显高于空白组（P＜0.01）。与模型组比较，舒肝和胃胶囊1.12g/kg、0.56g/kg剂量组及阳性组，可使大鼠甲基橙胃残留率明显低于模型组（P＜0.01）。

以上表明，舒肝和胃胶囊1.12g/kg、0.56g/kg剂量组明显降低甲基橙胃残留率，促进大鼠胃排空。

2.2 对胃黏膜病理改变的影响 见表2。

表2 舒肝和胃胶囊对胆汁反流性胃炎模型大鼠胃黏膜病理改变的影响±s）

表2 舒肝和胃胶囊对胆汁反流性胃炎模型大鼠胃黏膜病理改变的影响±s）

注：与模型对照组比较，△P ＜0.05，▲P ＜0.01.

评分结果腺体增生 炎细胞浸润 肠上皮化生正常对照组 10 0.0±0.0▲ 0.6±0.5▲ 0.0±0.0分组 n▲模型组 8 1.5±0.5 2.3±0.5 2.8±0.5阳性组 8 1.0±0.0▲ 1.3±0.7△ 1.5±0.5▲舒肝和胃大剂量组 8 1.2±0.7△ 1.6±0.5▲ 1.4±0.5▲舒肝和胃中剂量组 8 1.4±0.5 2.3±0.5△ 2.1±0.6▲舒肝和胃小剂量组8 0.5±0.5 1.8±0.5 1.6±0.5

从表2可见，与空白对照组比较，模型组胃黏腺体增生、膜炎细胞浸润、肠上皮化生评分明显提高（P＜0.01），说明反流性胃炎模型成立。与模型组比较，本品1.12g/kg剂量组可降低胃黏膜腺体增生评分（P＜0.01）、炎细胞浸润评分（P＜0.01）、肠上皮化生评分（P＜0.01）；0.58g/kg剂量组可降低胃黏膜腺体增生评分（P＜0.05）、肠上皮化生评分（P＜0.01）；阳性组可降低低胃黏膜腺体增生评分（P ＜0.01）、炎细胞浸润评分（P＜0.05）、肠上皮化生评分（P ＜0.01）。（见图1－6）

图1 各组胃黏膜病理改变

以上表明，本品1.12g/kg剂量组可减轻胃黏膜腺体增生、炎细胞浸润、肠上皮化生；0.56g/kg可减轻胃黏膜腺体增生、肠上皮化生。

3 讨 论 胆汁反流性胃炎近似于中医“胆倒”、“呕吐”、“反胃”、“嘈杂”等病症，发病多于情志失调、饮食不节、劳倦过度等有关，病机为脏腑失和、气机升降失调，病位在胆、胃，涉及肝脾，病性为本虚标实，以脾胃虚弱、运化无力为本，以胆胃郁滞、胆邪逆胃、湿热蕴阻为标。以胃脘疼痛、痞满、烧心、口苦、呕吐酸苦、嗳气等为主要临床表现。舒肝和胃胶囊以柴胡温胆汤加荜橙茄、金钱草而成，温胆汤名为温胆，实为清胆，方中以柴胡、半夏为君，柴胡舒肝理气，半夏燥湿化痰、和胃降逆，以陈皮、茯苓、枳实、竹茹、荜澄茄、金钱草为臣，陈皮、茯苓、竹茹健脾化湿、理气和胃，枳实、荜澄茄降逆行气，金钱草清热利胆，生姜、大枣和中培土，且制半夏之毒，炙甘草益气和中、调和诸药为使，全方诸药合用，胆胃同治，化痰湿而不燥，清热而不寒，燥湿化痰与理气并用，利胆与和胃兼顾，痰湿热得清，胆胃得和，诸症可解。

BRG发生的机制与幽门功能紊乱，胃窦与十二指肠逆蠕动增多、胃窦收缩减弱等因素有关。陈化珠等研究认为，BRG患者胆囊排空明显不良，餐后胆囊胆汁潴留显著增多。胆汁可以改变胃粘液特性，使胃粘膜上皮细胞溶解，破坏胃粘膜屏障，使H＋逆向弥散，H＋刺激肥大细胞释放组胺，组胺使血管扩张，渗透性增加，炎性渗出物增加，并使毛细血管瘀血，血流量减少。胆汁可使胃窦分泌胃泌素增加。当胆汁、胰液混合时，胆汁激活卵磷脂酶A，使卵磷脂变为溶血卵磷脂酶，破坏胃粘膜上皮细胞。当碱性十二指肠液和酸性胃液中和，pH值接近中性时，胰酶激活也可引起粘膜损伤，这些因素导致胃粘膜慢性炎症持续存在，长期的慢性炎症又使胃粘膜屏障功能进一步降低，造成恶性循环。笔者实验研究显示，舒肝和胃胶囊1.12g/kg、0.56g/kg剂量组明显降低甲基橙胃残留率，促进大鼠胃排空。舒肝和胃胶囊1.12g/kg剂量组可减轻胃黏膜腺体增生、炎细胞浸润、肠上皮化生；0.56g/kg可减轻胃黏膜腺体增生、肠上皮化生。提示舒肝和胃胶囊正是通过对胃黏膜的保护作用以及提高胃排空率来达到对胆汁反流性胃炎的治疗作用。