辛苍鼻舒胶囊质量标准研究

李罗清

辛苍鼻舒胶囊的处方是我院五官科医生结合多年临床实践研制而成的，由细辛、乌梅、川芎、苍耳子、辛夷等中药组方，具有疏风散寒、芳香通鼻、补肺益气、活血消肿的功效，用于治疗急慢性鼻炎、副鼻窦炎、过敏性鼻炎、鼻息肉，疗效确切。为了保证该制剂疗效稳定，现对其进行质量标准研究，采用薄层色谱法对方中川芎、苍耳子、辛夷进行定性鉴别，用毛细管气相色谱法测定挥发油中α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精的含量[1]，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent7820型气相色谱仪(安捷伦科技有限公司);HPCORE色谱工作站;氢火焰离子化检测器;FC204型电子天平(上海天平仪器厂);HS6510D型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);RE－2000型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。苍耳子对照药材(批号为121030－200905)、辛夷对照药材(批号为120940－201009)、川芎对照药材(批号为120918－201009)、桉油精对照品(批号为110788－201003，纯度不小于98%)均购自中国药品生物制品检定所;α－蒎烯对照品(批号为100807，纯度不小于98%)、β－蒎烯对照品(批号为100809，纯度不小于98%)均由上海友思生物技术公司提供;辛苍鼻舒胶囊(惠州市中医医院，批号为 20100908，20100913，20101008);水为超纯水，其他试剂分别为分析纯、色谱纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

图1 苍耳子薄层色谱图

图2 川芎薄层色谱图

图3 辛夷薄层色谱图

苍耳子:取样品内容物6 g，加无水乙醇30 mL，超声回流处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇3 mL使溶解，静置，取上清液作为供试品溶液。另取苍耳子对照药材1 g，加无水乙醇10 mL，同法制成对照药材溶液。再按处方配比，取除苍耳子外的其他药材，按供试品溶液的制备方法制得阴性对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯－醋酸乙酯－甲酸(8∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%磷钼酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰。结果供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照显示无干扰。结果见图1。

川芎:取样品内容物6g，加乙醚30 mL，超声处理20 min，滤过，挥干乙醚，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取川芎对照药材1 g，加乙醚10 mL，同法制成对照药材溶液。按处方比例从中除去川芎，同法制成川芎的阴性样品，照供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷－乙酸乙酯(8∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品溶液在相应位置上无干扰。结果见图2。

辛夷:取样品内容物6 g，加甲醇30mL，超声回流提取30 min，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取辛夷对照药材1 g，加甲醇10 mL，同法制成对照药材溶液。按处方比例从中除去辛夷，同法制成川芎的阴性样品，同供试品制备方法制成阴性对照品溶液。吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一块硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)－醋酸乙酯(3∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇液，于100℃烘箱内加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照显示，无干扰。结果见图3。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱:DB－1毛细管柱(30 m ×0.25 mm，0.25μm);进样器温度:230℃;FID检测器温度:250℃;柱温:采用程序升温，起始温度为50℃，保持2 min，以8℃ /min升温至130℃，保持3 min;载气:氮气;流速:1.2 mL/min;进样方式:分流进样，分流比1 ∶10，进样量:1μL。色谱图见图 4。

2.2.2 溶液制备

图4 气相色谱图

精密量取环己酮1 mL(相当于含环乙酮959.850mg)，置10mL量瓶中，用色谱丙酮定容至10 mL，再取0.24 mL置100 mL容量瓶中，用色谱丙酮定容至刻度，得质量浓度为0.230 g/L环己酮内标溶液[2]。分别称取 α － 蒎烯 20.40 mg、β － 蒎烯 20.70 mg、桉油精75.44 mg，精密称定，置10 mL容量瓶中，用内标溶液定容至刻度，得 α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精质量浓度分别为 2.040，2.070，7.544 g/L 的对照品溶液。取本品 20 g，按 2010 年版《中国药典(一部)》附录ⅩD方法提取挥发油[3]，加无水硫酸钠脱水、振摇，于冰箱中静置过夜，脱水后，将挥发油置25 mL容量瓶中，加内标溶液2.5 mL，加正己烷定容至刻度，摇匀即得供试品溶液。取缺细辛、川芎、苍耳子、辛夷的方中其他药材，按供试品溶液的制备方法同法制成阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

阴性干扰试验:取2.2.2项下各溶液，照拟订色谱条件进样，记录色谱图，见图4。结果表明，阴性对照品溶液色谱中，在对照品溶液色谱中的吸收峰相应时间处无吸收峰，说明样品中其他药材对测定无干扰。

线性关系考察:分别精密量取α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精对照品溶液 1.1，1.1，2.6 mL，置同一 10 mL 量瓶中，得混合对照品溶液。分别精密吸取混合对照品溶液 0.2，0.4，0.6，0.8，1.2，1.6，2.0 mL 分别置 5 mL 量瓶中，分别加内标溶液 0.5 mL，加正己烷定容至刻度，摇匀，进样1μL，测定。以各对照品溶液质量浓度(X，g/L)为横坐标、以对照品与内标峰面积比值(Y)为纵坐标进行线性回归，分别得回归方程 Y=12.22 X －0.006(r=0.999 8)，Y=11.96X －0.006(r=0.9998)，Y=13.18X －0.004(r=0.9997)。结果表明，α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精质量浓度分别在0.008～0.091g/L(r=0.9998)，0.009 ～0.093 g/L(r=0.9998)，0.0604 ～0.604 g/L(r=0.999 7)范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液，在拟订的色谱条件下连续进样6次，以α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精与内标峰面积比值计算，其 RSD 分别为 1.17%(n=6)，1.13%(n=6)，1.22%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:精密吸取同一份供试品溶液，于 0，2，4，6，8，12 h时进样，以α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精与内标峰面积比值计算，其RSD 分别为 1.1%(n=6)，1.3%(n=6)，1.2%(n=6)，表明供试品溶液在12h内稳定。

重复性试验:取同一批样品(批号为20100913)，依法制备6份供试品溶液，在拟订的色谱条件下测定峰面积并计算α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精平均含量，结果分别为 0.206 0，0.256 2，1.812 6 mg，RSD 分别为 1.2%，1.1% ，1.6%(n=6)，表明方法重复性较好。

加样回收试验[4]:精密称取已知含量的同一批样品(批号为 20100913，α －蒎烯含量为 0.062 6 mg/g，β －蒎烯含量为0.059 6 mg/g，桉油精含量为 0.211 5 mg/g)5 份，每份约 2.0 g，依法制备5份供试品溶液，再分别加入 α－蒎烯0.13 mg、β－蒎烯0.12 mg、桉油精0.3 mg，依法制备供试品溶液并测定，计算平均回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n=5)

2.2.4 样品含量测定

分别精密称取3批次样品(批号为 20100910，20100913，20100916)各5 g，依法制备供试品溶液并测定。结果3批样品中α － 蒎烯含量分别为 0.314 0，0.313 2，0.312 5 mg;β － 蒎烯含量分别为 0.2956，0.2982，0.2997mg，桉油精的含量分别为 1.0122，1.057 6，1.102 8 mg，考虑到生产过程中的损耗和保存期等不稳定因素，故规定本品每粒含α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精分别不得少于 0.313 2，0.297 8，1.057 5 mg。

3 讨论

挥发油是本品的主要有效成分，具有抗过敏活性[5]，多项研究证明挥发油可用于多种鼻炎的治疗。α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精是挥发油的主要成分，测定方法比较成熟，故本次试验以α－蒎烯、β－蒎烯、桉油精为指标。笔者选用DB－1毛细管柱对这3种成分进行了分离，所得色谱图分离效果好，峰形好，无拖尾现象。在预实验中曾选择了多个化合物作为内标物，包括甲苯、水杨酸甲酯、苯甲酸乙酯、异辛烷、环乙酮、苯乙酮、萘，结果采用环乙酮分离度最好，因此确定环乙酮为内标物。本试验采用薄层色谱定性与气相色谱检测相结合，操作方便、实用，有利于综合控制辛苍鼻舒胶囊质量。

[1]杨 健，徐植灵，潘炯光，等.辛夷挥发油的成分分析[J].中国中药杂志，1998，23(5):295 －298.

[2]曾会敏，王四旺，李晓晔，等.气相色谱法测定青翘挥发油中β－蒎烯含量[J].药物分析杂志，2007，27(4):572 －574.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:附录ⅩD.

[4]马 玲，陈师农，张 毅，等.清热利湿颗粒质量标准研究[J].中国药业，2012，21(8):51－53.

[5]靖 会，佐建锋.挥发油的药理研究进展[J].西北药学杂志，2005，20(2):97－98.